ER、PR和GLUT-1在子宮內膜息肉中的表達及意義

郭偉男 孫麗敏 鄭小霞 張鍾元 李夢軒 翟雨佳 張成順

子宮內膜息肉(EP)是良性內膜腺體和纖維性間質組成的瘤樣病變，在青春期后的任何年齡均可發生，多數發生在35歲以后，以絕經前后為發病的高峰，可引起異常子宮出血、不育等。文獻報道其患病率為24%～25%［1］。3.3%的EP可發生癌前病變，3.0%可發生惡變，特別是絕經后EP患者的惡變率更高［2］。目前，EP的病因和發病機制尚未完全清楚。本實驗通過檢測子宮內膜息肉及正常增殖期子宮內膜中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)及葡萄糖轉運蛋白-1(GLUT-1)的表達，探討子宮內膜息肉形成的機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年1月至2010年8月就診于我院門診宮腔鏡檢查，并檢出EP的已婚女性38例為病例組，其中置宮內節育器(不含激素及抗炎藥物)13例，年齡25～46歲;近3個月未用任何甾體激素類藥物;排除生殖器官畸形、合并肝腎等慢性疾病的患者。選取同期因生殖道畸形而行宮腔鏡檢查的女性，月經規律，刮取少量子宮內膜作為對照組，共19例(患者知情并同意)。以上標本均取自月經干凈后3～7 d，術后分別經病理證實為EP和增生期子宮內膜。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集:用0.9%氯化鈉溶液清洗經宮腔鏡剪取的子宮內膜及息肉組織后迅速投入液氮中保存。采用Trizol法提取細胞總RNA，取5 μl經1.5%瓊脂糖凝膠電泳，檢測完整性。

1.2.2 cDNA合成:將RNA模板10 μl、引物1 μl混勻置于70℃水浴5 min，后冰浴30 s，再加入二硫蘇糖醇(DTT)5 μl、5×緩沖液10 μl、核糖核酸酶抑制劑(RNase Inhibitor)0.5 μl、三磷酸脫氧核苷(dNTP)2 μl、M-MLV逆轉錄酶0.5 μl和雙氧水21 μl，30℃ 10 min，42℃ 30 min，95℃滅活逆轉錄酶5 min。1.2.3 引物:ER引物:上游5’-GGAGACATGAGAGCTGCCA-3’下游5’-CCAGCAGCATGTCGAAGATC-3’目的片段長度為438bp;PR引物:上游5’-TCATGAGCCGGTCCGGGTGCAAG-3’，下游5’-CGGGGTGGACGAGGCACAGG-3’，目的片段長度為196bp;GLUT-1引物:上游5’-TCATCGTGGCTGAACTCTTCAG-3’下游5’-TCACACTTGGGAATCAGCCCC-3’，目的片段長度為231bp;β-actin引物:Actb-F:5’-TACCCAGGCATTGCTGACAGG-3’，Actb-R:5’-ACTTGCGGT GCACGATGGA-3’，目的片段長度205bp。

1.2.4 PCR擴增:擴增體系包括:上下游引物:2.5 μl、逆轉錄產物(cDNA):1 μl、dNTP(2 mmol/L):1 μl、Buffer:2 μl、ddH2O:14.85 μl，共25 μl。

ER擴增條件:95℃ 預變性5 min，95℃變性30 s、53℃退火30 s、72℃30 s，72℃ 延伸5 min，30個循環，4℃保存;PR擴增條件:95℃預變性5 min，進入循環，95℃變性45 s、55℃退火30 s、72℃延伸30 s，30個循環后72℃最后延伸5 min，4℃保存;GLUT-1擴增條件:94℃ 預變性5 min，92℃變性:30 s，63℃退火:30 s，72℃延伸45 s，35個循環后72℃最后延伸7 min，4℃保存。

1.2.5 產物分析:紫外透射儀上觀察結果并照相，選用Band-Scan5.0凝膠圖像處理軟件進行光密度值分析，采用目的基因與β-actin光密度的比值表示目的基因的表達水平。

1.3 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，計量資料以ˉx±s表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

圖1 2組RT-PCR檢測ER、PR、Glut-1轉錄水平1、2為對照組;3、4為病例組

2 結果

對照組 ER與 GLUT-1的表達明顯低于病例組(P＜0.05)，PR的表達高于病例組(P＜0.05)。見表1。

表1 2組ER、PR及GLUT-1表達比較 ±s

表1 2組ER、PR及GLUT-1表達比較 ±s

注:與對照組比較，*P＜0.05

組別ER PR GLUT-1對照組(n=19)0.734±0.302 0.768±0.205 0.342±0.035病例組(n=38) 1.253±0.305* 0.421±0.107* 0.843±0.105*

3 討論

雌激素通過與ER結合，形成二聚體，再通過與靶基因中的雌激素反應元件(ERE)特異性結合，形成細胞信號刺激靶基因轉錄，造成一系列促進靶器官細胞增殖和分化的蛋白表達，對子宮內膜作用即表現為促進子宮內膜的增生和血管增殖［3，4］。此外雌激素通過正反饋作用還可以在DNA復制轉錄水平上誘導ER和PR生成，長期過度的作用即可使子宮內膜發生增生甚至癌變，而增生的一個表現即為形成子宮內膜息肉。近年來在對育齡女性的研究中發現，并非ER、PR都參與了子宮內膜息肉的形成，雌激素在其中起著更為重要的作用［5］，而孕激素在息肉中的表達降低，對本病發生起保護作用。當內分泌功能出現紊亂時，雌、孕激素的水平及時相異常，導致子宮內膜ER、PR表達發生差異，不同部位內膜性激素受體表達不平衡，使內膜對雌、孕激素反應不一致，各處子宮內膜增生不平衡，ER表達較高的內膜可在雌激素的刺激下過度增生［6］。

Glut是哺乳動物細胞葡萄糖跨膜轉運的主要載體，主要負責葡萄糖跨膜轉運的生理過程，其家族共有13個成員:GLUT1-12和HMIT，不同組織中可表達不同分型的GLUT。許多研究表明，不典型增生組織和癌組織中，GLUT-1的表達普遍增強，而且其表達強度與細胞的增殖程度相關［7］。可以說GLUT家族是細胞耗能的一個標志，其表達增高可能預示著細胞異常分裂增生而需要大量葡萄糖作為基礎供能。有文獻報道，單純性、復雜性增生子宮內膜與不典型增生子宮內膜的GLUT-1表達有差異，提示GLUT-1可以區分良性子宮內膜和具有惡性傾向的不典型增生子宮內膜，并認為GLUT-1異常表達可能是組織惡性轉化中的早期事件［8］。

在子宮內膜息肉組織中，ER和GLUT-1表達升高，PR表達降低，提示ER、PR和GLUT-1在子宮內膜息肉的發生發展中起重要作用，為今后以ER、PR和GLUT-1為靶點的臨床基因治療子宮內膜息肉提供新的重要對策。

.Current practice for

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6 Dallenbach-Hellweg G.陳志龍譯.子宮內膜組織病理學.第1版.上海:科技出版社，1984.44-79，119-123.

7 Jih YJ，Llin WH，Tsai WC，et al.Distinct regulation of genes by bFGFand VEGF-A in endothelial cells.Angiogenesis，2001，4:313.

8 Goldman NA，Katz EB，Glenn AS，et al.GLUT1 and GLUT8 in endometrium and endometrial adenocarcinoma.Mod Pathol，2006，19:1429.