溫毒清浸膏對肉雞免疫功能的影響

湯法銀，吳玉臣，郭 爽

（1.鄭州牧業(yè)工程高等專科學(xué)校藥物工程系，河南 鄭州 450011；

2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南 鄭州 450002）

隨著社會(huì)的發(fā)展和人們生活水平的提高，越來越多的人關(guān)注食品衛(wèi)生與安全。這也要求畜牧業(yè)在發(fā)展的過程中，對疾病的預(yù)防和治療必須少加或不加抗生素，以減少其殘留對人的危害。許多學(xué)者認(rèn)為中藥可以提高機(jī)體的抵抗力，抵抗多種細(xì)菌和病毒的攻擊。溫毒清浸膏是以2005年版《中國獸藥典》收載溫毒清散為基礎(chǔ)，進(jìn)行加減化裁，并經(jīng)過現(xiàn)代浸提技術(shù)、濃縮技術(shù)和膏劑成型技術(shù)制成的用于飲水的浸膏劑，主要成分由黃芩、金銀花、連翹、黃連、梔子、黃芪、板藍(lán)根、赤芍、甘草、石膏、知母、杏仁等12味中藥組成，具有清熱解毒、瀉火除煩、涼血止痢、扶正祛邪之功效，為進(jìn)一步驗(yàn)證其功效，筆者考察了其對艾維茵肉雞免疫功能的影響，為該制劑臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 溫毒清浸膏制備 溫毒清浸膏由本校藥物工程系中獸醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)室研制，每1毫升相當(dāng)于原藥材3 g。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組 選1日齡艾維茵肉雞400羽，由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)種雞場提供。將試驗(yàn)雞隨機(jī)分為四組，每組25羽，試驗(yàn)組3組，對照組1組，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物的處理 試驗(yàn)肉雞的飼養(yǎng)按正常標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行飼喂，自由飲水。試驗(yàn)組肉雞的飲水中分別加入3個(gè)不同劑量的溫毒清浸膏，分別為高劑量組（1 500 g／t），中劑量組（1 000 g／t），低劑量組（500 g／t）；對照組正常飲水。各組在7日齡接種新城疫疫苗（購自中牧實(shí)業(yè)股份有限公司），14日齡第2次免疫。各組在10、20、30 d和40 d每組選5羽試驗(yàn)雞無菌采血后稱重宰殺，取其腔上囊、脾臟 、胸腺分別稱重。

1.4 測定指標(biāo)

1.4.1 免疫器官指數(shù)測定 取1、10、20、30 d和40 d宰殺后的試驗(yàn)雞腔上囊、脾臟 、胸腺，用濾紙吸干血液后稱重，并計(jì)算其免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)（g／kg）＝器官重量／體重。

1.4.2 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率測定 刀豆蛋白（ConA）與MTT，均購自Sigma公司；RP1640培養(yǎng)基，購自Invitrogen公司。采用 MTT法檢測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率［1］。1.4.3 血清中抗體水平測定 采用半微量血凝抑制試驗(yàn)法（HI）［2］，HI抗體效價(jià)以 Log2X 表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 免疫器官指數(shù)測定結(jié)果

2.1.1 對試驗(yàn)雞腔上囊指數(shù)的影響 溫毒清浸膏對腔上囊指數(shù)的影響見表1。

表1 溫毒清浸膏對腔上囊指數(shù)的影響 （g／kg）

從表1可以看出，10 d試驗(yàn)雞腔上囊指數(shù)對照組顯著低于各試驗(yàn)組（P＜0.05），各試驗(yàn)組間差異不顯著（P＞0.05）；20 d試驗(yàn)雞腔上囊指數(shù)對照組顯著低于低劑量組和中劑量組（P＜0.05），極顯著低于高劑量組（P＜0.01），低劑量組和中劑量組差

異不顯著（P＞0.05），但低劑量組和中劑量組顯著低于高劑量組（P＜0.05）；30 d和40 d試驗(yàn)雞腔上囊指數(shù)，對照組極顯著低于各試驗(yàn)組（P＜0.01），各試驗(yàn)組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.1.2 溫毒清浸膏對試驗(yàn)雞胸腺指數(shù)的影響 見表2。

表2 溫毒清浸膏對胸腺指數(shù)的影響 （g／kg）

從表2可以看出，10 d試驗(yàn)雞胸腺指數(shù)對照組顯著低于各試驗(yàn)組（P＜0.05），各試驗(yàn)組間差異不顯著（P＞0.05）；20、30、40 d試驗(yàn)雞胸腺指數(shù)對照組極顯著低于各試驗(yàn)組（P＜0.01），各試驗(yàn)組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.1.3 溫毒清浸膏對試驗(yàn)雞脾臟指數(shù)的影響 見表3。

表3 溫毒清浸膏對脾臟指數(shù)的影響 （g／kg）

從表3可以看出10、20、30、40 d試驗(yàn)雞胸腺指數(shù)對照組均極顯著低于各試驗(yàn)組（P＜0.01），各試驗(yàn)組間差異均不顯著（P＞0.05）。

2.2 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率測定結(jié)果 見表4。

表4 溫毒清浸膏對試驗(yàn)雞淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響 （%）

由表4可以看出，10 d和20 d試驗(yàn)肉雞其淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率對照組極顯著低于各試驗(yàn)組（P＜0.01），低劑量組顯著低于中劑量組和高劑量組（P＜0.05），中劑量組和高劑量組間差異不顯著（P＞0.05）；30 d試驗(yàn)肉雞其淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率對照組顯著低于低劑量組（P＜0.05），極顯著低于中劑量組和高劑量組（P＜0.01），中劑量組和高劑量組間差異不顯著（P＞0.05）；40 d試驗(yàn)肉雞其淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率對照組顯著低于低劑量組（P＜0.05），極顯著低于中劑量組和高劑量組（P＜0.01），各試驗(yàn)組間差異顯著（P＜0.05）。

2.3 血清中抗體水平檢測 經(jīng)半微量血凝抑制試驗(yàn)檢測血清中ND的抗體效價(jià)，其結(jié)果見表5。

表5 溫毒清浸膏對血清中ND的抗體效價(jià)的影響

由表5可以看出，試驗(yàn)雞10 d時(shí)，各組間抗體效價(jià)無明顯差異（P＞0.05）；20、30、40 d時(shí)對照組與試驗(yàn)組間差異極顯著（P＜0.01），各試驗(yàn)組間差異不顯著（P＞0.05）。

3 分析與討論

3.1 溫毒清浸膏對免疫器官指數(shù)的影響 胸腺是禽類細(xì)胞免疫的中樞器官，是T細(xì)胞分化發(fā)育的主要場所。若切除新生動(dòng)物的胸腺，該動(dòng)物則缺乏T細(xì)胞，免疫功能將明顯降低。腔上囊是禽類特有的體液免疫中樞器官，是B細(xì)胞分化發(fā)育的主要場所。胚胎后期或剛孵化的雛禽切除腔上囊后，相應(yīng)的免疫功能降低或消失，細(xì)胞 （分泌抗體）減少或消失，抗原刺激后不能產(chǎn)生特異性抗體，體液免疫受到抑制。脾臟是禽類最大的外周免疫器官，家禽的脾臟體積較小，主要參與體液免疫和細(xì)胞免疫。因此，免疫器官的發(fā)育情況與機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱有著密切的聯(lián)系。目前常用胸腺 、脾臟 、腔上囊指數(shù)來反映機(jī)體免疫功能的狀態(tài)。

此次試驗(yàn)結(jié)果表明，飲用溫毒清浸膏10 d、20 d可顯著或極顯著提高其免疫器官指數(shù)，飲用溫毒清浸膏30 d、40 d后可極顯著提高其免疫器官指數(shù)。葉小芳等（2008）研究證明，口服中藥復(fù)方多糖及其均一組分、黃芪多糖250 mg／kg可顯著提高肉雛雞免疫器官指數(shù)［3］，與本試驗(yàn)一致。吳玉臣（2008）等曾用黃芪等中藥方以小鼠為試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)此配方對小鼠的免疫器官指數(shù)無明顯影響［4］。這可能是由于試驗(yàn)動(dòng)物不同所致。

3.2 溫毒清浸膏對試驗(yàn)肉雞淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響 本研究表明，低劑量組可顯著或極顯著提高10、20、30、40 d淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，中劑量組和高劑量組可極顯著提高各日齡淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。司昌德等（2008）在飼料中添加0.1%和0.3%黃芪多糖，結(jié)果表明，溫毒清浸膏能顯著提高血清淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率［5］，與本試驗(yàn)一致。馬得瑩等（2005）研究表明，女貞子、五味子、四君子湯和六味地黃丸均可顯著提高雛雞脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率［1］。

3.3 溫毒清浸膏對血清中抗體水平的影響 本試驗(yàn)證明，飲用各劑量組溫毒清浸膏后可極顯著提高機(jī)體注射ND疫苗一段時(shí)間后的抗體水平。司昌德等（2008）研究表明，黃芪多糖可顯著提高肉仔雞血清抗ND抗體水平［5］，與本報(bào)道一致。

4 結(jié)語

溫毒清浸膏可顯著提高肉仔雞免疫器官指數(shù)，提高其細(xì)胞免疫功能和體液免疫功能。中劑量（1 000 g／t）為最適合添加量。

［1］馬得瑩，單安山，李群道，等.中草藥對蛋雛雞生長性能和免疫功能的影響［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2005，25（1）：67-70.

［2］陰天榜.家禽免疫學(xué)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)科技出版社，1999：260-269.

［3］葉小芳，谷新利，劉剛，等.中藥復(fù)方多糖及其均一組分對雛雞免疫功能影響的研究［J］.中國獸醫(yī)雜志，2008，44（12）：70-73.

［4］吳玉臣，郭爽，唐光武，等.自擬中藥復(fù)方對小白鼠免疫功能的影響研究［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2008，35（1）：108-110.

［5］司昌德，閔亞宏.黃芪多糖對肉仔雞免疫功能的影響［J］.中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，30（12）：978-980.