腎陽虛證動物模型的研究進(jìn)展*

何幫劍 審校 肖魯偉 童培建

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院，浙江 杭州310005）

腎陽虛證動物模型是最早建立的中醫(yī)證候動物模型，20世紀(jì)60年代初，鄺安望等開創(chuàng)了中醫(yī)動物模型的研究，第1次將科學(xué)實(shí)驗(yàn)方法引入傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)的研究領(lǐng)域。目前腎陽虛動物模型的研制涉及西醫(yī)病理學(xué)、中醫(yī)病機(jī)學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域，根據(jù)造模機(jī)理總體分為兩大類：模擬傳統(tǒng)中醫(yī)病因?qū)W建模及病理建模（如藥物建模和手術(shù)建模）。本文就腎陽虛動物建模的研究進(jìn)展做一綜述。

1 模擬傳統(tǒng)中醫(yī)病因?qū)W建模

1.1 恐傷腎致腎陽虛動物模型 沈雁等［1］根據(jù)該理論建立驚恐傷腎腎虛證動物模型，主要有貓嚇鼠，人嚇貓及爆竹嚇狗等方法。以貓嚇鼠致恐傷腎較為常用。這種建模方式也是基于傳統(tǒng)中醫(yī)病因?qū)W理論的。這種方法利用長期恐懼刺激引起模型動物一系列心理、生理及病理上的反應(yīng)，分析其發(fā)病機(jī)制可能是精神—神經(jīng)內(nèi)分泌—效應(yīng)器之間相互關(guān)系紊亂而導(dǎo)致結(jié)構(gòu)功能與代謝上的病變。

1.2 老齡大鼠腎陽虛模型［2-4］這是生理性腎陽虛，其下丘腦的甲細(xì)胞增加，乙細(xì)胞減少，垂體前葉細(xì)胞減少，生殖器官萎縮。但臨床關(guān)于衰老本質(zhì)的研究結(jié)果并未能完全支持這種模型的腎陽虛辨證，衰老并非疾病，參與老化的因素很多，個體差異也很大，僅憑年齡或外表來判定衰老程度還不夠全面。因此用老齡動物作腎陽虛證模型還需要對其進(jìn)行辨證篩選。

1.3 先天性腎陽虛動物模型 根據(jù)初生兒體弱瘦小屬胎察怯弱腎精不足之胎怯的中醫(yī)理論，篩選初生3 d內(nèi)體質(zhì)量顯著不足的動物或利用中醫(yī)恐傷腎理論用恐嚇孕鼠造成小鼠先天腎虛。胎怯者機(jī)體宮內(nèi)發(fā)育未成熟，先天察賦不足，表現(xiàn)為生長發(fā)育遲緩，生理功能低下，其證候?yàn)槠⒛I兩虛尤以腎虛為突出［5-6］。

1.4 勞倦過度，房事不節(jié)腎陽虛模型 宋潔等［7］采用連續(xù)4周雄雌鼠比例1∶6同籠喂養(yǎng)、頻繁交配和雄鼠每日游泳，建立勞倦過度、房室不節(jié)腎陽虛小鼠模型。這種建模方式比較符合傳統(tǒng)的中醫(yī)腎陽虛病因?qū)W理論。

2 病理建模

2.1 藥物建模方法

2.1.1 激素建模 該類動物模型的造模機(jī)理［8］是用一定劑量的外源性糖皮質(zhì)激素（如氫化可的松、皮質(zhì)酮、潑尼松、強(qiáng)的松、地塞米松等）使垂體前葉的促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）釋放受抑，轉(zhuǎn)而使腎上腺皮質(zhì)分泌類固醇激素減少，動物出現(xiàn)系列“耗竭”現(xiàn)象［9-10］。該模型是目前最常用的腎陽虛模型，主要用于中藥溫腎壯陽功效的評價。但也有觀點(diǎn)［11］認(rèn)為，此類模型與人類“陽虛”有較大距離，“陽虛”患者存在皮質(zhì)功能低下，而本類“陽虛”模型是由于外源性皮質(zhì)激素的注入體內(nèi)皮質(zhì)激素并不缺乏，血漿皮質(zhì)醇反而明顯增高。此外，在大量皮質(zhì)激素作用下肝糖原增加，肝細(xì)胞漿內(nèi)糖皮質(zhì)激素受體增加，這也是同“陽虛”患者腎上腺皮質(zhì)功能低下不同的，因此認(rèn)為本模型是由于藥物體內(nèi)大量蓄積導(dǎo)致動物亞急性中毒性反應(yīng)的結(jié)果。

2.1.2 其他藥物建模 （1）氨基導(dǎo)眠能法。該法由鄺氏［12］于1987年始創(chuàng)。目前有關(guān)氨基導(dǎo)眠能腎陽虛模型的研究不多，其證型也有待于進(jìn)一步研究確定。（2）腺嘌呤法。其導(dǎo)致腎陽虛的機(jī)理是當(dāng)大劑量攝入腺嘌呤時，在黃嘌呤氧化酶的作用下將其轉(zhuǎn)變?yōu)闃O難溶解于水中的2，8-二羥基腺嘌呤并沉積于腎小管，導(dǎo)致腎功能衰竭。其機(jī)械阻塞腎小管和對腎組織的毒性作用，影響了腎的能量代謝。傅曉晴等［13］研究表明以腺嘌呤制作SD大鼠腎陽虛型慢性腎功能衰竭模型在生化研究方面達(dá)到較理想的結(jié)果，其臨床癥狀符合中醫(yī)腎陽虛型動物模型表現(xiàn)。筆者認(rèn)為此模型與西醫(yī)腎臟疾病的病理變化較吻合，其臨床癥狀又符合中醫(yī)腎陽虛型動物模型表現(xiàn)，是一種創(chuàng)新的腎陽虛動物模型。（2）羥基脲法。劉福春等［14］以不同濃度羥基脲混懸灌胃，經(jīng)7~15 d，以出現(xiàn)陽虛癥狀為度，發(fā)現(xiàn)每日7.5 mg合適劑量，17-羥醇、17-酮醇顯著降低，睪丸激素分泌減少，而腎上腺變化不大。這類建模比較接近陽虛類型。馬威等［15］用羥基脲灌胃法建立日本種雄性大耳白家兔腎陽虛模型，并用右歸丸加以治療。發(fā)現(xiàn)造模過程中家兔逐漸出現(xiàn)飲食減少、消瘦、毛發(fā)失去光澤、脫毛、體質(zhì)量和皮溫明顯下降、反應(yīng)遲鈍、倦怠、弓背等不良反應(yīng)，動物全血銅、鐵、鋅等元素含量與造模前相比均顯著降低。用右歸丸治療后以上癥狀明顯好轉(zhuǎn)，也可以佐證造模的成功。該造模方法的機(jī)理為羥基脲以抑制核苷酸還原酶達(dá)到抑制DNA合成，從而影響蛋白質(zhì)代謝，出現(xiàn)一系列虛損癥狀。符合中醫(yī)臨床患者的病期長，全身各系統(tǒng)處于低水平的表現(xiàn)。（3）他巴唑法。巴唑?yàn)榱螂孱惪辜谞钕偎?，能降腺功能，用以造模可出現(xiàn)甲減型陽虛證。歐陽軼強(qiáng)等［16］研究認(rèn)為他巴唑模型適用于模擬甲狀腺功能低下為主的腎陽虛證，其他方面的病理改變不明顯，雄性大鼠和雌性大鼠均可使用作。（4）苯甲酸雌二醇法。該藥可誘發(fā)鼠下丘腦－垂體－性腺軸受抑而造成腎陽虛模型。動物出現(xiàn)活動能力減弱，抗疲勞下降等表現(xiàn)。范景等［17］對ICR小鼠按0.1 mL/10g腹腔注射0.4 mg/mL的苯甲酸雌二醇大豆油稀釋液，每日1次，連續(xù)治療15 d，造成腎陽虛模型。

2.2 手術(shù)建模 （1）甲狀腺切除法。甲狀腺機(jī)能減退者體內(nèi)的代謝普遍減慢，基礎(chǔ)代謝率降低，中醫(yī)辨證甲減患者大多具有脾腎陽虛癥狀，以溫腎補(bǔ)陽藥治療，臨床癥狀好轉(zhuǎn)，基礎(chǔ)代謝率升高，血漿cAMP升高。因此切除動物甲狀腺造成的“陽虛”動物模型可模擬人類的陽虛證。盧德趙等［18］采用切除SD大鼠甲狀腺，喂養(yǎng)7 d后大鼠現(xiàn)少食少飲、體質(zhì)量減輕、反應(yīng)遲鈍、活動減少、拱背聳、毛色無光澤、易脫落、大便稀溏等腎陽虛癥狀，并應(yīng)用差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究腎陽虛大鼠肝線粒體蛋白質(zhì)組，認(rèn)為腎陽虛大鼠可能因糖類和脂類物質(zhì)分解代謝受抑以及細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常而出現(xiàn)虛寒癥狀。（2）腎上腺切除法。盧德趙等［19］切除大鼠兩側(cè)腎上腺，喂養(yǎng)6 d后大鼠出現(xiàn)飲食明顯減少、體質(zhì)量減輕、反應(yīng)遲鈍、拱背聳毛毛色無光澤、有脫毛現(xiàn)象，大便稀溏等腎陽虛癥狀，這符合腎上腺功能減退病理。但筆者認(rèn)為該法由于切斷了下丘腦－垂體－腎上腺皮質(zhì)軸的反饋途徑，與臨床實(shí)際相距太遠(yuǎn)。（3）去勢法。該法用手術(shù)切除雄性動物雙側(cè)睪丸或雌性動物雙側(cè)卵巢，目的在于模擬中醫(yī)腎虛精少，腎陽虛的病機(jī)。史宏等［20］制備去勢及藥物（氫化可的松）誘發(fā)腎陽虛小鼠模型，觀察復(fù)方仙脾合劑的壯陽效果及免疫功能，觀察小鼠陰莖勃起的潛伏時間及抗應(yīng)激反應(yīng)，認(rèn)為復(fù)方仙脾合劑對去勢及藥物誘發(fā)的腎陽虛小鼠有一定補(bǔ)腎壯陽作用，對腎陽虛小鼠應(yīng)激能力及免疫功能有較好的提高作用。然而單純以去除內(nèi)生殖器的方法模擬的腎陽虛是片面的，去勢不是腎陽虛建模的適合方法，同樣也切斷了性腺軸的反饋途徑。

2.3 其他方法 包括人工高血糖法、鎖陽水灌注法、慶大霉素法、環(huán)磷酰胺法［21-24］。但應(yīng)用均較少。

3 結(jié) 語

盡管目前腎陽虛證造模方法較多，可分為中醫(yī)病因、藥物及手術(shù)建模，但仍存在較多的缺陷與不足。（1）各種方法在給藥途徑、劑量、時間上存在較大的差異，目前尚缺乏客觀的比較與評估，這給模型的引用帶來一定的困難，同時也影響實(shí)驗(yàn)的科學(xué)性和準(zhǔn)確性；（2）目前許多病理建模方法與中醫(yī)證候無關(guān)，且缺乏方法學(xué)和相關(guān)影響因素的研究，模型重復(fù)性差；（3）目前模型驗(yàn)證的方法多停留在對某些指標(biāo)的檢測上，缺乏陽性藥物的反證；（4）以傳統(tǒng)病因造模的方式較少，其是否符合實(shí)際、如何評估，還要進(jìn)行深入的探索。

在今后復(fù)制腎證模型工作中應(yīng)做到：（1）首先要深入理解中醫(yī)理論對腎的論述，這樣才能更好的開展腎的研究及腎證動物模型的復(fù)制工作；（2）在進(jìn)行復(fù)制時應(yīng)首先以中醫(yī)病因病機(jī)理論為指導(dǎo)，復(fù)制的方法應(yīng)盡量符合中醫(yī)理論；（3）中醫(yī)腎與內(nèi)分泌系統(tǒng)的關(guān)系應(yīng)進(jìn)一步研究；（4）今后應(yīng)進(jìn)一步在動物的品種、品系、造模方式、藥物的劑量、給藥方式、給藥時間等方面進(jìn)行優(yōu)化，并使之規(guī)范化。

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