電子顯微鏡技術在實驗針灸學中的運用

陳 永 龔 安 高運樂 余 珊 楊宗保

1.江西中醫學院，江西南昌 330004；2.廣州復大腫瘤醫院針灸科，廣東廣州 550030；3.江西中醫學院南方灸療研究所，江西南昌 330004

電子顯微鏡技術在實驗針灸學中的運用

陳 永1，2龔 安1高運樂2余 珊2楊宗保3

1.江西中醫學院，江西南昌 330004；2.廣州復大腫瘤醫院針灸科，廣東廣州 550030；3.江西中醫學院南方灸療研究所，江西南昌 330004

電鏡技術在實驗針灸學中的運用是揭秘針灸作用機制的可行方法之一。由于多種原因，目前這一方面研究數據較少。本文復習了近10年來28篇電鏡在實驗針灸學中的運用。研究范圍涉及炎癥性腸病、糖尿病眼病、心肌缺血、脊髓損傷、血管性和老年性癡呆等。

電子顯微鏡；潰瘍性結腸炎；克羅恩病；癡呆；足三里；腎俞

中醫理論尤其是經絡學說是針灸學的理論依據。隨著科技的飛速發展，各學科間的交叉滲透，以及國內外專家對針灸治療本質的探究，實驗針灸學這一年輕的學科應運而生。1931年，德國物理學家Ernst Ruska和電氣工程師Max Knoll制作世界上第一臺電子顯微鏡，當時能把實物放大400倍。80年來，目前的電子顯微鏡能放大1 000萬倍。電鏡對微觀世界的客觀展示對細胞生物學的發展起推動作用。而今，電鏡技術在基礎和臨床（主要是腎臟病理）中已經得到廣泛的運用。電鏡在實驗針灸學中的運用是揭秘針灸作用機制的可行方法之一。但由于電子顯微鏡價格昂貴等原因，限制了這方面的研究，使得這方面的數據彌足珍貴。我們在萬方數據庫中采用高級檢索，標題：針灸，并且全文：電鏡，年份：2001～2011年，檢索得文獻18篇。在維普數據庫中用高級檢索，標題或關鍵詞：針灸，并且全文：電鏡，年份：2001～2011年，檢索得文獻33篇。在Pubmed中用高級檢索，title:acupuncture，all fields:electromicroscope，檢索未發現相關文獻。對所有文獻逐一復習、檢查，遴選28篇在本文進行綜述。

1 炎癥性腸病

吳煥淦等[1]采用透射電鏡檢測對潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）大鼠結腸細胞形態進行了觀察，模型組大鼠（即患UC的大鼠）結腸組織出現大量的凋亡細胞，表現為細胞皺縮、變小，胞漿致密，細胞器相互靠近；核固縮，染色質濃縮，沿著核膜排列，形成不同形狀和大小的塊狀；同時，細胞器也發生濃縮，有些形成了凋亡小體。經過隔藥灸與電針治療（取穴：氣海、天樞）組大鼠，這些情況發生顯著的改善。形態學上細胞結構的變化沒有模型組典型，發生凋亡的細胞數目也明顯下降（P＜0.05）。結果表明，針灸能夠抑制異常增高的結腸黏膜上皮細胞凋亡，其可能是針灸治療潰瘍性結腸炎的重要機制之一。

馬曉芃等[2]在建立UC大鼠模型以后，以針灸進行干預（取穴：上巨虛）。結果示經隔藥灸、電針上巨虛治療后大鼠結腸黏膜上皮細胞絨毛長度多數正常且排列整齊，胞膜完整，線粒體嵴正常，高爾基體旁有大量的囊泡，杯狀細胞內充滿黏液顆粒。劉慧榮等[3]在建立大鼠克隆病（crohn disease，CD）后，采用針藥結合對大鼠進行治療（取穴包括足三里、上巨虛）。檢測結果示，電針組杯狀細胞較模型組增多，部分杯狀細胞富含黏液滴，排列不整齊，仍可見到壞死上皮細胞。微絨毛斷裂，黏膜下層水腫。

2 心肌缺血

趙宇輝[4]在建立大鼠心肌缺血再灌注模型之前，對治療組采用了針灸預治療（選穴：內關、膻中）。結果表明，模型組大鼠的心肌部分細胞核固縮、細胞膜迂曲、內陷，連續性中斷，呈鋸齒樣變，部分核膜崩解，核中部分染色質凝集并向核膜靠攏；可見線粒體嵴斷裂、溶解，內質網擴張，糖原顆粒減少，肌原纖維融合。針灸預處理組與缺血再灌注組比較，病變明顯減輕。

田岳鳳等[5]建立兔心肌缺血再灌注損傷模型，然后電針“內關”進行治療。對心肌織超微結構進行觀察。結果顯示，針刺“內關”組心肌組織損傷輕微，肌纖維正常走向，少量線粒體空泡變，肌絲無明顯壞死、溶解。提示電針“內關”可明顯降低缺血再灌注損傷的程度，對心肌呈現良好的保護作用。

3 內分泌（相關性）疾病

吳明霞等[6]首先建立大鼠骨質疏松模型（去卵巢手術方法），發現經針灸干預（主穴：大杼、命門；配穴：懸鐘、足三里）后的骨質疏松大鼠骨基質密度均勻，骨膠纖維排列整齊，少數區域骨膠纖維較稀疏，粗細不一。骨基質中較幼稚的骨細胞明顯增多，其核較大，蛻變的骨細胞較少，胞漿內見較多粗面內質網，嗜鋨板層可見，成骨細胞較類骨質少，骨膜下成骨細胞無明顯增生。蔡春梅等[7]建立大鼠糖尿病視網膜病變模型，針刺（取穴：肝俞、腎俞、脾俞、睛明、太陽、風濁、足三里、百會）治療，視網膜電鏡檢查結果顯示，針刺組內皮細胞增殖不明顯，管腔無縮小，周細胞無明顯變性，基底膜略有增厚。提示，針刺可以有效地預防和治療糖尿痛視網膜病變。逄紫千等[8]建立大鼠糖尿病周圍神經病變模型。針刺治療組取肺俞、脾俞、腎俞、合谷、足三里、三陰交。用透射電鏡觀察神經纖維的超微結構。結果顯示，造模8周時，糖尿病模型組大鼠尾神經有髓神經纖維髓鞘結構模糊松散排列紊亂;造模12周時，部分有髓神經纖維發生沃勒變性，軸索出現消失現象，髓鞘板層疏松呈不規則的膜樣團塊。針刺治療組與糖尿病模型比較，上述改變均減輕。

4 神經精神系統疾病

4.1 脊髓損傷

劉潔等[9]采用透射電鏡對不完全性截癱兔損傷脊髓神經元內線粒體的影響進行了研究。模型（不完全性截癱兔損傷）形成7 d后，電鏡下見針灸組線粒體大小均勻，僅有少量腫脹；而模型組線粒體有嚴重腫脹，空泡化，數量減少。吳耀持等[10]建立神經根壓迫癥大鼠模型，并對大鼠進行針灸治療。選穴為環跳、陽陵泉與受壓神經根相應節段右側的夾脊穴。結果示，電針組較模型組神經纖維周圍充血、水腫及神經根纖維脫髓鞘變較輕，施旺細胞結構基本正常，并緩解神經內水腫。結果表明，電針可緩解受損腰神經根周圍炎癥反應，改善腰神經根超微結構。朱政等[11]采用針灸效應學體外實驗方法對離體培養星形膠質細胞用透射電鏡觀察其超微結構的變化。結果顯示，電針治療組的星形膠質細胞其溶酶體較造模組少，而高爾基復合體、內質網、微管、微絲較造模組明顯增多。提示，電針可減輕損傷對星形膠質細胞中溶酶體的刺激，增強細胞器的蛋白合成和分泌功能。

4.2 腦血管疾病

關建軍等[12]對大鼠進行血管性癡呆（VD）造模，針灸選穴：百會、膈俞、氣海、三陰交、膻中組成益氣活血方治療；觀察海馬CA1區的突觸數密度（Nv）、突觸活性區的面積密度（Sv）。 結果顯示，VD 模型組較對照組 Nv、Sv明顯減少（P<0.01），VD模型組較針灸治療組Nv減少、Sv明顯減少 （P<0.05）。實驗說明，針灸可以顯著提高VD大鼠大腦皮質CA區的Nv和突觸活性區的Sv，是針灸促進大腦可塑性，保護腦損傷的神經生物學機制。符文彬等[13]在建立新西南兔腦出血模型，并對腦出血兔行針灸治療，取穴：百會、水溝、雙側合谷與太沖穴。然后電鏡觀察兔腦細胞損傷情況。結果顯示，針灸治療后，鏡下神經細胞和膠質細胞胞核形態無明顯異常，細胞器腫脹或輕微擴張，脂褐素稍增多，微血管管腔無狹窄，內皮細胞受損輕，基膜形態基本正常，無明顯管周水腫病變。

王鵬琴等[14]采用眼針療法對血管性癡呆大鼠進行治療。電鏡檢測顯示，與模型組比較，海馬神經元超微結構變化明顯輕于模型組。唐偉等[15]在建立腦缺血大鼠模型之前，對大鼠進行針灸預處理（取穴為雙側足三里）。發現針刺預處理組血管內皮細胞水腫較輕，緊密連接、基底膜結構尚完整，管周星形膠質細胞足突水腫亦較輕。王黎等[16]建立VD模型，然后電針大椎、百會穴治療。電鏡檢測發現，針刺組核膜完整，染色質均勻，胞漿內細胞器豐富；偶見內質網腫脹，有少量線粒體空泡樣變化尚未恢復正常，脂褐素較多。杜亦旭等[17]在建立大鼠腦缺血模型后，采用電針百會、大椎穴對腦缺血大鼠進行治療。觀察缺血區大腦皮質突觸的結構、Nv、Sv的變化規律以及電針對其影響。結果表明，電針組Nv、Sv于1 d后較缺血模型組顯著性升高（P<0.01），3 d、1周后進一步升高（P<0.001），與假手術組相仿。提示電針從早期即可抑制腦缺血后的Nv、Sv，并在恢復過程中促進其盡快地修復。電鏡檢查為電針在不同時間段促進突觸重建和腦缺血恢復提供了形態學基礎。

4.3 老年性癡呆（Alzheimer's disease，AD）

周華[18]、杜艷軍等[19]在建立大鼠老年性癡呆之前，用針灸取大鼠百會穴和腎俞穴進行預處理。結果顯示，針灸組大鼠海馬區神經元細胞損傷程度比模型組明顯減輕，細胞核染色質分部基本正常。提示預電針和預艾灸對于AD模型大鼠的神經功能具有明顯的保護作用，減少神經元的損傷，以預電針和預艾灸聯合運用療效最佳。羅松等[20]選用老年大鼠，建立阿爾茨海默病模型，對大鼠進行電針治療。選穴：百會、涌泉、太溪、血海，治療結束后，采用透射電鏡觀察大鼠海馬CA3區超微結構，結果顯示，電針后Nv較模型組明顯增大，而Sv較小，與正常結構相似。大鼠海馬CA3區突觸Nv、Sv電針組明顯高于模型組（P<0.01）。海馬CA3區突觸連接帶平均面積:電針組明顯小于模型組（P<0.01）。結果顯示：電針能有效地使阿爾茨海默病大鼠海馬神經元突觸形態得到一定程度的修復，阻止海馬神經元突觸的退變。

4.4 海洛因成癮

張榮軍等[21]建立海洛因復吸大鼠模型，與模型組和藥物組相比，針灸組（針刺百會穴，艾灸腎俞穴），大鼠腦前額皮質（PFC）線粒體、核糖體數目略有增多，線粒體嵴比較清楚，粗面內質網數量相對增多，但有輕度擴張，核膜間隙正常。

4.5 抑郁癥

符文彬等[22]在建立大鼠抑郁癥模型基礎上，針刺組大鼠造模后針刺合谷穴、太沖穴。取大鼠海馬組織進行電鏡觀察。結果顯示，針刺組大鼠海馬神經元超微結構變化相對較輕，神經元受損程度明顯輕于模型組。認為針刺可以逆轉慢性應激所造成的抑郁大鼠海馬神經元的損傷，這可能是針刺抗抑郁的物質基礎和作用機制之一。

4.6 癲癇

唐偉等[23]在建立癲癇持續狀態（status epilepticus，SE）大鼠模型之前，采用針灸預處理大鼠，取穴主要包括足三里、曲池、百會。電鏡結果顯示：預先針刺組的損傷明顯減輕，線粒體結構大體完整。可見預先針刺對SE后神經元損傷具有保護作用。

4.7 聽力損害

付平等[24]建立聽力損害豚鼠模型，然后將針灸治療組按照取穴的不同分為翳風組、耳門組、中渚組進行治療。結果表明，在豚鼠耳蝸基底膜外毛細胞缺失數上，翳風組、耳門組、正常組明顯少于模型組（P＜0.05），中渚組與模型組相近。在超微結構方面，正常組耳蝸毛細胞結構正常；模型組毛細胞結構出現明顯病理改變；針刺組病理變化較模型組輕。翳風組外毛細胞病理變化較輕，耳門組毛細胞結構略有改變，中渚組病理變化較嚴重，但略輕于模型組。結果提示，以針刺翳風穴效果最好，針刺耳門穴次之，針刺中渚穴效果最差。

5 其他

蘆源[25]選用自然老化大鼠，進行圍刺治療以后，通過透射電鏡觀察皮膚成纖維細胞的形態以及膠原纖維的排列，電鏡可見，老齡大鼠真皮成纖維細胞的細胞器減少，細胞結構退化，同時膠原纖維之間空隙加寬，老化性架橋增多，圍刺治療后其成纖維細胞活性增強。結果提示，圍刺法可能是通過增強皮膚中成纖維細胞的活性進而增加其可溶性膠原含量來改變皮膚的老化狀態。傅杰英等[26]采用透射電鏡觀察超重大鼠針灸治療后脂肪細胞的細胞器形態。結果顯示，線粒體數量明顯增多，嵴排列致密。提示針刺胃經穴位對超重大鼠具有一定的干預作用，可能與改變其褐色脂肪細胞的形態、提 高產熱效能和能量代謝有關。李彤[27]建立大鼠踝關節痛風模型，并對痛風大鼠行針灸治療，取穴：豐隆（雙側）、小腸俞（雙側）。電鏡結果顯示：針灸治療組，鏡下可見成纖維細胞，胞核呈梭長形，核內染色質分布均勻，胞漿內有豐富的粗面內質網，線粒體、核糖體等細胞器清晰可見，整個細胞呈梭長形，細胞周圍有較為豐富的且排列緊密的膠原纖維。朱梅菊等[28]用對大鼠的運動進行研究，大負荷訓練4周導致運動性貧血。電鏡下，大鼠畸形紅細胞明顯增高，以棘形紅細胞為主，畸形紅細胞百分率顯著高于訓練前（P＜0.01），提示長時間大負荷訓練能導致紅細胞的損傷。針灸對停訓后大鼠紅細胞形態學的影響顯示，針灸組大鼠停訓后7 d紅細胞形態基本恢復正常（對照組需要15 d），畸形紅細胞百分率與訓練前比較，差異無統計學意義（均P＞0.05）。提示針灸足三里穴可明顯促進運動性貧血的改善。

6 小結

由于電鏡技術稍難掌握，設備昂貴等原因限制了其在實驗針灸學中的運用。通過復習文獻發現，雖然目前以電子顯微鏡技術來研究針灸的文獻不多，且尚未檢索到外文文獻。但文獻質量較高，且絕大多少綜合運用包括電鏡在內的其他檢測指標，且大多數設立了隨機、對照研究。

分子生物學是醫學的中心學科，其研究方法亦廣泛運用于包括實驗針灸學在內的各學科。但電鏡作為細胞生物學研究的技術之一，由于其對細胞觀察的直觀性，亦廣受基礎醫學工作者的喜愛。其在腎臟病理等檢查中的診斷地位亦是舉足輕重。電鏡作為一種很好的技術手段、檢測指標，我們將繼續創造條件將其運用到針灸實驗中來，觀察更多的病種，例如哮喘、各種惡性腫瘤等。這樣對針灸學的發展必有裨益。

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Application of electron microscope in experimental acupuncture

CHEN Yong1,2GONG An1GAO Yunle2YU Shan2YANG Zongbao3
1.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Jiangxi Province,Nanchang 330004,China;2.Acupuncture Department,Fuda Cancer Hospital of Guangzhou City,Guangdong Province,Guangzhou 550030,China;3.South Moxibustion Research Center,Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Jiangxi Province,Nanchang 330004,China

The application of electromicroscope technical for experimental acupuncture is a feasible method.Unfortunately,the current researches in this area is very rare.This manuscript reviews 28 articles in the last 10 years on this theme.The scope of applying electromicroscope technical in experimental acupuncture including inflammatory bowel diseases,oculopathy due to diabetics,myocardia ischemia,spinal cord injury,vascular or aging dementia etc.

Electromicroscope;Ulcerative colitis;Crohn's disease;Dementia;Zusanli(ST-36);Shenshu(BL-23)

R642

A

1673-7210（2012）08（a）-0031-03

國家自然科學基金面上項目(No:30960484)。

陳永(1986.3-),男，碩士，住院醫師；研究方向：中西醫結合腫瘤學。

高運樂（1974.10-），男，主治醫師；研究方向：中醫針灸。

2012-03-30 本文編輯：谷俊英）