RP-HPLC測定通絡解毒凝膠劑中士的寧和鹽酸小檗堿的含量*

陳 玲 敖 利

（重慶市中醫院，重慶 400021）

通絡解毒凝膠劑來源于重慶市中醫院名老中醫的經驗方，由黃連、馬錢子等中藥組成，臨床應用40多年，具有開通經絡、活血鎮痛的功效，其主要有效部位為生物堿類。為進一步控制本品的質量，本實驗采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC法）［1］同時測定士的寧和鹽酸小檗堿含量，以保證臨床用藥的安全、有效。

1 材 料

1.1 儀器 HP-1100高效液相色譜儀，包括G1311A四元泵、G1314A可變紫外波長檢測器 （美國安捷倫科技公司）；AE-200型電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥 通絡解毒凝膠劑 （由本院研究部提供，批號20100504）。 鹽酸 小檗堿 （110713-200609），士的寧（110705-200306）均由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用。乙腈、甲醇為色譜純，其他均為分析純。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液制備 取不同批次通絡解毒凝膠劑1.0 g，置100 mL容量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，搖勻，取一定量置于5 mL離心管中，以4000 r/min離心5 min，用孔徑為0.2 μm的微孔濾膜濾過后直接進樣。

2.2 線性關系考察 精密稱取士的寧對照品0.014 g，鹽酸小檗堿對照品0.024 g，分別置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密吸取 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，置同一100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述對照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，分別測定士的寧和鹽酸小檗堿的峰面積，數據以峰面積為橫坐標，進樣量為縱坐標，繪制標準曲線。結果士的寧絕對進樣量在0.056～0.336 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程為：A=2528.7317×C-9.8933 （r=0.9996）； 鹽酸小檗堿絕對進樣量在 0.096～0.576 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程為：A=3330.1577×C-11.0256（r=0.9998）。

2.3 系統適應性實驗 按供試品溶液制備方法，分別制備缺黃連的陰性對照品和缺馬錢子的陰性對照品，分別注入液相色譜儀，色譜柱：（phenomenex Luna C18，5 μm，250 mm×4.6 mm）；流動相：甲醇∶乙腈∶25 mmol/L 磷酸二氫鈉溶液（30∶30∶40）；檢測波長：254 nm；柱溫：30℃；流量：0.9 mL/min。結果缺黃連的陰性對照在鹽酸小檗堿出峰時間無色譜峰出現；缺馬錢子的陰性對照在士的寧出峰時間無色譜峰出現，表明陰性對照無干擾。見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 精密度試驗 精密吸取士的寧對照品溶液20 μL，重復進樣5次，測定峰面積，其RSD為0.5%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗 取本品正文方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h進樣，測定士的寧、鹽酸小檗堿的峰面積，其相對標準偏差RSD分別為0.7%、0.9%，表明供試品溶液至少在8 h內穩定。

2.6 重復性試驗 取同一批樣品，按擬定的含量測定方法，分別制備6份供試品溶液，測定士的寧、鹽酸小檗堿的峰面積，其相對標準偏差RSD%分別為2.2%、2.6%，說明本方法重現性好。

2.7 回收率試驗 精密量取本品（士的寧0.55 mg/g，鹽酸小檗堿1.91 mg/g）0.5 g，置100 mL量瓶中，再分別精密加入士的寧對照品溶液（0.029 mg/mL）8、10、12 mL，鹽酸小檗堿對照品溶液（0.100 mg/mL）8、10、12 mL，按擬定的含量測定方法試驗，分別測定士的寧、鹽酸小檗堿的量，按下式計算回收率（結果見表1~表2）。結果表明方法具有良好的回收率。

2.8 樣品含量測定 取3批本品中試樣品，按正文方法測定，結果批號為20101201、20101202、20101203的樣品中，士的寧含量分別為 0.95、0.92、0.82 mg/mL，平均 0.89 mg/mL；鹽酸小檗堿的含量分別為 2.40、2.27、2.00 mg/mL，平均 2.22 mg/mL。

表1 士的寧回收試驗

表2 鹽酸小檗堿回收試驗

3 討 論

本試驗樣品處理簡便，經反復進樣，柱壓未見明顯上升，柱效未見明顯下降，由于未見提取等操作，不存在中間步驟引入的誤差，方法簡便，測定結果準確，因此擬定了正文中供試品溶液的制備方法。色譜柱選用了phenomenexLunaC18（5μm，250mm×4.6 mm），Dikma HPLC column（200 mm×4.6 mm，5 μm），兩者峰形都較佳。前者保留時間適中（10～20 min），后者保留時間較長（20 min以后），流動相參照藥典和文獻資料［2］，對流動相進行了篩選，結果以甲醇-乙腈-25 mmol/L磷酸二氫鈉溶液 （30∶30∶40）能排除陰性及雜質峰干擾，士的寧和鹽酸小檗堿均能與相鄰成分達到基線分離，保留時間適中，分離度高。檢測波長兼顧鹽酸小檗堿和士的寧的最大吸收波長，最后確定為254 nm。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：化學工業出版社，2010：36，215.

［2］ 魯燕俠，崔佳，劉鷹.反相高效液相色譜法同時測定祛痹丹膠囊中士的寧和馬錢子堿的含量［J］.中國醫院藥學雜志，2001，21（8）：1.