淺析無償獻血血液檢測結果的影響因素及對策

林江紅 武培彪

(巴彥淖爾市中心血站 內蒙古巴彥淖爾 015000)

為了保障臨床用血安全,我國的法律法規明確規定獻血者血液樣本必須進行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP等項目的檢測,只有陰性的血液才能允許用于臨床。我們用ELISA檢測方法對巴彥淖爾地區無償獻血者血清樣本進行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP項目的檢測,在實際操作中常可見到檢測結果為假陽性或假陰性的錯誤結果。為了避免或減少ELISA檢測實際操作中的影響因素,我們對2010年至2011年巴彥淖爾地區2萬余份無償獻血者血液樣本檢測,就影響檢測結果比較常見的因素進行了初淺的分析和探討,報道如下。

1 材料與方法

(1)樣本。

巴彥淖爾地區無償獻血者血液樣本。

(2)儀器STAR全自動加樣器,FAME全自動酶免分析系統;Wellscan MK3酶標儀,Wellscan 4MK2洗板機。

(3)試劑方法ELLSA診斷試劑盒由金豪制藥股份有限公司、萬泰生物藥業股份有限公司、英科(廈門)科技有限公司提供,嚴格按照各廠家提供的ELISA試劑說明書,對所有被檢血液樣本進行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP項目的檢驗操作。

2 結果

ELISA試驗檢測工作中會出現假陽性或假陰性的錯誤結果。

3 分析

3.1 試劑的影響因素

在對無償獻血者血清樣本檢測時我們遵照《血站管理辦法》的規定,每一份樣本都用ELISA法進行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP等項目的初、復檢驗,初、復檢均選用有批準文號、批批檢定報告、防偽標簽的2個不同廠家的試劑盒進行篩檢,常會遇到同一份樣本同一檢測項目在相同條件下檢測,一家試劑檢測陰性,另一家試劑檢測陽性,這是因為不同廠家的試劑抗體、抗原組合不同,來源和用量方面也有差異,造成我們在篩檢獻血員時,容易發生漏檢。因此,試劑的選擇是保證ELISA試驗測質量的關鍵要素。我們在試驗前一定要對購進ELISA試劑進行血清盤的檢測。試驗前將試劑盒從冰箱中取出后,需要在與室溫平衡再進行測定,目的是能使反應微孔的溫度較快地達到所需的溫度,以滿足測定需求。不同批號、不同廠家的試劑,不能混合使用。對于超過有效期的試劑則嚴禁使用。

4 操作中的影響因素

ELISA試驗操作過程有加樣、溫育、洗板、顯色、結果判定5個步驟。加樣時間過長會導致孔間差異加大,更不可先把陰陽性及質控血清加好后長時間等待樣品;加酶試劑及樣品,要加在孔底,不能加在孔壁上,加入量不準,導致試驗結果不準確;溫育對于ELISA檢測是最關鍵的因素,根據試劑盒的說明書選擇溫育的時間和溫度,加完樣本或試劑后將微孔板從室溫放入水浴箱或溫箱中時,孔內溫度從室溫升至37℃需要一定時間,如果是將微孔板放入溫箱即開始計時,這樣就容易造成實際測定中溫育時間不夠,易致弱陽性樣本測不出來;洗板的關鍵是洗板次數選擇。洗板次數較少,造成殘留,可引起假陽性結果。洗板次數過多,可造成抗原抗體結合物洗脫,造成假陰性結果;在實際的操作中,往往對于顯色的時間不夠重視,顯色時間過短容易造成弱陽性樣本的漏檢。顯色時間過長會使質控值偏高,影響質控圖的繪制;讀取結果可定性分析也能定量分析,但要在15～30min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10～15cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,需先預熱15～30min再進行測定。

5 樣本質量的影響因素

樣本質量的好壞直接影響ELISA檢測的結果。樣本溶血、被細菌污染、樣本貯存時間過長反復凍融、樣本凝固不全,這些因素均可導致ELISA檢測獻血者血液樣本時,造成假陽性或假陰性的錯誤結果。樣本乳糜的血清中有大量的脂肪顆粒,將其加入微孔中易粘附于微孔內壁,洗板時不易洗去,干擾ELISA檢測結果。

樣本采集時必須注意避免人為因素引起的溶血和細菌污染;檢測的血清樣本不能立即檢測時,5d內檢測的樣本可存放于4℃冰箱,1周后檢測的樣本應低溫保存,凍存后融解的樣本,應輕柔的充分混勻后再檢測;采集血清樣本時用帶分離膠的采血試管或在采血試管中加入適量的促凝劑,避免樣本凝固不全。大力宣傳無償獻血相關知識,加強獻血者獻血前的問診,防止采集到乳糜的血液,確保血液檢測質量。

綜上所述,ELISA檢測已廣泛應用于血站對無償獻血者的篩檢和血液的檢測工作中。在實際工作中,ELISA試驗影響測定結果的因素較多,應采取相應措施,避免或減少影響因素,才能保證血液檢測質量,為臨床提供合格安全的血液。

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