雞甲胺磷中毒性神經肌病模型的建立及電生理研究

胡軼虹， 金梅香， 郭爾平， 江新梅

近年來人們關注急性有機磷中毒后引起遲發性周圍神經病(organophosphate induced delayed neuropathy，OPIDN)的研究，本病多發生于急性中毒后20d左右，主要表現為感覺-運動性多發性神經病，其特點為運動重于感覺，遠端重于近端，下肢重于上肢，發生率5%左右［1］。有學者試圖以伴或不伴有感覺障礙將其分為“遲發性神經炎”和“中毒性肌病”［2］，本文中仍延用“遲發性神經病”。本病的發生與有機磷農藥的種類、中毒途徑及中毒量有關。本研究用甲胺磷使leghorn雞染毒，將在出現遲發性神經病臨床表現前進行神經電生理檢測，并通過動態觀察電生理變化評估預后。

1 材料與方法

1．1 動物來源及分組 萊亨母雞50只，雞齡8～14 個月，體重1．5 ±0．5kg，營養良好，購自長春市生物制品所免疫室。隨機分為5組(n=10)，以同樣方式染毒，分別于第 1、2、3、4、8 周取材。

1．2 主要試劑 硫酸阿托品注射液購自河北省鄭州獸藥廠，50%甲胺磷乳油購自湖北沙隆達股份有限公司。實驗用臺式液(試劑購自北京化工廠):氯化鈉 8．0g，氯化鉀 0．2g，氯化鈣0．2g，碳酸氫鈉 1．0g，磷酸二氫鈉 0．05g，氯化鎂 0．1g，葡萄糖1．0 g，蒸餾水加至 1000ml。

1．3 動物模型的建立 這些Leghorn雞實驗前稱重，單只飼養于底是鐵絲網眼的鐵絲籠(0．5×0．5×0．8m)之中，房間的溫度控制在21℃ ～23℃，每12h光照/12h黑暗為一個循環，甲胺磷用植物油溶解，濃度為5mg/ml，按2ml/kg體積通過套管直接灌入已斷食24h的雞素囊中，染毒的雞用阿托品保持度過急性期。

1．4 標本的留取 分別于染毒后1、2、3、4、8w留取標本。雞在腹腔注射水合氯醛麻醉下，固定在特制木板上，室溫25℃，下肢去皮，在髂關節處沿坐骨神經走行鈍性剝離肌肉，用玻璃分針游離坐骨神經，至膝關節分為脛神經和腓神經，于髂關節及膝關節兩處用小剪刀剪斷，取坐骨神經長約3cm浸于臺式液中，除去周圍脂肪組織，進行電生理檢測。

1．5 主要儀器及電生理學檢測方法 連接Powerlab生物信號記錄儀(澳大利亞艾德公司生產，吉林大學生理實驗室提供)各組件，打開電源開關，予熱20～30min。將神經屏蔽盒的所有電極用臺氏液棉球擦拭，然后用一臺氏液浸濕的棉線調試記錄儀。其后將神經粗的一端放在刺激電極上，細的一端放在記錄電極上。蓋上屏蔽盒，在50Hz交流干擾小的情況下進行實驗。調節刺激強度，從0．1v開始，逐漸增加刺激強度至產生雙向動作電位，當刺激強度增至1v，動作電位不再加大，記錄刺激偽跡前沿到動作電位起始處時間間隔即為潛伏期，動作電位的上相波頂點與下相波的最低點之間的距離即為波幅。運動神經傳導速度的測定基本同前，近端置于刺激電極上，遠端置于兩個記錄電極上，兩記錄電極間距離為2．5cm，放大器有A、B兩組，示波器Y上和Y下條件一致(放大倍數均為500)，按刺激器起動鈕可產生上下兩個動作電位，用兩記錄電極間距離除以兩動作電位潛伏期差即為神經傳導速度。

1．6 臨床觀察 每日觀察遲發性神經毒性的臨床體征，臨床OPIDN的分級標準依照1987年Robertson的分級標準［3］，0級:沒有體征;1級:步態異常;2級:動物用后臀休息后但還能站立;3級:完全癱瘓。

2 結果

2．1 模型死亡、體征變化 雞經甲胺磷染毒后5～10min即表現萎靡、流涎、瞳孔縮小、喜臥，從第2天開始有動物死亡，共死亡6只，死亡時間為2～6d，實驗組平均死亡率為12%。之后經過1w左右的潛伏期，出現周圍神經病的癥狀，動物的表現開始呈全身無力狀態，喜臥，后出現步態不穩，逐漸發展為站立困難，此期肌力下降表現為1級及2級，無完全癱瘓者，至4w完全恢復正常，總發病率為15．9%。

2．2 電生理檢測結果 染毒后1w，波幅有明顯降低，而運動神經傳導速度無明顯改變，提示周圍神經早期以軸索損害為主。其后2、3w波幅逐漸升高，至第4周波幅已近恢復正常。染毒后2w出現潛伏期延長，運動神經傳導速度減慢，提示出現脫髓鞘改變，至第8周運動神經傳導速度已恢復正常。電生理檢測陽性率為90%(見表1)。

表1 坐骨神經電生理動態變化表(±s)

表1 坐骨神經電生理動態變化表(±s)

波幅1、2、3 與4、8w 間有顯著性差異 P ＜0．05;遠端潛伏期1、8w 與2、3、4w 間有顯著性差異 P ＜0．05;運動神經傳導速度 1、8w 與 2、3、4w間有顯著性差異P＜0．05

1w 2w 3w 4w 8w波幅(mV)遠端潛伏期(ms)運動神經傳導速度(m/s)5．98 ±0．71 0．99 ±0．08 28．21 ±2．70 4．87 ±1．83 1．25 ±0．09 21．56 ±1．48 10．60 ±1．14 1．24 ±0．23 21．52 ±3．73 12．06 ±0．46 1．26 ±0．09 20．76 ±1．70 11．75 ±1．17 1．08 ±0．11 24．83 ±2．50

3 討論

甲胺磷(又名多滅磷或克螨隆:Methamidophos/Tamaron，化學名 O，S-二甲基-硫代磷酰胺:OS-dimethylphosphoramidothiolate)屬硫代磷酸酯類化合物，高毒，是一種高效、內吸、觸殺、低殘留、廣譜性有機磷殺蟲劑，對人、畜高毒［4］。不同途徑包括消化道、呼吸道和皮膚接觸均可造成急性中毒，但以消化道中毒所致遲發性神經病的機率最大。不同的有機磷農藥引起的OPIDN有種屬特異性，以人類和雞最為敏感，而嚙齒動物則不敏感［5］。鑒于消化道染毒毒物劑量易于控制，雞對甲胺磷的敏感性高，我們本次實驗選用萊亨母雞進行甲胺磷染毒制成遲發性神經病的動物模型。萊亨母雞在染毒后1w出現周圍神經電生理改變(陽性率90%)，2w出現不同程度的步態異常(總發病率15．9%)，說明我們成功的構建了遲發性神經病的動物模型。

1987年Senanayake首次報道急性有機磷中毒后1～4d可發生一種以肌無力為突出表現的綜合征，因發病時間居于急性膽堿能危象和遲發性周圍神經病之間被稱為中間綜合征［6］，為有機磷中毒的主要病死原因。本實驗動物染毒后已用阿托品搶救度過急性期，死亡時間主要在2～6d的主要原因可能是中間綜合征。

聶淑敏等［7］提出中毒引起的周圍神經變性，先影響最長神經的末稍端，而后慢慢地向中樞段擴布。王海鳳對28例患者臨床及神經肌電分析后，認為有機磷殺蟲藥中毒后遲發性神經病是一種以軸索病變為主的周圍運動神經病［8］。本實驗電生理檢測顯示染毒后1w出現波幅明顯降低，2w出現運動神經傳導速度減慢，但比波幅改變輕，這與上述臨床分析完全吻合。中毒性變性的原發病變可能主要在胞體，是代謝性障礙，導致軸漿流中營養成分減少，供應末梢減少，很少有脫髓鞘變化。因此中毒變性時，主要表現為動作電位波幅劇減，而運動神經傳導速度大多正常或輕度減慢。

趙寧軍等［9］對26例有機磷農藥中毒致遲發性神經病患者進行電生理檢測，有5例出現早期電生理改變，明顯早于臨床體征的出現。本實驗也發現了與臨床相似的結果，即電生理改變(染毒后1w)明顯早于臨床體征(染毒后2w)的出現，電生理檢測的陽性率(90%)也明顯高于臨床體征的陽性率(15．9%)，而臨床體征的恢復(4w)也明顯早于電生理改變的恢復(8w)。因此，對有機磷殺蟲藥中毒的患者急性中毒癥狀消失后，還應密切觀察，及時了解有無遲發性周圍神經損害。神經電生理檢測可早期協助本病的診斷，應定期檢查，同時對神經修復的預后判定不能單純依靠臨床體征，應結合電生理檢查綜合判定。

目前該病發病機制尚不明確，因此尚無特異的治療方法。李芳健等［10］對132例急性有機磷中毒者臨床結局2年后隨訪調查研究發現，中毒后1年內OPIDP發生率為9．17%，其中僅5例赴醫院醫治，1例6個月后完全恢復，其余未經醫院治療也有不同程度好轉。本實驗在萊亨母雞染毒后，只應用阿托品渡過急性期，未應用其他藥物干預治療，臨床體征(4w)及電生理檢測(8w)均有不同程度的好轉，提示本病有自愈傾向。

［1］王漢斌，阮金秀．急性有機磷農藥中毒致臟器損害與并發癥的防治［J］．中華急診醫學雜志，2001，10:285 －287．

［2］吳祖舜，王小冬，程寶庚，等．實驗性甲胺磷中毒的肌肉與神經病理研究［J］．臨床神經病學雜志，1992，5:73 －75．

［3］Robertson DG，Schwab BW，Sills RD，et al．Electrophysiologic changes following treatment with organophosphorus-induced delayed neuropathy-producing agents in the adult hen［J］．Toxicol Appl Pharmacol，1987，87:420 －429．

［4］范永仙，陳小龍，姜曉平，等．甲胺磷農藥的生物降解研究進展［J］．微生物學雜志，2002，22:45 －47．

［5］郭 斌，郭麗華，郭洪志，等．有機磷中毒引起的遲發性神經病的臨床與電生理研究［J］．中風與神經疾病雜志，1997，14:186－187．

［6］Sennanyak N，Karakkiedde L．Neurotoxic effects of organophosphorus insecticides:an intermediate syndrome［J］．New Engl J Med，1987，316:761－763．

［7］聶淑敏，劉向軍，解玉梅，等．有機磷中毒并發周圍神經損害電生理分析［J］．實用醫技雜志，2004，11:2205．

［8］王海鳳．有機磷中毒后遲發性神經病28例的臨床與神經肌電圖分析［J］．臨床腦電學雜志，2000，9:232－233．

［9］趙寧軍，燕憲亮，卓曉英，等．26例有機磷農藥中毒致遲發性神經病的臨床表現和神經電生理分析［J］．中國急救醫學，2010，30:1030－1032．

［10］李芳健，何鳳生，崔樹偉，等．急性有機磷中毒者臨床結局2年后的隨訪調查［J］．中國公共衛生，2004，20:731 －733．