HLA-G在結直腸癌患者中的表達意義

邱梅婷

近年來，有研究中發現，人類白細胞抗原G(human leucocyte antigen protein G，HLA-G)是一種非經典性的MHC-I類的分子，其具有7種蛋白異構體，其中包括有三種可溶性的HLAG5、G6、G7分子和四種模型:HLA-G1、G2、G3、G4。HLA-G在人體內的分布局限，一般在胎盤的絨毛膜外滋養細胞中為高表達，具有顯著的免疫抑制功能，主要通過參與母胎的免疫耐受從而形成人白細胞抗原G，即HLA-G。本文通過觀察分析HLA-G在結直腸癌患者中的表達意義，總結應用價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2007年3月至2011年3月結直腸癌患者24例，男14例，女10例;年齡45～78歲，平均年齡(54.1±0.7)歲，按照結直腸癌國際的INM分期標準［1］，分為Ⅰ級2例，Ⅱ級3例，Ⅲ級8例，Ⅳ級7例，對其組織標本的免疫組化檢測結果進行回顧性分析。

1.2 儀器與試劑 酶標儀(芬蘭雷勃公司生產，型號:Wellscan MK3)，AEC底物顯色試劑盒(上海玉博生物科技有限公司公司提供)，ELISA的試劑盒(上海實業科華生物技術有限公司提供)，具體操作步驟嚴格遵守說明書進行實驗。

1.3 檢驗方法

1.3.1 標本制作:將24例結直腸癌的活檢組織作為研究組，取其距離腫瘤附近3～5 cm的直腸組織作為陰性參照組，再取21例妊娠周期在6周內行人工流產孕婦的滋養層細胞組織作為陽性參照組，在4℃下，以4%的多聚甲醛浸泡過夜，固定后，再經脫水、浸臘、以石蠟包埋等處理，制成組織切片。

1.3.2 ELISA法檢測HLA-G表達:將切片置于50～60℃的烤箱內30 min，再以二甲苯脫蠟，經各級乙醇溶液進行水洗，再用磷酸緩沖液(PBS)反復沖洗3次，每次3 min，加入鼠抗人HLAG蛋白單克隆抗體以1∶1 000的工作濃度，在4℃下過夜或在37℃下孵育25～35 min，再次用磷酸緩沖液(PBS)反復沖洗3次，每次3 min，加入辣根過氧化物酶標記的二抗，在37℃下孵育25～35 min，第三次用磷酸緩沖液(PBS)反復沖洗3次，每次3 min，加入AEC+底物后，在室溫下孵育5～30 min，第四次用磷酸緩沖液(PBS)反復沖洗3次，每次3 min，加入邁耶(Mayer)氏蘇木素染液后，在室溫下孵育2～5 min，沖洗后，以水溶性樹脂膠進行封片［2］。

1.4 檢驗結果判定標準 參考CamsellaED中的判斷標準［3］，陽性表達:結直腸癌的細胞膜及核漿可見有紅色的顆粒，并以10個高倍視野下，可隨機觀察到陽性細胞計數占總細胞計數的百分比，判斷為HLA-G表達率。再依據切片中的癌細胞陽性情況與陽性細胞所占細胞總數的百分數，可將檢測結果分為4個級別，Ⅳ級:HLA-G高表達(+++)，陽性細胞數在50%以上;Ⅲ級:HLA-G中度表達(++)，陽性細胞數在25%～50%;Ⅱ級:HLA-G低度表達(+)，陽性細胞數在20%以內;Ⅰ級: HLA-G無表達(-)，無陽性細胞。

1.5 統計學分析 計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

HLA-G在結直腸癌組織的免疫組化檢驗結果中表達為陽性反應的物質呈現紅色，為顆粒狀或質狀;其表達位置主要在細胞膜或細胞漿上，陽性表達率為41.7%(10/24)，強陽性占40.0%(4/10)，中度陽性占50.0%(5/10)，弱陽性占10.0% (1/10)，其余均為陰性。HLA-G在不同的TNM分期及不同的組織學分級中的表達存在一定的差異(χ2=9.31，15.62，P＜0.01)。見表1。

表1 HLA-G在不同的TNM分期及不同的組織學分級中的表達比較例

3 討論

本文中統計學發現，HLA-G表達位置主要在細胞膜或細胞漿上，陽性表達率為41.7%(10/24)，強陽性占40.0%(4/10)，中度陽性占50.0%(5/10)，弱陽性占10.0%(1/10)，其余均為陰性。HLA-G在不同的TNM分期及不同的組織學分級中的表達存在一定的差異，表明HLA-G可能與腫瘤細胞對機體的細胞免疫轉換為體液免疫的誘發機制有關。有研究中指出，機體的免疫功能在結直腸癌的發生級進展中，會逐步下降，并且其下降幅度與細胞因子的分泌模式強勢漂移至Th2有一定關系，而HLA-G則對細胞因子的分泌模式有影響，能誘導Thl/Th2的細胞因子趨于平衡，并往Th2的方向進行漂移，引起Th2型的細胞因子中的IL-12、IL-10分泌明顯增加，從而使機體抗腫瘤的免疫抵抗能力下降［4］。因此，臨床中認為上述研究結論很可能是HLA-G的高表達與結直腸癌發生侵襲性生長時出現明顯相關性的原因。

綜上所述，HLA-G在結直腸癌患者中可能與其發生及發展有一定的關系，由其表達意義引起的腫瘤細胞免疫逃逸屬于體液免疫和細胞免疫的復雜生理過程，因此，HLA-G在結直腸癌組織的免疫組化檢驗結果對防治結直腸癌有重要的臨床指導意義。

1 花瞻.HLA-G與腫瘤免疫逃逸.中國腫瘤生物治療雜志，2008，10: 292-294.

2 朱成寶，王傳新，張建，等.人白細胞抗原G在結直腸癌中的表達及意義.生物技術通訊，2009，20:208-210.

3 Carosella ED，Horuzsko A.HLA-G and cancer.Semin Cancer Biol，2007，17:411-412.

4 劉新純，姚聯波，廖茂湖，等.結直腸癌IL-10和IL-12的檢測及意義.結直腸肛門外科，2008，14:32-33.