野金柴化學成分的分離和研究

金弘昕，趙亞，賴小平，2，陳建南，2，黃松，2*

(1.廣州中醫藥大學新藥開發研究中心，廣東廣州510006;2.東莞廣州中醫藥大學中醫藥數理工程研究院，廣東東莞523808)

野金柴，來源于殼斗科櫟屬植物多穗石柯Lithocarpus polystachyusRehd的干燥葉［1］，又名多穗柯。多以野生狀態分布于長江以南各省區，而以江西、湖南、福建、廣西、安徽等省資源最為集中［2］。黃酮為其主要成分［3］，含有量高達9.0%～14.60%?，F代醫學研究表明［4］，野金柴具有清熱利尿、潤肺鎮咳、滋潤肝腎等功效，可用于防治溫熱痢疾、癰疽惡瘡、皮膚瘙癢等癥，還有“三抗”、“三降”的作用。目前，野金柴在國內有多方面的成分研究［5-7］，但其分離方法多較為繁瑣，且分離效果不佳。本實驗介紹了分離野金柴化學成分的一種新的系統方法，最終分離得到7種化學成分，進行結構鑒定后分別確定為胡蘿卜苷(1)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(2)，槲皮苷(3)，3-羥基根皮苷(4)，根皮苷(5)，山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(6)，齊墩果酸(7)。該分離方法不僅首次從野金柴中分離得到山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷，而且明顯改善了其它黃酮類成分的分離效果，尤其使低含有量的黃酮類成分的分離效率顯著提高，比如槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

1 儀器與材料

核磁共振波譜儀(BRUKER AV 300 MHz)，分析電子天平(佛山市華天力電子天平廠)，EYELA SB—1000旋轉蒸發儀(上海愛朗儀器有限公司)，SHZ—D(Ⅲ)循環水式真空泵(鞏義市予華儀器廠)，HWS24型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科技有限公司)，ACO—001電磁式空氣泵(廣東日生集團有限公司)，VGT—2013QTD超聲儀，DZF—6020型真空干燥箱(上海博訊實業有限責任公司醫療設備廠)，島津LC—8A制備型高效液相色譜儀，島津LC—20AT分析型高效液相儀。

100～200目聚酰胺層析粉(臺州路橋四甲生化塑料廠)，AA12S50型C18反相柱層析粉(北京金歐亞科技發展有限公司)，制備液相分離用色譜甲醇，其他所有試劑均為分析純。

野金柴藥材采集于湖南漣原縣，經廣州中醫藥大學新藥開發研究中心陳建南研究員鑒定為殼斗科植物Lithocarpus polystachyusRehd的干燥葉，標本存放于廣州中醫藥大學新藥開發研究中心。

2 提取分離

稱取500 g干燥野金柴爆破粉，加蒸餾水混合，70℃水浴加熱攪拌使其溶解完全。經乙酸乙酯充分萃取3次，棄去水層，乙酸乙酯層合并，減壓濃縮回收溶劑，并用分析甲醇洗出，共得到樣品100 mL左右。

樣品先經過C18反相色譜柱(20%，30%，40%甲醇水液梯度洗脫)分離，用聚酰胺薄層板展開劑乙酸乙酯-甲醇-冰乙酸-水(15∶2∶1∶1)，2%氯化鋁乙醇溶液顯色檢驗成分，再分別將20%甲醇洗脫部分和30%甲醇洗脫部分過聚酰胺色譜柱(條件均為20%，30%，40%乙醇水液梯度洗脫)，等分收集，同樣經過聚酰胺薄層板的觀察，合并相同物，再通過高效液相色譜的檢驗，選擇有效合并物。最后采用制備液相(固相種類為ODS，流動相為40%色譜甲醇水溶液)逐一分離純化，最終得到單體化合物1(30 mg)，2(52 mg)，3(88 mg)，4(191 mg)，5(377 mg)，6(55 mg)，7(25 mg)。

3 結構鑒定

化合物1:白色粉末，mp 293～294℃。紫外燈下無熒光，5%硫酸-乙醇顯色為紅色。其IR、Rf值與胡蘿卜苷對照品一致，與胡蘿卜苷對照品混合熔點不下降，故鑒定化合物1為胡蘿卜苷。

化合物2:淡黃色粉末，Mg-HCl反應陽性，Molish反應陽性。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:3.1～3.6(6H，m，H-2″-6″)，5.45(1H，d，H-1″)，6.19(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，6.39(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.84(1H，d，J=9 Hz，H-5')，7.57(1H，dd，J=8.4，2.1 Hz，H-6')，7.59(1H，d，J=2.1 Hz，H-2');13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:60.97(C-6″)，69.93(C-4″)，74.10(C-2″)，76.51(C-3″)，77.57(C-5″)，93.53(C-8)，98.7(C-6)，100.86(C-1″)，103.92(C-10)，115.21(C-5')，116.18(C-2')，121.16(C-1')，121.60(C-6')，133.30(C-3)，144.82(C-3')，148.48(C-4')，156.15(C-9)，156.4(C-2)，161.24(C-5)，164.3(C-7)，177.42(C-4)。綜合解析以上數據，文獻［8］報道一致，故確定該化合物為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物3:黃色顆粒狀結晶(甲醇)，Mg-HCl反應呈陽性，Molish反應陽性。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:0.81(3H，d，J=6.0 Hz，CH3)，3.1～3.9(4H，m，H-2″-5″)，5.26(1H，brs，H-1″)，6.20(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.39(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.86(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.25(1H，dd，J=8.4，2.1 Hz，H-6')，7.30(1H，d，J=2.1 Hz，H-2');13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:17.5(C-6″)，70.3(C-2″)，70.6(C-3″)，70.0(C-5″)，71.2(C-4″)，93.6(C-8)，98.7(C-6)，101.8(C-1″)，104.0(C-10)，115.4(C-2')，115.6(C-5')，120.7(C-1')，121.1(C-6')，134.2(C-3)，145.2(C-3')，148.4(C-4')，156.4(C-2)，157.3(C-9)，161.3(C-5)，164.3(C-7)，177.7(C-4)。綜合解析以上數據，和文獻［9］報道一致，故確定該化合物為槲皮苷。

化合物4:白色晶體，Molish反應陽性。根據核磁共振波譜的解析，1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:2.77(2H，t，J=7.2，7.2 Hz，H-β)，3.17～3.73(5H，m，H-2″-6″)，4.57(2H，t，J=7.2，7.2 Hz，H-α)，4.92(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，5.92(1H，d，J=2.1 Hz，H-3')，6.12(1H，d，J=2.1 Hz，H-5')，6.47(1H，dd，J=7.2，1.8 Hz，H-6)，6.58(1H，d，J=1.8 Hz，H-5)，6.61(1H，d，J=7.2 Hz，H-2);13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:29.1(C-β)，44.9(C-α)，60.5(C-6″)，69.4(C-4″)，73.1(C-2″)，76.7(C-3″)，77.2(C-5″)，94.3(C-3')，96.8(C-5')，100.8(C-1″)，105.1(C-1')，115.3(C-5)，115.8(C-2)，118.8(C-6)，132.3(C-1)，143.1(C-3)，144.8(C-4)，160.8(C-2')，164.4(C-6')，165.3(C-4')，204.7(C=O)。綜合解析以上數據，和文獻［10］報道一致，故鑒定該化合物為3－羥基根皮苷。

化合物5:白色針晶，mp 168～169℃，Molish反應陽性。根據核磁共振波譜的解析，1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:2.81(2H，t，J=7.2，7.2Hz，H-β)，3.17-3.73(5H，m，H-2″-6″)，3.71(1H，d，J=11.1 Hz，H-5″)，4.57(2H，t，J=7.2，7.2 Hz，H-α)，4.93(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，5.93(1H，d，J=2.1 Hz，H-3')，6.13(1H，d，J=2.1 Hz，H-5')，6.64(2H，dd，J=2.7，8.4 Hz，H-3，5)，7.03(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6);13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:29.0(C-β)，44.9(C-α)，60.5(C-6″)，69.4(C-4″)，73.2(C-2″)，76.7(C-3″)，77.3(C-5″)，94.4(C-3')，96.8(C-5')，100.8(C-1″)，105.1(C-1')，115.0(C-3，5)，129.2(C-2，6)，131.6(C-1)，155.3(C-4)，160.9(C-2')，164.6(C-6')，165.4(C-4')204.7(C=O)。綜合解析以上數據，和文獻［11］報道一致，故確定該化合物為根皮苷。

化合物6:黃色晶體，Mg-HCl反應呈陽性，Molish反應陽性。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:0.78(3H，d，J=6.0Hz，CH3)，3.1-3.9(4H，m，H-2″-5″)，5.29(1H，s，H-1″)，6.19(1H，d，J=3.0 Hz，H-6)，6.38(1H，d，J=3Hz，H-8)，6.91(2H，d，J=9.0Hz，H-3'，5')，7.74(2H，d，J=9.0 Hz，H-2'，6');13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:18.5(C-6″)，70.1(C-5″)，70.3(C-2″)，70.6(C-3″)，71.1(C-4″)，93.8(C-8)，98.9(C-6)，101.8(C-1″)，103.9(C-10)，115.4(C-3')，115.4(C-5')，120.5(C-1')，130.6(C-2')，130.6(C-6')，134.1(C-3)，156.5(C-2)，157.1(C-9)，160(C-4')，161.3(C-5)，164.9(C-7)，177.6(C-4)。以上數據與文獻［12］報道一致，故鑒定該化合物為山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物7:白色針晶，mp 305～306℃。Liebermann Burchard反應呈陽性。與齊墩果酸對照品混合，共熔點不下降，它們的IR、TLC的Rf值均為一致［13］，故鑒定該化合物為齊墩果酸。

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