白鴨禽流感H5亞型疫苗免疫促進(jìn)劑的篩選

張濟(jì)培，陳建紅，劉佑明，廖潔丹，張福英，羅貴庭，陳海文，劉成彪

（佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣東 佛山 528231）

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，許多藥物包括一些維生素、礦物質(zhì)、激素和中藥及其提取物對(duì)家禽免疫具有促進(jìn)作用，但促進(jìn)效果常因疫苗及家禽種類不同而有較大差異。水禽禽流感油乳滅活疫苗免疫效果經(jīng)過(guò)免疫程序相關(guān)多種因素篩選仍然常會(huì)出現(xiàn)應(yīng)答不良的情況［1－4］，通過(guò)免疫促進(jìn)的研究不失為解決問(wèn)題的一個(gè)途徑。本試驗(yàn)對(duì)白鴨禽流感油乳滅活苗免疫促進(jìn)劑進(jìn)行篩選試驗(yàn)，旨在篩選出適合于水禽的免疫促進(jìn)劑或免疫促進(jìn)劑組合。

1 材料與方法

1.1 免疫促進(jìn)劑 禽源干擾素（冀中藥業(yè)有限公司），黃芪多糖溶液（0.02 g／m L，江西中成藥業(yè)集團(tuán)有限公司），人參皂苷（95%，東方植物保健科技有限公司），禽用抗菌肽B-001（圣西馬生物技術(shù)有限公司），植物血細(xì)胞凝集素（PHA，印尼思特生物制品有限公司），蜂靈散（采用蜂膠、靈芝粉、多種維生素和多種氨基酸等按比例配制）。

1.2 疫苗、抗原與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 H5N1 AI油乳苗（2009098，經(jīng)快速效價(jià)檢測(cè)抗原HA效價(jià)為4log2）、AI H5 HI抗原，均由哈爾濱維科公司生產(chǎn)。1日齡仙湖肉鴨，本校科研禽場(chǎng)提供。

1.3 動(dòng)物分組與處理 將1日齡仙湖肉鴨隔離飼養(yǎng)至7日齡隨機(jī)抽檢30只AI H5母源抗體，13日齡隨機(jī)分為17組，11只／組。1～15組分別于14 d皮下注射AI疫苗0.3 m L／只、21日齡和28日齡皮下注射0.6 m L／只。每次接種疫苗前后3 d連續(xù)使用3次促進(jìn)劑：1組皮下注射3倍量禽源干擾素／只，2組喂服黃芪多糖0.02 g／只，3組喂服人參皂苷1 g／只，4組喂服抗菌肽1 g／只，5組喂服蜂靈散0.15 g／只，6組皮下注射血凝素0.02 mg／只，7～15組分別使用各促進(jìn)劑的兩兩組合。16組為接種疫苗不使用促進(jìn)劑對(duì)照，17組為不接種疫苗不使用促進(jìn)劑對(duì)照組。各組試驗(yàn)鴨從13日齡（首免）開(kāi)始每間隔一周采血作 AI H5 HI抗體檢測(cè)［5－6］。

2 結(jié)果

2.1 6種免疫促進(jìn)劑單用組的免疫促進(jìn)結(jié)果 各組小鴨各周采血分離血清檢測(cè)AI HI抗體均值見(jiàn)表1。

表1 各組小鴨各周采血分離血清檢測(cè)AI HI抗體均值（log2）

從表1可見(jiàn)，試驗(yàn)小鴨母源抗體在第3周降至最低值2log2以下，疫苗免疫組抗體均值均低于不免疫組，提示AI油乳疫苗免疫接種會(huì)一定程度加快相應(yīng)母源抗體的消散。3周齡所有免疫組抗體水平均開(kāi)始快速上升，多數(shù)組于第6周齡達(dá)到值峰。其中血凝素組、蜂靈散組、抗菌肽組抗體峰值相近達(dá)9log2或以上，高于免疫對(duì)照組1log2以上。禽源干擾素組、人參皂苷組與免疫對(duì)照組抗體峰值很相近，為7.7log2～9.0log2之間。黃芪多糖組抗體峰值最低為7.3lg2，約低于免疫對(duì)照組1個(gè)滴度。

2.2 6種免疫促進(jìn)劑兩兩組合組的免疫促進(jìn)結(jié)果

各組合試驗(yàn)組小鴨各周采血分離血清檢測(cè)AI HI抗體均值見(jiàn)表2

表2 各組小鴨各周采血分離血清檢測(cè)AI HI抗體均值（log2）

從表2可見(jiàn)，干擾素＋蜂靈散組抗體峰值比干擾素單用組高1.6log2，比蜂靈散單用組高0.46log2；干擾素＋黃芪多糖組比干擾素單用組高1.64log2，比黃芪多糖單用組高2.34log2，各監(jiān)測(cè)點(diǎn)抗體水平多數(shù)高于免疫對(duì)照組峰值近2個(gè)滴度（9.64∶7.75）；人參皂苷＋抗菌肽組免疫后抗體上升最快，峰值最高（9.09log2），相對(duì)于人參皂苷單獨(dú)處理組（7.73log2）顯示出較明顯的配伍效應(yīng)。其余各組合免促組無(wú)明顯的配伍促進(jìn)效應(yīng)，甚至配伍后免促效果會(huì)有所降低。

3 討論

關(guān)于免疫促進(jìn)，一直受到醫(yī)學(xué)及獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重視。在家禽方面目前對(duì)雞的免疫促進(jìn)研究最多，而且主要集中于黃芪及其有效單體提純物、人參葉皂苷及有關(guān)復(fù)方的研究［7－13］。而對(duì)水禽的免疫促進(jìn)研究要比雞少得多，且篩選出的免疫調(diào)節(jié)劑其免疫促進(jìn)效果并不甚理想［14］。近年來(lái)水禽養(yǎng)殖量不斷擴(kuò)大，而水禽傳染病種類日益增加，水禽尤其是幼禽發(fā)病、死亡率有上升傾向，其原因與水禽（尤其是白鴨）在2周齡內(nèi)由于免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未成熟，免疫應(yīng)答的能力低下，只形成短暫和較低的免疫應(yīng)答過(guò)程有關(guān)，故如何提高幼齡期鴨對(duì)禽流感、水禽副黏病毒病等常接疫苗的免疫抗體，對(duì)有效預(yù)防危害水禽的幾種急烈性傳染病的發(fā)生具有臨床意義。開(kāi)展免疫促進(jìn)劑研究，篩選出有效的免疫促進(jìn)劑，為改善幼齡水禽的免疫反應(yīng)能力較為有效的方法。

本試驗(yàn)將蜂靈散、禽源干擾素、黃芪多糖溶液、人參皂苷、禽用抗菌肽、植物血細(xì)胞凝集素六種免促進(jìn)劑單用及兩兩組合，對(duì)仙湖三號(hào)小鴨作禽流感油乳滅活疫苗免疫促進(jìn)試驗(yàn)。結(jié)果表明，幾種免疫促進(jìn)劑單獨(dú)對(duì)小鴨作試驗(yàn)組，首免后1周免疫鴨抗體水平均開(kāi)始快速上升，多數(shù)組于第6周齡達(dá)到峰值（7.3log2～9.18log2），其中以血凝素組、蜂靈散組、抗菌肽組抗體峰值相近且最高，高于免疫對(duì)照組1個(gè)滴度以上，而黃芪多糖組抗體峰值最低并低于免疫對(duì)照組，禽源干擾素組、人參皂苷組與免疫對(duì)照組抗體峰值很相近，表明幾種免疫促進(jìn)劑單獨(dú)對(duì)小鴨作試驗(yàn)，以蜂靈散、抗菌肽、血凝素3種免疫促進(jìn)效果最好。6種免疫促進(jìn)劑兩兩組合對(duì)小鴨作試驗(yàn)組，各免疫組免疫抗體在6～7周齡達(dá)到峰值（7.3log2～9.6log2），其中干擾素＋蜂靈散組抗體峰值比干擾素單用組高1.6log2，比蜂靈散單用組高0.46log2；干擾素＋黃芪多糖組比干擾素單用組高1.64log2，比黃芪多糖單用組高2.34log2，各監(jiān)測(cè)點(diǎn)抗體水平多數(shù)高于免疫對(duì)照組峰值近2個(gè)滴度（9.64∶7.75）；人參皂苷＋抗菌肽組免疫后抗體上升最快，峰值最高（9.09log2），相對(duì)于人參皂苷單獨(dú)處理組（7.73log2）顯示出較明顯的配伍效應(yīng)。其余各組合免促組無(wú)明顯的配伍促進(jìn)效應(yīng)，甚至配伍后免促效果會(huì)有所降低。本試驗(yàn)結(jié)果提示，干擾素＋蜂靈散組合免促組，對(duì)小鴨禽流感免疫促進(jìn)作用最好，與之相近效果的還有植物血凝素免促組、蜂靈散單獨(dú)免促組，其后依次為人參皂苷＋抗菌肽組、抗菌肽單獨(dú)免促組、干擾素＋黃芪多糖免促組。而抗菌肽＋蜂靈散配伍免促組抗體水平低于免促對(duì)照組，說(shuō)明以免促最佳的單因子相加作配伍，不一定能收到更佳的效果。試驗(yàn)初步篩選出效果較為明顯的雛鴨禽流感疫苗免疫促進(jìn)劑，為以后的進(jìn)一步研究及應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

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