系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿干擾素α的表達(dá)及臨床意義＊

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種累及多系統(tǒng)的自身免疫病，患者體內(nèi)存在多種自身抗體，抗體與抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物，沉積于靶組織、激活補(bǔ)體，引起一系列炎癥介質(zhì)釋放從而造成器官組織的損傷。其中干擾素（interferon，IFN）-α與SLE發(fā)病及疾病活動密切相關(guān)。本研究通過檢測SLE患者血清IFN－α水平，進(jìn)一步分析其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所選病例均為2010年7～12月本院風(fēng)濕免疫科就診的SLE患者，共57例，診斷符合1997年美國風(fēng)濕病協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)［1］，其中，女55例，男2例；平均（34.03±12.81）歲；對照組31例為本院健康志愿者，其中，女30例，男1例，平均（32.94±7.46）歲。兩組性別、年齡均衡，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。本實驗獲得本單位倫理委員會批準(zhǔn)，所有受試對象均知情同意。SLE活動性指數(shù)（SLE disease activity index，SLEDAI）的評分標(biāo)準(zhǔn)參見文獻(xiàn)方法［2］。

1.2 方法 采清晨空腹靜脈血5mL，肝素抗凝。離心后，取血漿，置PC管中－80℃保存，IFN-α的檢測采用雙抗體夾心ELISA法，試劑盒購自美國Bender公司，具體操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。分別根據(jù)SLE患者特異性抗體和典型癥狀的有無，將其分成不同組別。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用相關(guān)統(tǒng)計軟件處理，定量資料正態(tài)分布以±s表示，偏態(tài)分布以中位數(shù)（P25～P75）表示。兩樣本均數(shù)的比較采用t檢驗或Mann-Whitney檢驗。多樣本均數(shù)的比較采用ANOVA檢驗或Kruskal-Wallis檢驗。相關(guān)分析采用Pearson檢驗或Spearman檢驗。檢驗水準(zhǔn)α取0.05。

2 結(jié) 果

SLE患者組血漿IFN－α表達(dá)水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＝0.021），見表1。根據(jù)SLEDAI將57例SLE分成兩組：低活動組（27例，SLEDAI＜10）和高活動組（30例，SLEDAI≥10）。將對照組、低活動組、高活動組患者血清IFN-α表達(dá)水平進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＝0.032），見表1。將60例SLE患者血漿IFN-α水平與臨床定量指標(biāo)ESR、24h尿蛋白定量、補(bǔ)體（C3和C4）、血IgG、抗核抗體（antinuclear antibodies，ANA）半定量、抗ds-DNA抗體半定量、SLEDAI等作相關(guān)性分析。IFN-α水平與ANA半定量、抗ds-DNA抗體半定量、C3、IgG差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而與 ESR、C4、SLEDAI、24h尿蛋白定量等差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。比較不同組別之間血漿IFN－α表達(dá)水平的差異，見表3。其中血漿IFN－α表達(dá)水平在抗核小體抗體、抗U1snRNP抗體陽性組要分別高于陰性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在SLE患者中，有肝酶升高組、有血液系統(tǒng)病變組要分別高于相應(yīng)的無癥狀組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組IFN－α表達(dá)水平

表2 IFN-α表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析

表3 SLE患者不同組別之間血漿IFN-α表達(dá)水平的差異

3 討 論

SLE是自身免疫性疾病的原型代表，其患者體內(nèi)存在明顯的免疫調(diào)節(jié)紊亂及多種細(xì)胞因子的異常表達(dá)。其中IFN－α是一類具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子。以往文獻(xiàn)報道，SLE患者IFN－α在血漿中水平升高［3］，而且一些本身不伴有自身免疫性疾病的患者經(jīng)IFN-α治療后會出現(xiàn)抗ANA、抗dsDNA 抗體，甚至 SLE 綜合征［4－5］。

本研究發(fā)現(xiàn)SLE患者組血漿IFN-α表達(dá)水平高于對照組，這與Ytterberg和Schnitzer［3］研究結(jié)果一致。雖未發(fā)現(xiàn)IFN-α與SLEDAI具有統(tǒng)計學(xué)意義的相關(guān)性，但發(fā)現(xiàn)IFN-α表達(dá)水平在病情高活動組與低活動組、對照組之間存在組間差異，說明IFN－α與SLE病情具有一定的相關(guān)性。這在鄧姍等［6］的研究中表現(xiàn)更加充分，他們發(fā)現(xiàn)IFN－α與SLEDAI具有統(tǒng)計學(xué)意義的相關(guān)性。

本研究顯示，IFN-α水平與ANA半定量、抗ds-DNA抗體半定量、C3、IgG有統(tǒng)計學(xué)意義相關(guān)性，而與紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentatum rate，ESR）、C4、SLEDAI、24h尿蛋白定量等無相關(guān)性。另外，血漿IFN－α表達(dá)水平在抗核小體抗體、抗U1snRNP抗體陽性組要分別高于陰性組，有肝酶升高組、有血液系統(tǒng)病變組要分別高于相應(yīng)的無癥狀組。國內(nèi)外的相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)IFN-α水平與不同臨床指標(biāo)的相關(guān)性。例如，顧鐳等［7］研究發(fā)現(xiàn)IFN－α水平與免疫學(xué)指標(biāo)抗ds-DNA抗體水平亦呈正相關(guān)，與C3水平負(fù)相關(guān)。鄧姍等［6］發(fā)現(xiàn)血漿IFN－α水平與SLEDAI積分和抗dsDNA抗體水平呈正相關(guān)，與補(bǔ)體C3、C4和白細(xì)胞數(shù)量呈負(fù)相關(guān)；血漿IFN-α水平與患者發(fā)熱和面部紅斑有關(guān)。最新 Weckerle等［8］的研究也發(fā)現(xiàn)IFN-α水平與抗ds-DNA抗體、抗RNP抗體正相關(guān)。另外，Lovgren等［9］發(fā)現(xiàn)從狼瘡患者血漿中分離出的IgG同細(xì)胞壞死產(chǎn)物或純化snRNP抗體共同存在時可刺激漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（plasmacytoid dendritic cells，pDC）產(chǎn)生IFN－α，這種激活I(lǐng)FN－α的作用是通過pDC內(nèi)涵體膜表面的Toll樣受體（Toll like receptor，TLR）7受體來實現(xiàn)的。全基因掃描也證實大多數(shù)狼瘡患者存在IFN基因標(biāo)簽［10］，與一些嚴(yán)重的并發(fā)癥相關(guān)，比如狼瘡腎炎和血液系統(tǒng)損害。相對成年患者，兒童SLE患者通常更易合并系統(tǒng)損害，在疾病早期階段也顯示出IFN-α的高關(guān)聯(lián)性［10］。這些均提示IFN-α的活化在疾病早期進(jìn)程中的重要作用。

關(guān)于IFN-α參與SLE發(fā)病的具體機(jī)制，現(xiàn)有的研究結(jié)果表明，Ⅰ型IFN信號對T細(xì)胞、B細(xì)胞及DC細(xì)胞具有調(diào)節(jié)效應(yīng)，通過打破自身抗原免疫耐受、促進(jìn)自身抗體和免疫復(fù)合物的形成，在SLE發(fā)病過程中起著重要作用［11－12］。病毒感染或其他一些環(huán)境誘因可導(dǎo)致IFN－α的產(chǎn)生及死亡細(xì)胞成分的釋放。這些凋亡和壞死細(xì)胞的胞外自身抗原啟動B細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體。同時會形成免疫復(fù)合物，作為內(nèi)源性的誘導(dǎo)劑，免疫復(fù)合物可以通過BCR和TLR激活B細(xì)胞分泌自身抗體，還可通過FcγR和TLR誘導(dǎo)pDC分泌更多的IFN－α。IFN-α可以促進(jìn)B細(xì)胞分化以及向漿細(xì)胞的成熟，促進(jìn)Ig類型的轉(zhuǎn)化，延長記憶細(xì)胞的生存。IFN-α還可以增加自身抗原（如Ro52［13］）的暴露，誘導(dǎo)DC細(xì)胞成熟，成熟的DC可以捕獲核抗原，并遞呈給CD4＋T細(xì)胞。活化的T細(xì)胞刺激自身反應(yīng)性B細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體，結(jié)果導(dǎo)致核抗原耐受喪失、自身抗體分泌及自身免疫復(fù)合物的形成，免疫復(fù)合物又可以通過TLR7、TLR9進(jìn)一步刺激pDC產(chǎn)生更多的IFN-α。另一方面成熟的DC細(xì)胞還可以激活CD8＋T細(xì)胞。細(xì)胞毒癥T細(xì)胞在細(xì)胞炎性因子的作用下趨化到病原體存在的部位導(dǎo)致組織損傷產(chǎn)生大量核小體，被pDC和成熟的DC捕獲，進(jìn)一步增強(qiáng)自身免疫反應(yīng)過程。相應(yīng)的，傳統(tǒng)DCs和巨噬細(xì)胞上調(diào)表達(dá)共刺激分子，并更加有效地抗原呈遞。另外，IFN-α誘導(dǎo)的趨化因子也與SLE患者疾病活動密切相關(guān)［14］。基于IFN－α在SLE患者體內(nèi)的高表達(dá)以及在發(fā)病中的潛在機(jī)制，目前已有研究針對IFN－α對SLE進(jìn)行干預(yù)［15－16］。

本研究采用經(jīng)典的雙抗體夾心ELISA法檢測到IFN-α在SLE患者中的異常表達(dá)，且與疾病活動程度及臨床特異性指標(biāo)有一定的相關(guān)性。進(jìn)一步闡明了IFN-α及相關(guān)信號通路在SLE發(fā)病機(jī)制中的作用，對SLE患者病情活動判斷、復(fù)發(fā)及治療具有一定價值，也為診斷和治療SLE了提供新的思路和方法。

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