在動物福利和“3R”原則的指導下建立貴州小型豬的實驗方法

吳曙光，王明鎮，詹新義，艾世鵬，周谷于，錢 寧

(1.貴陽中醫學院，貴陽 550002；2.南陽市第一人民醫院，南陽 473000；3.貴陽中醫學院08級中醫英語班，貴陽 550002)

隨著動物保護主義運動興起及實驗動物學“3R”原則(即reduction(減少)、rep lacement(替代)、refinement(優化))的實施，使得犬、非人靈長類實驗動物的應用越來越受到限制，而小型豬是用食用豬品種經過小型化、實驗動物標準化培育而成的實驗動物，在生物醫學研究中將逐漸代替犬和非人靈長類實驗動物。貴州小型豬是貴陽中醫學院培育的實驗用小型豬，是我國最早(1987年)通過省級鑒定的實驗用小型豬。貴州小型豬具有體型小、性情溫順、遺傳穩定、實驗耐受性強、抗病力強等優點，在形態學、生理學、代謝、疾病發生等方面與人類相似，廣泛應用于高血脂、高血壓、糖尿病、燒傷整形、骨科、口腔外科等實驗研究。一般用于動物實驗的6～12月齡貴州小型豬體重多為(10～20)kg，但是由于小型豬力量較大，實驗操作如采血、肌內注射給藥等均需要數人保定，給豬只帶來較大的刺激和恐懼，造成嚴重的應激反應。因此，我們在長期實踐中，基于動物福利要求及“3R”原則，建立了一套既能保護動物，減少實驗操作對其造成的刺激和痛苦及恐懼，又簡單方便的小型豬的動物實驗方法，介紹如下。

1 建立本單位的實驗動物倫理委員會

組織本單位專業技術人員、管理人員、飼養管理員，建立實驗動物倫理委員會，定期開展相關倫理學習和業務培訓，教育每個飼養管理員和實驗人員在生產一線和動物實驗過程中，注重動物福利中動物5大自由，實行實驗動物“3R”原則；監督本所實驗動物動物福利和“3R”原則措施實施情況。

2 飼養管理員及技術員和動物構建良好的信任關系

實驗用的小型豬是由長期馴養的家畜——地方豬種實驗動物化培養而成，在長期的馴養過程中，與人類已形成了較為密切的信任關系，所以小型豬的飼養管理工作中，飼養員要密切接觸豬群，通過氣味、聲音、飼喂、撫觸等方式和豬只建立良好的信任關系。建立相互間的信任關系以后，豬只對飼養員的操作警覺性降低，主動配合簡單的操作，有利于實驗的順利進行，給飼養管理和實驗研究帶來極大的方便。

3 肌內注射給藥方法

貴州小型豬的肌內注射給藥由飼養員或者與豬群有良好的信任關系的技術員完成。選用獸用鋼制短針頭，飼養員手持注射器，一邊用言語與動物交流，一邊緩慢靠近動物，在豬只還沒有反應過來，安靜等候的時候，迅速進針，推藥，完成肌內注射給藥的全過程。關在實驗籠內的貴州小型豬肌肉注射給藥更加輕松，打開實驗籠門，由操作者一只手固定豬只耳朵，一只手持針在頸部肌內注射給藥。在此過程中，應避免過多的陌生人在場并避免大聲喧鬧。

4 麻醉方法的建立

實驗動物麻醉常用靜脈或腹腔給藥方法［1］，小型豬由于皮膚和皮下脂肪較厚，除耳靜脈以外其余淺表靜脈不明顯，在小型豬完全清醒狀態下，進行耳靜脈注射給藥麻醉需強行保定，對豬只的刺激較大。本所在參考其他麻醉方法的基礎上，建立了肌肉注射給藥的麻醉方法：將3%的戊巴比妥鈉生理鹽水溶液(0.5m L/kg)配合速眠新II(0.5m L/kg)不同點肌內注射給藥，10min左右即可獲得良好的麻醉效果，肌肉松弛、呼吸和心律及體溫穩定，呼吸道分泌物少，整個麻醉誘導期、麻醉期、蘇醒期過程中動物沒有異常行為，保障了動物和人的安全，實驗結束之后，給予蘇醒劑使其快速蘇醒，減少麻醉造成的不良反應［2、3］。

5 貴州小型豬采血方法

豬的前腔靜脈為引導頭、頸、前肢和大部分胸腔的血液注入右心房的靜脈干，在胸腔前門由左、右頸靜脈和左、右腋靜脈匯合而成。貴州小型豬的前腔靜脈采血需進行輕度麻醉，3%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液0.3m L/kg配合速眠新II 0.3m L/kg肌內注射，待動物進入麻醉狀態，由3個助手將動物固定在仰臥位，充分暴露前肢前緣與胸骨之間形成的胸前窩，操作者取20#一次性注射器，在胸前窩處搏動最明顯的部位與動物軀體長軸和仰臥水平面各夾角45度，進針2cm～3cm，血液由于壓力自動涌入針管，固定好針管抽到需要的血液量即可拔出，干棉球壓迫止血。進針深度視動物體型大小靈活操作。

6 灌胃給藥方法

貴州小型豬的灌胃給藥需進行輕度麻醉，3%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液0.3m L/kg配合速眠新 II 0.3m L/kg，肌內注射，待動物進入麻醉后，助手扶住動物的兩前肢，將動物直立保定，用開口器打開口腔并固定，用人用胃管沿著舌根緩慢推進至45cm，初試者可以將胃管的一端伸入水中觀察是否隨著動物的呼吸冒氣泡，檢測胃管的插入是否誤插入肺部。確定胃管準確插入胃內，將藥物緩慢推入，并用一定量的生理鹽水沖洗胃管。

7 靜脈給藥方法

貴州小型豬的靜脈采血需進行輕度麻醉，3%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液0.3m L/kg配合速眠新 II 0.3m L/kg，肌內注射，待動物進入麻醉狀態。在貴州小型豬耳靜脈部位給藥，選取5#一次性注射器，由耳靜脈遠心端刺入，緩慢推入藥物。

8 貴州小型豬的心電監護

8.1 清醒狀態下的心電監護

采用美國VMED公司PC-VetGard動物遙測多參數監護分析系統，對清醒狀態下的貴州小型豬進行心電監護：給動物穿上特制的可調式馬甲，以此固定電極和信號發射裝置，通過電腦接收信號記錄及分析。在此過程中，動物在圈舍內自由活動，不受外界干擾。

8.2 麻醉狀態下的心電監護

貴州小型豬在淺表麻醉(方法同前所述)狀態下，在手術臺上仰臥體位四肢放松固定，心電圖機各導聯逐一連接好，記錄心電圖既可，動物給蘇醒劑，放回觀察室。

9 貴州小型豬安樂致死方法

國際實驗動物科學理事會(ICLAS)關于動物安樂致死方法的要求，應該避免死亡所造成的極度痛苦和應激反應；在符合實驗目的的情況下，盡可能早的終止生命；在達到實驗目的的前提下，實驗設計應盡量減少動物在實驗過程中受到的痛苦和應激反應；引起痛苦和應激反應的研究過程應該降到最低。實驗動物安樂致死方法有物理性安樂死、二氧化碳吸入法、過量麻醉結合放血等方法［4］。

小型豬屬大型的實驗動物，生命力較強，抗逆性強，不易處死，不恰當的處死措施，延長死亡過程，會對動物造成痛苦和恐懼，所以對其實行安樂死術尤為重要。在實驗結束后，不能繼續保留的豬只、或者豬只已不可能恢復時候，需采取安樂死。貴州小型豬的安樂致死主要用麻醉結合放血方法，先給予麻醉劑量的麻醉藥物(如前介紹)，待其進入麻醉狀態，心臟放血或股動脈放血致死。

10 貴州小型豬尸體及殘骸的處置

在動物福利中沒有提到實驗動物尸體的處置問題，一般是從環境污染和生物安全角度出發，要求進行無害化處理。本研究認為，實驗動物因動物實驗而獻出生命，其尸體和殘骸的妥善處置也是動物福利方面的重要體現，妥善處置實驗動物尸體及殘骸不僅是對環境保護和生物安全的必須，也是人類善待動物、感謝實驗動物對人類健康事業做出的奉獻的一種表現。貴州小型豬安樂死后的尸體及殘骸經過醫療垃圾要求包裝置于冰柜內暫時保存，進行無害化處理。

［1］施新猷.醫用實驗動物學［M］，西安市：陜西科學技術出版社，1989：423.

［2］吳曙光，佘小明，田錕，等.速眠新II對幼齡貴州小型豬外科手術中的應用研究［J］.實驗動物科學與管理，2006，23(4)：21-23.

［3］吳曙光，巫全勝，趙菊花，等.速眠新Ⅱ與戊巴比妥鈉對實驗用白香豬麻醉效果的過程［J］.實驗動物科學，2007，24(2)：24-26.

［4］秦川.實驗動物學 ［M］.北京：人民衛生出版社，2010：269.