microRNA在老年前列腺癌患者組織和血清中表達(dá)的變化及其相關(guān)性

許潑實(shí) 周瑞錦 趙 靜 (河南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450003)

microRNA在老年前列腺癌患者組織和血清中表達(dá)的變化及其相關(guān)性

許潑實(shí) 周瑞錦1趙 靜 (河南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450003)

目的探討microRNA(miRNAs)在老年前列腺癌患者組織和血清中的表達(dá)及其相關(guān)性。方法選取2008年1月至2009年1月該院收治的100例老年前列腺癌患者為研究對(duì)象，利用熒光定量技術(shù)系統(tǒng)分析所有患者組織和血清中miRNA(miR-143、let-7a、let-7b、miR-141、miR-202、miR-210)表達(dá)的差異和相關(guān)性。結(jié)果miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌組織中含量低于癌旁正常組織(P＜0.05);而miR-141、miR-202和miR-210在前列腺癌組織中含量高于癌旁組織(P＜0.05)。miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌組織中表達(dá)水平隨分化程度降低而降低(P＜0.05);而miR-141、miR-202和miR-210在前列腺癌組織的表達(dá)水平隨分化程度降低而升高(P＜0.05)。miRNA在前列腺癌患者血清中的含量低于在癌組織中的表達(dá)，但變化趨勢一致。miRNA在前列腺癌患者癌組織和血清中表達(dá)具有顯著的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為R2=0.843(P＜0.05)。結(jié)論miRNA在前列腺癌患者血清中的含量低于在癌組織中的表達(dá)，但變化趨勢一致，可反映前列腺癌組織的病理特點(diǎn)，可作為前列腺癌早期診斷治療的生物學(xué)標(biāo)記物。

microRNA;老年人前列腺癌;血清;分子標(biāo)記物

有研究報(bào)道，microRNA(miRNAs)是前列腺癌早期診斷及預(yù)后評(píng)估的重要分子標(biāo)記物〔1〕。目前對(duì)miRNA在老年前列腺癌患者中表達(dá)的試驗(yàn)主要集中于腫瘤組織樣本中，而以血清作為樣本的研究較少。本文擬比較miRNA在老年前列腺癌患者組織和血清中表達(dá)的差異和相關(guān)性，以期為miRNA的早期診斷及方便取材提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2008年1月至2009年1月我院收治的100例老年前列腺癌患者為研究對(duì)象，并選取同時(shí)期我院體檢中心12例相同年齡段的男性健康體檢者為對(duì)照。病例組患者年齡65～82歲，平均(73.4±2.1)歲;對(duì)照組患者年齡62～78歲，平均(69.4±1.8)歲。病例組患者手術(shù)前未經(jīng)放療、化療或內(nèi)分泌治療，術(shù)后均獲得完整的臨床及病理資料。病例組所有患者術(shù)后病理診斷組織學(xué)類型均為腺癌;根據(jù)WHO(2004年)前列腺惡性腫瘤組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí):高分化3例，中分化42例，低分化55例。組織檢查以患者手術(shù)標(biāo)本的癌旁正常組織為對(duì)照，血清檢查以健康體檢者為對(duì)照。病例組和對(duì)照組年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 檢測方法 采用基于DNA染料法的熒光定量PCR技術(shù)檢測患者前列腺組織和血清中miRNA(miR-143、let-7a、let-7b、miR-141、miR-202、miR-210)的表達(dá)〔2〕。

將定量的組織或血清RNA樣本5μl，70°C變性5 min，冰上放置3 min，再依次加入 RNase抑制劑、dNTP混合物、MMuLV緩沖液以及M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶，之后分別加入miRNA(miR-143、let-7a、let-7b、miR-141、miR-202、miR-210)特異性莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物，混勻后離心進(jìn)行PCR反應(yīng)。在95℃條件下反應(yīng)15 s，60℃條件下反應(yīng)1 min，按照此提交進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。設(shè)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)(每個(gè)樣本重復(fù)3次)和陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)(不加模板cDNA，以水代替)。

1.3 主要試劑 動(dòng)物組織RNA提取試劑盒和總RNA提取試劑盒購自Norgen公司。反轉(zhuǎn)錄試劑及特異性莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物購自廣州市銳博生物科技有限公司。熒光定量PCR檢測試劑盒購自羅氏應(yīng)用科學(xué)部。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)和方差分析，應(yīng)用Pearson相關(guān)系數(shù)分析。

2 結(jié)果

2.1 miRNA在前列腺癌組織中的表達(dá) miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌組織中含量低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而miR-141、miR-202和miR-210在前列腺癌組織中高表達(dá)，含量高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 前列腺癌組織中miRNA表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性

miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌組織中表達(dá)隨分化程度降低而降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而miR-141、miR-202和miR-210在前列腺癌組織的表達(dá)隨分化程度降低而升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

2.3 前列腺癌患者與健康體檢者血清中miRNA含量的比較miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌患者血清中含量低于健康體檢者，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而

miR-141、miR-202和miR-183在前列腺癌患者血清中含量高于健康體檢者，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

2.4 前列腺癌患者血清中miRNA表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性 miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌患者血清中的含量隨分化程度降低而降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05);而miR-141、miR-202和miR-183在前列腺癌患者血清中的含量隨分化程度降低而升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。見表4。

表1 m iRNA在前列腺癌組織中的表達(dá)(±s，fmol/L，n=100)

表1 m iRNA在前列腺癌組織中的表達(dá)(±s，fmol/L，n=100)

與癌旁組織比較:1)P＜0.05

組別 let-7a let-7b miR-141 miR-143 miR-202 miR-210癌組織 1 121.5±110.31) 1 015.3±104.91) 2 036.3±261.51) 1 275.3±149.21) 2 316.7±214.61) 2 237.2±267.11)6.2±281.3 1 004.5±139.8 1 132.5±147.2癌旁組織 1 921.2±213.1 2 106.4±341.7 1 391.2±121.4 2 14

表2 前列腺癌組織中m iRNA表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性(±s，fmol/L)

表2 前列腺癌組織中m iRNA表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性(±s，fmol/L)

組別 n let-7a let-7b miR-141 miR-143 miR-202 miR-210高分化 3 1 351.1±210.3 1 235.3±124.5 1 425.8±138.4 1 325.3±249.2 1 329.3±127.1 1 027.4±121.3中分化 42 1 121.4±131.4 1 036.4±111.7 1 791.5±171.2 1 126.2±181.3 1 704.5±147.8 1 532.5±177.2低分化 55 1 439.4±100.2 991.2±106.8 2 235.3±221.5 1 024.6±112.7 2 456.7±224.6 2 133.2±217.1

表3 m iRNA在前列腺癌患者與健康體檢者血清中含量比較(±s，fmol/L)

表3 m iRNA在前列腺癌患者與健康體檢者血清中含量比較(±s，fmol/L)

與健康對(duì)照組比較:1)P＜0.05

組別 n let-7a let-7b miR-141 miR-143 miR-202 miR-210病例組 100 1 061.5±112.31) 955.3±104.91) 1 936.3±241.51) 1 065.3±149.21) 2 116.7±209.61) 2 137.2±217.11)健康對(duì)照組 12 1 524.2±212.1 1 436.4±241.7 1 191.2±121.4 1 946.2±251.3 984.5±139.8 932.5±127.2

表4 前列腺癌患者血清中m iRNA表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性(±s，fmol/L)

表4 前列腺癌患者血清中m iRNA表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性(±s，fmol/L)

組別 n let-7a let-7b miR-141 miR-143 miR-202 miR-210高分化 3 1 131.1±176.3 1 131.3±114.5 1 125.8±128.4 1 125.3±142.2 1 129.3±117.1 1 007.4±131.3中分化 42 1 021.4±121.4 998.4±101.7 1 391.5±141.2 1 016.2±119.3 1 504.5±137.8 1 432.5±147.2低分化 55 929.4±99.2 971.2±96.8 2 075.3±161.5 994.6±92.7 2 256.7±214.6 2 033.2±187.1

2.5 miRNA在前列腺癌患者腫瘤組織和血清中表達(dá)的相關(guān)性分析 上述結(jié)果顯示，miRNA在前列腺癌患者血清中的含量低于在癌組織中的表達(dá)，但變化趨勢一致。應(yīng)用Pearson相關(guān)系數(shù)發(fā)現(xiàn)，miRNA在前列腺癌患者癌組織和血清中的表達(dá)具有顯著的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為R2=0.843(P＜0.05)。

3 討論

miRNAs是一類內(nèi)生、小分子非編碼的調(diào)控RNAs，在血清和血漿中與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，具有異常高的穩(wěn)定性〔3〕，這為循環(huán)miRNAs作為生物標(biāo)記物進(jìn)行檢測提供了可能。已發(fā)現(xiàn)腫瘤患者的循環(huán)核酸中存在源自腫瘤的miRNAs分子，且具有組織特異性〔4〕，不同的腫瘤有不同的miRNAs表達(dá)譜，提示循環(huán)miRNAs分子可能成為無創(chuàng)診斷癌癥的一個(gè)有效方法，一個(gè)理想的基于血液的腫瘤標(biāo)志物。

目前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)數(shù)十種在前列腺癌中異常表達(dá)或具有特異性的miRNAs，而且在早期與晚期、激素依賴與非依賴前列腺癌組織中有不同的表達(dá)譜〔5〕。在腫瘤中特異性高表達(dá)的miRNAs稱為“癌基因”，而較良性增生或正常組織降低的miRNAs稱為“抑癌基因”。前列腺癌相關(guān)癌基因有miR-184、202、210、296、370、498、503 等，前列腺癌相關(guān)抑癌基因有 let-7a、7b，miR-16、23 a、23 b、26 a、125 a、125 b、141、143、145、221、222等〔6〕。筆者通過眾多文獻(xiàn)篩選出與前列腺癌密切相關(guān)的6個(gè)miRNA作為研究對(duì)象，檢測它們在前列腺癌患者癌組織和血清中的含量，探討把檢測血清miRNA含量作為前列腺癌患者早期診治指標(biāo)的可行性。

外周靜脈血血清中miRNA的含量能否代表具有特異性的癌組織中miRNA的表達(dá)目前尚未達(dá)成共識(shí)〔7〕。前列腺癌患者血清中miRNA含量較組織中低，但具有較高穩(wěn)定性，取材方便，有利于早期診斷。有研究報(bào)道，miRNA的表達(dá)與前列腺癌組織分化程度具有一定相關(guān)性〔8〕。本資料結(jié)果說明miRNA表達(dá)水平可提示前列腺癌的分化程度，而且miRNA在血清中的表達(dá)水平可反映前列腺癌的病理特點(diǎn)，進(jìn)而證明血清miRNA含量檢測可作為前列腺癌的生物學(xué)指標(biāo)，為乳腺癌早期篩查和診斷提供依據(jù)。筆者通過設(shè)計(jì)反轉(zhuǎn)錄莖環(huán)引物和特異性的PCR引物，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄和cDNA擴(kuò)增，經(jīng)熒光定量PCR技術(shù)檢測miRNA表達(dá)，分析miRNA的特異性表達(dá)。比傳統(tǒng)的蛋白分子標(biāo)記方法更加有效。

綜上所述，miRNA在前列腺癌患者血清中的含量低于在癌組織中的表達(dá)，但變化趨勢一致，可作為前列腺癌早期診斷治療的生物學(xué)標(biāo)記物。

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R737

A

1005-9202(2012)12-2482-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.016

1 河南省人民醫(yī)院泌尿外科

許潑實(shí)(1969-)，男，碩士，副主任技師，主要從事免疫檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究。

〔2011-09-10收稿 2011-10-30修回〕

(編輯 徐 杰)