大鼠再生障礙性貧血模型制備

額爾敦都楞，布仁巴圖，巴圖德力根，韓志強(qiáng)，金 花，娜仁其其格，莫日根畢力格

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，通遼 028007)

AA)是一種獲得性骨髓造血功能障礙性疾病，本病發(fā)生與骨髓造血干細(xì)胞損傷、造血微環(huán)境缺陷、免疫性造血抑制及遺傳傾向等多種因素有關(guān)［1］。我們?yōu)榱撕Y選治療藥物，建立復(fù)制周期短，穩(wěn)定，成功率高的AA模型，綜合了文獻(xiàn)方法［2-3］。對(duì)照射 + Cy+CH復(fù)合法干預(yù)劑量、干預(yù)時(shí)間進(jìn)行了對(duì)比研究獲得了與人類(lèi)病理改變相似，重復(fù)性好的AA大鼠模型。報(bào)道如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 化學(xué)試劑：環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)由山西普德藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)2009 0901。氯霉素(chloramphenicol injection)由天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：05022821。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器：BJ-6B-X直線加速器(北京醫(yī)療器械公司)，XT2000i全自動(dòng)血液分析儀(日本Sysmex公司)，COVER-015顯微鏡(日本 Olympus公司)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Wistar大鼠，雌性，體重180g～220g，吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(吉)2007-0003。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 造模方法：將44只Wistar雌性大鼠禁食不禁水12h后按體重隨機(jī)分為對(duì)照組、模型A組(A組)、模型B組(B組)等3組。其中對(duì)照組8只，A組和B組各18只。造模第1天，A組以直線加速器照射劑量率為240cGy/min，SSD=100cm，全身照射1.2min，分別于第4、6、8天腹腔注射環(huán)磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次。B組參照文獻(xiàn)方法［2-3］，于造模第1天以直線加速器照射劑量率 300cGy/min，SSD=100cm，全身照射 1.2m in，第4天、5天、6天腹腔注射環(huán)磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次。對(duì)照組第1天鉛磚屏蔽假照射。在造模期間觀察大鼠進(jìn)食量、進(jìn)水量、毛發(fā)光澤、出血點(diǎn)及死亡等一般狀況。于造模第9天、12天、15天，A組、B組各隨機(jī)抽取6只，腹主動(dòng)脈采血檢測(cè)白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血小板(PLT)、血紅蛋白(HGB)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(Ret #)，取股骨做骨髓活檢。

1.2.2 再障模型判斷標(biāo)準(zhǔn)：外周血三系細(xì)胞減少，RET減少，骨髓活檢示骨髓增生或減低(造血細(xì)胞容量40%)，非造血細(xì)胞(脂肪細(xì)胞)增多，脾臟萎縮或不明顯改變，可判定為AA模型［2，4］。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，數(shù)據(jù)以±s表示，采用 F檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 一般體征

與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠自6d起陸續(xù)出現(xiàn)皮毛松弛蓬亂，光澤度降低，部分大鼠有脫毛及皮損。消瘦、攝食減少、精神不佳，唇色眼瞼蒼白、活動(dòng)減少，足底、鼻部出現(xiàn)瘀斑等癥狀。以上表現(xiàn)B組比A組嚴(yán)重。于造模第11天B組出現(xiàn)2只大鼠死亡。

2.2 骨髓活檢

模型組與對(duì)照組比較，再障模型骨髓脂肪細(xì)胞增多，骨髓有核細(xì)胞增生減低，紅細(xì)胞系、粒細(xì)胞系明顯減少，無(wú)巨核細(xì)胞，網(wǎng)狀細(xì)胞等非造血細(xì)胞易見(jiàn)(圖1～4，見(jiàn)彩插2)。

2.3 模型外周血象變化

從表1可見(jiàn)，于造模第9天與對(duì)照組比較A組、B組 WBC、RBC、PLT、HGB、RET均明顯降低，差異有顯著性(P＜0.05)。于造模第15天，A組RBC、HGB值繼續(xù)下降，WBC、PLT、RET值回升，與對(duì)照組比較降低，差異有顯著性(P＜0.05)；B組WBC、RBC、HGB、PLT值有顯著回升，與對(duì)照組比較降低，差異有顯著性(P＜0.05)，RET值與對(duì)照組比較升高，差異有顯著性(P＜0.05)。

表1 各組外周血象變化的比較 (±s，n=6)Tab.1 Comparison of peripheral blood picture in the three groups(±s，n=6)

表1 各組外周血象變化的比較 (±s，n=6)Tab.1 Comparison of peripheral blood picture in the three groups(±s，n=6)

注：與對(duì)照組比較，1)P＜0.01；A組與B組比較，2)P＜0.05、3)P＜0.01。Note：Compared with the control group，1)P＜0.01，Compared between groups A and B，2)P＜0.05、3)P＜0.01。

組別Groups天Days白細(xì)胞WBC 109/L紅細(xì)胞RBC 1012/L血紅蛋白HGB g/L血小板PLT 109/L網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)RET#109/L對(duì)照組Control 8.58±0.92 7.96±0.29 142.8±4.12 903.4±25.6 256.5±85.5A組 9 0.18±0.0261) 6.40±0.301) 120.5±9.481) 104.5±11.71) 5.63±1.591) B組 9 0.082±0.031)3) 6.63±0.221) 122.67±2.751) 130.3±2.981)3) 9.6±1.011)3) A組 12 0.25±0.0691) 5.58±0.381) 109.3±5.931) 24.3±4.611) 39.67±9.781) B組 12 1.07±0.321)3) 5.93±0.251)3) 106.7±6.991)3) 88.5±20.81)3) 76.3±11.91)3) A組 15 1.82±0.16 5.23±0.361) 94.1±7.921) 458.7±32.41) 167.6±22.01) B組 15 2.31±0.391)2) 6.12±0.491)3) 119.7±7.611)3) 563.2±30.61)3) 602.5±40.91)3)

3 討論

再生障礙性貧血是由苯及其衍生物、有機(jī)磷農(nóng)藥、氯霉素、抗腫瘤藥等化學(xué)物品、藥物和輻射，生物因素造成的骨髓造血功能衰退，導(dǎo)致紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板等全血細(xì)胞減少引起的一組綜合征。復(fù)合法建立的再障動(dòng)物模型病理與人類(lèi)病理改變相似，且有方法簡(jiǎn)便、成功率高的優(yōu)點(diǎn)，適合治療藥物的篩選。復(fù)合法主要采用放射線、Cy、CH共同作用引起造血細(xì)胞損傷，抑制骨髓細(xì)胞的再生，導(dǎo)致骨髓造血功能的衰竭。由于以上因素的干預(yù)劑量、方法、時(shí)間的不同模型誘發(fā)的成功率、再障期的穩(wěn)定性、造模的周期、死亡率都有不同。通過(guò)對(duì)比研究表明，采用直線加速器照射劑量率為 240cGy/m in，SSD=100cm，全身照射1.2m in，于第4天開(kāi)始隔日腹腔注射環(huán)磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次的造模方法與采用直線加速器照射劑量率300cGy/min，SSD=100cm，全身照射1.2m in，于第4天開(kāi)始連續(xù)腹腔注射環(huán)磷酰胺 35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次的造模方法比較，后者于造模第9天WBC和RET急劇下降，自第12天起快速回升，特別是RET值到第15天時(shí)已超過(guò)對(duì)照組的2.5倍。表明該造模方法缺乏穩(wěn)定性。前者自第9天至第15天各項(xiàng)指標(biāo)相對(duì)穩(wěn)定，且無(wú)死亡。認(rèn)為直線加速器照射劑量率為240cGy/min，SSD=100cm，全身照射1.2m in，于第4天開(kāi)始隔日腹腔注射環(huán)磷酰胺35mg/kg和氯霉素43.75mg/kg，共3次的造模方法具有復(fù)制周期短、成功率高、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。適合用于治療藥物研究的實(shí)驗(yàn)。

［1］王永才.最新血液骨髓細(xì)胞診斷學(xué)教學(xué)醫(yī)用多媒體圖譜［M］.人民軍醫(yī)出版社，2007：218.

［2］孫紀(jì)元，王四旺，謝艷華，等.再生障礙性貧血的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)雜志，2000，10：210.

［3］陳慧莉，李建華，王海霞，等.愈障湯對(duì)再生障礙性貧血大鼠骨髓細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響 ［J］.濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，29：487.

［4］張之南，沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)第三版［S］.科學(xué)出版社，2007：8：19-20.