貞芪酪蛋白肽復合物對Lew is肺癌荷瘤小鼠抗瘤作用及對IL-2、TNF的影響

吳建軍，金玉，張延英，劉潤，李海龍，吳紅彥，李應東，劉凱

(1.甘肅中醫學院，甘肅蘭州730000;2.蘭州大學基礎醫學院中西醫結合研究所，甘肅蘭州730000)

國外酪蛋白多肽在保健品、醫藥等多領域廣泛使用。酪蛋白是乳中含量最高的蛋白質，目前主要作為食品原料或微生物培養基使用，利用蛋白質酶促水解技術制得的酪蛋白磷酸肽具有防止礦物質流失、預防齲齒，防治骨質疏松與佝僂病，調節血壓，治療缺鐵性貧血、缺鎂性神經炎等多種生理功效［1－2］。貞芪酪蛋白肽是根據祖國醫學“扶正培本、扶正驅邪”的理論，以黃芪、女貞子及酪蛋白按照一定比例的復合多肽組方，經特定制劑工藝研制而成的。貞芪酪蛋白肽復合物藥物血清具有對肝癌肺癌等腫瘤細胞的抑制作用［3－4］，具有提高大鼠機體的免疫力，保護骨髓和腎上腺皮質功能的作用［5－6］。貞芪酪蛋白肽復合物在體抗腫瘤及對荷瘤鼠血清細胞因子調節作用需要進一步明確，白細胞介素－2(interleukin－2，IL－2)是T細胞產生的具有廣泛生物活性的細胞因子、腫瘤壞死因子－α(Tumor Necrosis Factor，TNF)是一種能夠直接殺傷腫瘤細胞而對正常細胞無明顯毒性的細胞因子［7］。本研究利用Lewis肺癌荷瘤鼠模型對貞芪酪蛋白肽復合物抗腫瘤進行研究，并試圖從體內揭示貞芪酪蛋白肽復合物對荷瘤鼠免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 動物模型與瘤株SPF級8周齡昆明種小鼠72只，雌性，體質量18～24 g，由甘肅中醫學院動物實驗中心提供，選用培養的Lewis肺癌細胞，按1∶3比例制成瘤細胞懸液，常規接種在小鼠右前肢腋窩下，每只接種0.2 mL(瘤細胞數量為106個/mL)。Lewis肺癌由中國醫科大學腫瘤研究所提供，甘肅中醫學院長期移植傳代。

1.2 藥物配制與試劑貞芪酪蛋白復合肽，由甘肅中醫學院科研中心制備，為棕褐色顆粒狀。α腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor－α，TNF－α)、白細胞介素2(Interleukin－2，IL－2)多重抗體試劑購于美國BD公司，其余試劑為國產分析純。

1.3 給藥方法與分組將72只小鼠除隨機抽取12只作為陰性對照組之外，其余接種后24 h移植瘤小鼠隨機分為5組，分別模型組，陽性對照組，貞芪酪蛋白肽復合物1.5、3.1、3.5 g/kg 3個劑量組，陽性藥物采用金復康口服液(江中集團一村制藥有限責任公司生產，批號101208，給藥劑量0.1 mL/10 g);連續灌胃給藥10 d，第11天小鼠眼球放血后脫頸處死，2 000 r/min離心制備小鼠血清，利用美國BD公司液相多重檢測細胞因子過程說明在流式細胞儀上對IL－2和TNF進行檢測，剝離并摘除荷瘤鼠實體瘤、胸腺及脾臟稱質量。

1.4 統計方法瘤質量、脾臟指數、胸腺指數及IL－2和TNF計量資料用±s表示，服從正態分布采用單因素方差分析，兩兩之間比較采用q檢驗，對計量資料不服從正態分布采用秩和檢驗;所有數據均用SPSS13.0軟件分析，用P≤0.05做為檢驗水準。

抑制率(%)=［(模型對照組瘤質量－實驗組瘤質量)/模型對照組瘤質量］×100%

2 結果

2.1 對荷瘤小鼠實體瘤瘤質量的影響給藥10 d后處死小鼠剝離實體瘤，對實體瘤采用同樣方法剝離，剝離后瘤質量馬上稱質量，貞芪酪蛋白多肽復合物高劑量組瘤質量與模型組比較有統計學意義(P＜0.05)。具體數據見表1。

表1 貞芪酪蛋白多肽復合物對荷瘤鼠瘤質量的影響Tab.1 Effects of Zhenqi Casein Peptide Complexes on the tumor-bearing m ice tumor weight

2.2 對荷瘤鼠胸腺指數和脾臟指數的影響貞芪酪蛋白多肽復合物高、中劑量組荷瘤小鼠胸腺指數與模型組比較，均有統計學意義(P＜0.05)，低劑量組無統計學意義(P＞0.05)。貞芪酪蛋白多肽復合物高劑量組荷瘤小鼠脾臟指數與模型組比較，有統計學意義(P＜0.05)，中、低劑量組無統計學意義(P＞0.05)，結果見圖1。

2.3 對荷瘤鼠細胞因子IL－2、TNF的影響貞芪酪蛋白各劑量組荷瘤小鼠血清IL－2、TNF水平呈劑量依賴性升高，貞芪酪蛋白高、中劑量組荷瘤小鼠血清IL－2水平與模型組比較均有統計學意義(P＜0.01)，貞芪酪蛋白高劑量組荷瘤小鼠血清TNF水平與模型組比較均有統計學意義(P＜0.05)，結果見表2。

圖1 貞芪酪蛋白多肽復合物對荷瘤小鼠胸腺指數和脾臟指數的影響Fig.1 Effects of Zhenqi Casein Peptide Com plexes on the tumor-bearing m ice thymus index and spleen index

表2 貞芪酪蛋白多肽復合物對荷瘤小鼠血清IL-2，TNF的影響Tab.2 Effects of Zhenqi Casein Peptide Complexes on the tumor-bearing m ice serum IL-2 and TNF

3 討論

中醫認為腫瘤的發生與轉移是由于臟腑機能減退，陰陽氣血失調，正氣虧虛所致。腫瘤的發病原因比較復雜，早期的預防對腫瘤的防治極其重要，但現實是腫瘤病人大多會由于發現遲而失去手術根除的機會，所以對中、晚期腫瘤病人以提高病人的生存質量、延長存活時間作為臨床的主要選擇。目前，中西醫治療腫瘤是未來發展的主要方向，中藥方劑治療疾病的作用通常是多靶點、多途徑、多層次的整體水平的調節作用，從整體上“扶正驅邪”，回復“正氣”，提高人的抗病能力，達到“正氣在內，邪不可干”的治療效果。貞芪酪蛋白復合物是根據祖國醫學“扶正培本、扶正驅邪”的理論研制而成，黃芪為補氣升陽藥物，具有很多功效，黃芪能增強單核巨噬細胞的活性，能促進T細胞，自然殺傷細胞(NK細胞)釋放免疫活性物質如干擾素、白細胞介素等［8－9］;女貞子有滋補肝腎、明目烏發的功效，女貞子也是目前抗衰老、抗腫瘤方劑中的主要藥物之一［10－11］。酪蛋白多肽(Casein peptides)能促進機體對微量元素的高效吸收，并調節機體免疫功能［12－13］。IL－2是T細胞和NK細胞發揮作用參與免疫反應的關鍵參與者，同樣IL－2水平的升高是誘導腫瘤細胞凋亡的重要信號［14－15］。TNF是促進炎性反應的重要物質［16］，TNF能夠有效的促進腫瘤組織壞死，其機理可能與T細胞參與的細胞凋亡有關［17］。文獻報道的扶正抗瘤方與化療藥物合用具有增效減毒作用，主要通過提高機體免疫力，改善化療藥物對機體的損傷功效［18］。本研究顯示，高劑量貞芪酪蛋白多肽復合物能明顯抑制腫瘤生長，提示貞芪酪蛋白肽的抗腫瘤作用，貞芪酪蛋白復合物還能夠調節血清IL－2和TNF水平，說明調節免疫功能是其抗腫瘤作用機制的途徑之一。

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