連續逆流超聲提取技術在參松養心膠囊中試生產中的應用研究

于向紅，王曙賓，粘立軍

(石家莊以嶺藥業股份有限公司，河北石家莊050035)

參松養心膠囊(國藥準字Z20103032，國家標準號:YBZ00952003-2006Z-2009)是中國工程院院士吳以嶺教授以中醫絡病理論為指導，根據多年的臨床經驗研制成功的創新性抗心律失常中藥，對治療心律失常有雙向調節的療效。該藥處方由黃連、山茱萸、五味子、甘松、赤芍、桑寄生、土鱉蟲等十二味中藥組成，原工藝中黃連、山茱萸、五味子、甘松四味藥材采用70%乙醇回流合提，赤芍、桑寄生等采用水煎煮合提，土鱉蟲采用粉碎加入，其中醇提工藝中乙醇用量大、生產成本高。

隨著現代提取技術的不斷發展，連續逆流超聲提取技術逐漸被應用到中藥生產中，連續逆流超聲提取技術是一種增大傳質推動力、提高提取效率的提取新方法，與傳統的提取方法相比，具有節省溶劑用量，縮短提取時間，減少后續濃縮能耗等優點［1-13］。

本次研究是在單位前期小試研究工作的基礎上，采用連續逆流超聲提取技術對參松養心膠囊醇提工藝進行中試放大實驗，對影響產品質量和生產成本相關環節進行考察，解決回流提取工藝中乙醇用量大、生產成本高等問題，從而降低生產成本，提高生產效率。

1 儀器與試藥

1.1 儀器連續逆流超聲提取成套設備(型號:GDC-TQ/3/C2N1，廠家:濟寧金百特生物機械有限公司，該設備超聲總功率70KW，超聲波頻率27kHz，超聲溫度40～60℃，進料速度120kg/h，進溶媒速度1 105 L/h)，Agilent 1200(廠家:安捷倫科技有限公司)，UV檢測器。METTLER TOLEDO AG135型電子天平，小型超聲儀(型號:KQ-250DB，廠家:昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥鹽酸小檗堿標準品(批號:110713-200208)，購于中國藥品生物制品檢定所;甲醇(色譜純);乙腈(色譜純);其它試劑均為分析純，山茱萸、五味子、黃連、甘松藥材購于安國藥材市場，經本公司質檢科范文成主任藥師鑒定，均符合《中國藥典》2010年版(一部)有關項下規定［14］。

2 方法及結果

2.1 參松養心膠囊醇提工藝中試試驗方法

2.1.1 原回流提取工藝樣品的制備平行制備3批樣品，每批按處方量取山茱萸等四味藥共1 168.2 kg，加70%乙醇8倍量，回流提取3次，第1次3 h，第2次2 h，第3次1 h，合并提取液，減壓真空濃縮(蒸汽壓力≤0.1 MPa，溫度50～70℃，真空度0.04 MPa～0.085 MPa)，濃縮浸膏噴霧干燥(進風口溫度160℃，出風口溫度88℃，霧化器頻率45Hz)，得噴霧干燥粉末，稱質量。

2.1.2 連續逆流超聲提取樣品的制備平行制備3批樣品，每批按處方量取山茱萸等四味藥共1 168.2 kg，加70%乙醇2 000 L，浸泡20 min，超聲波提取(超聲總功率70 KW，超聲波頻率27 kHz，超聲溫度40～60℃，超聲時間70 min，進料速度120 kg/h，進溶媒速度1 105 L/h)，超聲提取共用1.5 h，得提取液12 200 L，減壓真空濃縮(蒸汽壓力≤0.1 MPa，溫度50～70℃，真空度0.04 MPa～0.085 MPa)，濃縮浸膏噴霧干燥(進風口溫度160℃，出風口溫度88℃，霧化器頻率45 Hz)，得噴霧干燥粉末，稱質量。

2.2 收粉率的測定方法取不同提取工藝下制備的噴霧干燥粉末，稱質量，記錄收粉量，計算收粉率。

2.3 鹽酸小檗堿定量測定方法

2.3.1 色譜條件［15-17］:HPLC:Agilent 1200，UV檢測器，四元泵，自動進樣，在線脫氣;色譜柱:Agilent Zorbax SBC18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-磷酸三乙胺水溶液(23∶77)，磷酸-三乙胺-水溶液配比比例為(1∶2∶1 000);檢測波長為345 nm，體積流量:1 mL/min，柱溫:30℃，進樣量:10 μL，理論塔板數按鹽酸小檗堿峰計算應不低于2 000。

2.3.2 鹽酸小檗堿標準品溶液的制備稱取鹽酸小檗堿標準品9.36 mg，置于50 m L量瓶中，加甲醇定容搖勻，用5 mL移液管移取5 mL上述標準品溶液，置于另一個10 mL量瓶中，加甲醇定容，制成質量濃度為93.6 μg/mL的鹽酸小檗堿標準品溶液，搖勻，備用。

2.3.3 供試品溶液的制備精密稱取參松養心膠囊醇提部分樣品粉末0.2 g，加甲醇20 mL，稱定質量，超聲提取10 min，取出，放冷，用甲醇補足減失的質量，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜濾過，備用。

2.3.4 測定法精密吸取標準品溶液和供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算鹽酸小檗堿的含有量。

2.3.5 線性關系考察取鹽酸小檗堿標準品溶液，分別進樣1、2、3、4、5、6、7、8 μL。測定峰面積，以鹽酸小檗堿的進樣量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，得標準曲線y=4 075.2x+34.773(R2=1)。結果表明鹽酸小檗堿進樣量在425.55～3 085.55 μg范圍內線性關系良好。

2.3.6 方法學考察精密度RSD為0.65%，重復性RSD為2.26%，穩定性結果顯示，標準品溶液和樣品溶液常溫下放置24h不影響含有量測定，加樣回收率在99.13%～102.78%之間，平均加樣回收率為101.65%，RSD為1.60%，表明本方法具有較好的回收率。

2.4 提取溶媒用量及提取所用時間記錄不同提取工藝的提取溶媒消耗量及提取總時間。

2.5 實驗結果不同提取工藝對3批樣品出粉率、鹽酸小檗堿提取率、總提取時間及乙醇耗用量的測定結果，見表1。

表1 3批樣品各指標測定結果(n=3)

3 討論

從測定結果可以看出，回流提取樣品的收粉率和鹽酸小檗堿的提取率均略高于連續逆流超聲提取，但從乙醇消耗量及提取時間來看，原工藝加熱回流提取，提取次數多，提取時間長達6～7 h，乙醇耗用量大，而采用超聲逆流提取技術后，藥材浸泡及提取總過程僅需要1.5 h，耗時為回流提取的1/4，且乙醇耗用量大大減少，節省溶劑用量近3/5，提取時間大幅縮短，溶劑用量大量減少，相應的生產成本顯著降低，因此，連續逆流超聲提取工藝更節省成本，更經濟。

但連續逆流超聲提取技術畢竟是一種新興的提取技術，在大生產過程中發現其也存在一些缺點，比如對藥材飲片的粉碎粒度要求比較高，連續超聲時間不能過長、設備比較昂貴等，但隨著技術的不斷發展，其性能參數也會越來越完善，應用也會越來越廣泛。

本課題后續試驗對連續逆流超聲提取工藝樣品指紋圖譜以及相應的藥效學進行了研究，發現該工藝制備樣品與原工藝樣品相比指紋圖譜變化不大，藥效實驗結果顯示該工藝制備的樣品能夠明顯抑制CaCl2、烏頭堿、心肌缺血再灌、哇巴因、急性心肌缺血所致心律失常的發生，與原工藝樣品相比，其抗心律失常效果沒有明顯差異。

綜上，本實驗是在前期小試實驗已確定工藝參數的基礎上，對小試實驗能否放大生產進行驗證，研究結果表明，連續逆流超聲提取技術應用到參松養心膠囊中試生產中可大幅度降低生產成本，提高生產效率，該項提取技術是中藥提取未來發展的一個方向，具有廣闊的應用前景，有望推廣到大生產應用中。

［1］張平.關于連續逆流提取在實際應用中的優缺點［J］.黑龍江醫藥，2010，25(3):388-389.

［2］陳贅.一種中藥動態連續逆流提取的實驗室模擬方法［J］.亞太傳統醫藥，2006(1):60-64..

［3］向智男.逆流法提取金銀花中的綠原酸研究［J］.食品與發酵工業，2006，32(8):131-134..

［4］韓麗.丹參動態階段連續逆流提取工藝研究［J］.中成藥，2009，31(5):721-724..

［5］陳明功，崔敏，陶虹.連續逆流浸取器提取天然煙堿的研究［J］.淮南工業學院學報，2002，22(3):29-32.

［6］易克傳，李慧，劉晶晶.中草藥動態連續逆流提取機［J］.輕工機械，2009(5):86-88.

［7］易克傳，岳鵬翔，汪維云.動態逆流提取設備在天然產物提取中的應用［J］.包裝與食品機械，2005(4):25-28.

［8］朱獻鐳.連續動態逆流提取工藝流程及預浸器的設計［J］.輕工機械，2005(4):127-129.

［9］張嗣良，梁學賢.我國生物及制藥過程控制與裝備技術的發展趨勢與今后發展設想［J］.醫藥工程設計，2002(1):3-4.

［10］韓麗.應用逆流提取與膜分離技術的中藥注射劑新工藝研究［D］.成都:成都中醫藥大學，2003.

［11］蔡銘.罐組逆流提取技術在中藥領域中的應用研究［D］.杭州:浙江大學，2006.

［12］盧曉江.中藥提取工藝與設備［M］.北京:化學工業出版社，2004.

［13］朱宏吉，張明賢.制藥設備與工程設計［M］.北京:化學工業出版社，2004.

［14］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫藥科技出版，2010:26，61，74，285.

［15］徐天玲.高效液相色譜法測定克淋通片中鹽酸小檗堿的含量［J］.江西中醫藥，2009，6(6):77.

［16］劉建華，高玉瓊，劉瑩，等.高效液相色譜法測定白連止痢膠囊中的鹽酸小檗堿含量［J］.藥物分析雜志，2006，26(12):1863-1865.

［17］程靜，何繼祥，梅群，等.HPLC測定結腸炎散中鹽酸小檗堿含量［J］.中國藥師，2007，10(12):1267-1268.