芻議病毒感染免疫檢驗的研究進展

董 波 郭家香

貴州省黔西縣中心醫院檢驗科，貴州黔西 551500

1 病毒引起的免疫性損害與機制

病毒能夠長期存在于宿主的細胞內，是一類嚴格寄生在細胞內的微小生物，它能夠導致宿主細胞的功能性損害，造成機體的免疫功能受到抑制，造成機體出現免疫病理變化。①免疫抑制。病毒抑制宿主的免疫機制是通過感染免疫細胞，使免疫分子的表達下調，降低了免疫分子在血清中的濃度，以此降低了機體的免疫應答反應。②免疫損害。病毒感染導致機體出現病理性免疫應答，作用于非免疫應答器官或組織就會引起免疫損傷，造成組織或器官的損害。

病毒感染造成免疫損害的機制有很多，主要有下列幾種：①病毒感染引起免疫系統的抑制導致病毒在宿主體內成慢性感染和多重感染。②病毒編碼的蛋白質表達在細胞膜上通過依賴細胞介導的細胞毒作用和補體的激活，增強殺傷感染細胞的能力。特異性的CTL也能識別這些膜抗原，增強靶細胞的殺傷作用。③病毒抗原與抗體發生抗原抗體反應形成抗原抗體復合物，在具有路過功能的基膜及血流相對緩慢的部位沉積下來引起相應部位出項損害。④機體發生免疫應答反應過程，激活相應的補體，直接引起相應的細胞損傷引起炎癥反應。⑤由于交叉免疫反應會導致與病毒具有相同抗原表位的細胞或組織、器官在機體的免疫應答中受到免疫分子的作用而引起損害。

2 早期病毒檢驗方法

2.1 酶聯免疫吸附試驗

酶聯免疫吸附試驗又稱ELISA試驗，是將免疫反應的特異性和催化作用結合在一起的一種分析試驗，是運用已知的抗體或者抗原吸附在反應平板上，是酶標抗原抗體反應在放應平板表面上進行，常用的方法有雙抗夾心法、間接吸附試驗。其中雙抗夾心法是病毒早期的免疫學檢驗中最常用的方法，在病毒檢驗方面，酶聯免疫吸附實驗是檢驗豬偽狂犬病、藍舌病的標準檢驗方法。

2.2 免疫熒光試驗

免疫熒光試驗是一種免疫標記技術，將熒光素由于已知抗體結合形成熒光抗體，用于對待檢抗原的檢查，將反應后的抗原抗體復合物置于熒光顯微鏡下觀察，散發出相應的熒光，借此對待見標本中的抗原種類進行鑒定和判斷。免疫熒光試驗也可以將熒光素與蛋白質結合，用于抗體的檢測和定位。免疫熒光試驗具有高度的特異性、高效性和靈敏性，但檢測結果客觀性不強，技術過于復雜。

2.3 血細胞凝集試驗

血細胞凝集試驗是指血細胞有凝集的現象，由病毒感染引起的血細胞凝集試驗指的是血細胞表面有針對各種抗原的受體，當機體感染病毒以后，病毒表面的抗原與紅細胞表面的抗原受體結合，是血細胞沉降率增強，形成凝集的現象。這種方法可以定性定量檢測病毒。如果機體內存在抗病毒的抗體，那么病毒引起的血細胞凝集現象就會受到抑制，可用于病毒的檢出，血凝抑制試驗就是根據這種病毒凝聚紅細胞的能力和對相應抗體的抑制的特性設計的。血細胞凝集試驗一般用于檢測梅毒螺旋體等病毒，這種方法只能確診梅毒患者，對于其他病毒的檢測此種方法是不行的。

2.3 放射免疫技術

這種檢驗方法源自于1960年的一位德國科學家創造的放射免疫分析技術，是運用被同位素標記和未被標記的抗原與抗體之間產生競爭性抑制的方法，在體外微量性分析。放射免疫技術具有靈敏度高、簡便性、特異性等優點。但由于檢測時有放射性物質而對研究者身體具有一定的影響，檢測結果中可能會出現假陽性的結果，容易受到外界環境因素的影響而使檢測結果出現異常。就目前來看放射性免疫檢查技術主要用于對乙型肝炎病毒的分類鑒定。

2.4 中和實驗法

中和試驗有叫做標準試驗法，主要檢驗法有固定血清-稀釋病毒法和固定病毒-血清稀釋法兩種。它以檢測病毒的感染力為要特點的一種檢測手段，以病毒受到血清中和后的殘留感染力為標準來判定該免疫血清抑制病毒的擴散能力，臨床上主要用于分析病毒的抗原性和堅定病毒的類型。

2.5 免疫電泳法

免疫電泳法是利用抗原抗體的帶電性的原理，在外界環境下給予一個電場，通過觀察各種帶點的物質的運動速度和數量等情況，來判斷抗原抗體的中來以此來鑒別病毒種類的方法。

2.6 其他檢測方法

除了上述所說的檢測方法以外，鑒別病毒引起感染的方法也有很多，比如沉淀法，擴散法等技術，在病毒感染檢驗中也起到了一定的作用。

3 現代新興病毒感染免疫檢驗技術

3.1 重組免疫實驗

重組免疫試驗主要用于HIV抗體的檢測和HCV抗體的檢測中，HCV抗原的成分十分復雜，主要有特異性的非結構性抗原、結構性抗原和核心抗原。這種檢驗方法比酶聯免疫吸附試驗的比優越性體現在它是將各種抗原橫線式結合在硝酸、纖維素膜的橫條上，放置于長條凹槽反應盤中，加底物顯色后能夠提示血清中存在有針對性的抗原。此外這在臨床上檢測口蹄疫的病毒中也有相關資料記載。

3.2 發光免疫試驗

發光免疫實驗室一種將化學發光物質與機體免疫反應結合在一起的運用光反應來表示待測物質的免疫成分和濃度，是一種超微量分析、無放射性的新檢驗方法，隨著技術的發展，逐漸成熟的發光免疫試驗能夠檢測所有傳統的酶聯免疫吸附實驗和免疫熒光標記實驗的測定項目，它具有更突出的特異性和靈敏性。這種方法是可利用放光劑作為標記物在安全可行的環境中進行檢測的，以此這種技術是無害無毒的安全的檢測手段，且這種檢測無需花費很長的時間，在很短的時間內就能檢測完，這在一定程度上迎合了臨床檢測的需要，在現代化病毒檢測手段中具有良好的發展前景。

3.3 膠體金技術

膠體金技術是運用膠體金作為標志物應用于抗原抗體反應中的一種新型免疫標記技術膠體金是有氯金酸在還原劑的作用下聚集形成較小的金顆粒，可與蛋白質結合且比影響蛋白質的生物藥性。此外它還可以與其他多種生物分子結合形成特定的物理反應，因此這種檢驗技術主要用于免疫學、組織學、病理學等領域的檢驗中。該項技術具有特異性、簡便性、敏感性、安全性等優點，因此在臨床上用于HIV的篩查和人體血清甲胎蛋白的檢驗。

4 討論

病毒性感染是由病毒侵犯人體，在人體的細胞內寄生，使人體免疫力低下引起相應的免疫損害癥狀，其損害宿主的途徑有很多，可以使降低免疫功能導致機體重復感染和慢性感染；也可以通過激活補體、ADCC效應和CTL途徑導致機體出現損害。由于病毒是嚴格寄生在細胞內的，繁殖速度極快，變異的幾率極高，在臨床上僅僅依靠傳統的檢驗方法是不能滿足臨床診斷需求的，因此在技術的發展過程中，我們需要更加有優勢的檢驗方法來對病毒性感染進行更加準確的檢驗。

免疫檢驗法是通過機體感染病毒后引起的免疫應答機理，運用免疫細胞的數量和發揮的功能來做出判斷的。隨著現代生物科技的迅速發展，傳統的許多檢驗技術逐漸被新興的檢驗技術所取代，許多效能高、安全可靠、特異簡便的技術逐漸為人們所接受，盡管如此，病毒感染的檢驗仍然存在很多的問題，這些問題的根源在于個體的差異性和生物學差異性。除此以外，操作人員的技術性和方法性也會存在一定的影響，從主觀上講，技術人員的不正當測量方式，實驗室混亂的秩序，試驗底物濃度超標或無效性，錯誤地引入抑制因子等都會造成檢驗結果的較大偏差；從客觀上說，選取標本的時間、標本的來源、使用方法的不當、底物缺乏特異性等因素也會造成檢驗結果出現較大的誤差。正是因為各種因素對檢驗結果的影響，使檢驗中可能會出現假陽性的情況，這對于病毒感染引起的免疫學檢驗有一定的檢驗影響，因此，在對由病毒引起的免疫檢查中要有一個更加客觀的判定標準與認識。

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