化學發光免疫診斷試劑盒變異控制方法探討

李 彬 陳 靜 趙文威 韓梅玲 劉春莉

（鄭州安圖綠科生物工程有限公司，河南 鄭州 450016）

化學發光免疫分析方法具有選擇性好、靈敏度高、分析速度快、設備簡單等特點，在臨床檢驗領域得到了廣泛應用[1]。其檢測結果的批間重現性是臨床檢測的重要性能指標之一。不同試劑對變異系數的要求不同，通常要求試劑的批間變異系數不超過15%[2]。我公司在工藝研究中，總結出四個生產過程變異控制要點，經過驗證，能夠將批間變異降低5%以上，效果明顯。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

包被板原料，見表1。酶結合物使用蛋白原料，見表2。

表1 包被板使用原料

表2 酶結合物使用蛋白原料

1.2 試劑盒

未進行專項控制前的試劑盒：游離前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒（化學發光法）。批號：20100920、20100925、20101011、20101018。進行專項要點控制后的試劑盒，見表3。

表3 控制各要點后試劑盒批號

1.3 質控品

BIORAD質控品369#，批號54503。

1.4 試驗設備

e-Lisa全自動加樣器加樣；高靈敏LUMO發光儀檢測。

1.5 方法

引起試劑盒批間變異較大的原因是多方面的。包括試劑盒的原材料、生產工藝和生產規模等[3]。驗證發現，在生產過程中，不同的包被板原料[4,5]、包被液量、封閉液量、酶結合物使用蛋白原料這四個控制點直接影響化學發光免疫診斷試劑盒的批間變異。我公司選取具有代表性的產品：游離前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒（化學發光法）進行變異研究。我們在產品中試時，分別改變變異控制要點進行同步驗證，尋求最佳的要點控制方案。

1.6 對比評價

每個控制要點進行橫向比較，確定每個要點控制方案的有效性。

表4 使用不同包被板原料生產的成品批間變異對比

表5 采用不同包被量生產的成品批間變異對比

表6 采用不同封閉量生產的成品批間變異對比

表7 使用不同酶蛋白原料生產的成品批間變異對比

表8 全面控制各要點前后生產的成品批間變異對比

以未進行專項控制前的產品為對照品。評價全面進行要點控制后的產品的批間變異。

統計學處理 試驗均采用復孔雙次進行。數據采用SPSS10.0統計軟件進行批間變異分析。

2 結 果

包被板原料的對比結果，見表4。包被液量的對比結果，見表5。封閉液量的對比結果，見表6。酶結合物使用蛋白原料的對比結果，見表7。全面控制各要點前后對比測試結果，見表8。

3 討 論

生產用原料，如包被板原料、酶結合物使用蛋白原料明顯影響產品的批間變異。我國的診斷試劑生產用原輔料質量有待進一步提高。診斷試劑的生產企業應該經過驗證選擇性能較好的原輔料進行生產，這樣可以大幅度降低批間變異，為臨床提供更為穩定的診斷器械。

生產過程工藝，如包被液量、封閉液量等對變異的影響也很大。隨著包被液量增大，變異逐漸變小；隨著封閉液量增大，變異逐漸變小。這些生產工藝要點的優化可以明顯改善產品變異。

綜合控制各要點后，我公司自產的游離前列腺特異性抗原定量檢測試劑盒（化學發光法）的批間變異降低了5%以上，這項性能的提升對化學發光免疫診斷試劑盒是非常有意義的。同時，我們將這些控制要點進一步推廣到其他二十五項化學發光產品中，效果明顯，近兩年來，各產品變異情況有了很大的改善。建議各生產廠家都能夠從源頭入手，綜合控制生產全過程，為臨床提供更為可靠的診斷試劑[6]。

[1]汪晨,吳潔,宗晨,等.化學發光免疫分析方法與應用進展[J].分析化學,2012,40(1):3-10.

[2]王曉娟,廖雪雁,郭中平.對體外診斷試劑質量標準的幾點建議[J].中國生物制品學雜志,2009,22(12):1263-1264.

[3]孫玉芬,秦國天.國產ELISA試劑盒批間變異的分析[J].現代醫藥衛生,2003,19(7):908-909.

[4]李金明.抗原和抗體的固相化方法研究進展.國外醫學臨床生物化學與檢驗學分冊,1997,18(5):209-212.

[5]許斌,錢衛平,林必華,等.ELISA二種不同包被方法的原子力顯微鏡表征及活力比較[J].臨床檢驗雜志,1999,17(2):83-85.

[6]戴捷,蘇磊.體外診斷試劑有效管理與質量安全控制的探討[J].中國醫學裝備,2011,8(11):80-82.