高效液相色譜法測定雙水楊酯片的有關物質

文麗麗，張立升，呂文軍

(1.黑龍江省黑河市藥品檢驗所，黑龍江黑河164300;2.黑龍江省黑河市第一人民醫院，黑龍江黑河164300)

雙水楊酯片是消炎鎮痛非甾體抗炎藥，用于緩解各類疼痛，包括頭痛、牙痛、神經痛、關節痛及軟組織炎癥等中等度疼痛。與阿司匹林結構和作用類似，其在生產中未反應的，或在貯存期中(特別是貯存不當)水解產生的水楊酸，不僅對人體有毒性，且分子中酚羥基在空氣中逐漸被氧化成一系列醌型有色物質，可使雙水楊酯片變色，故藥典規定雙水楊酯檢查游離水楊酸，但藥典方法為分光光度法，前處理很麻煩，而且所用提取試劑為三氯甲烷，對人體傷害也很大，本文建立了高效液相色譜法測定水楊酸含量的方法，快速準確，精密度好。

1 儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜儀(包括自動進樣器、二元輸液泵、柱溫箱和2998紫外檢測器);水楊酸對照品(批號:100106-200303，來源:中國藥品生物制品檢定所);冰醋酸，四氫呋喃為化學純，乙腈、甲醇均為色譜純。

2 色譜條件的選擇

色譜柱:采用 waters C18色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流動相:乙腈-四氫呋喃-冰醋酸 -水(20∶5∶5∶70)。檢測波長303 nm，柱溫30℃，流速1.0 mL/min，進樣量10 μL，理論板數按水楊酸計不低于5000，分離度符合要求。

3 實驗方法與結果

3.1 溶液的制備

3.1.1 供試品溶液:精密稱取本品細粉適量(約相當于雙水楊酯0.5 g)，置100 mL量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，用濾膜濾過，取續濾液即得。

3.1.2 對照品溶液:精密稱取水楊酸對照品適量，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并稀釋至每1 mL中含15 μg的溶液，即得。

3.1.3 陰性對照溶液的制備 取1%冰醋酸的甲醇溶液，作為陰性對照溶液。

3.2 系統適用性試驗:按上述色譜條件，取對照品溶液10 μL，進樣，記錄色譜圖，見圖1，調節檢測靈敏度，使水楊酸色譜峰的峰高約為滿量程的20%，雙水楊酯和水楊酸分離度大于1.5，對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液的色譜圖，見圖2、3，供試品溶液在303 nm檢測波長下色譜圖中如出現與對照溶液中水楊酸位置相同的色譜峰，按外標法以峰面積計算含量。

3.3 線性關系考察:精密稱取水楊酸對照品15 mg，置50 mL量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量1、2.5、5、7.5、10 mL 分置 100 mL 量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，依照上述色譜條件測定其峰面積，以各對照品峰面積為縱坐標(Y)，濃度為橫坐標(X)進行線性回歸。回歸方程:Y=85462C-4257.7，r=0.997.結果表明，水楊酸在2.97～29.7 μg/mL的濃度范圍內有良好的線性關系。

3.4 破壞性試驗［1］:取本品進行酸性、堿性和加熱破壞試驗后，按上述色譜條件進行試驗，結果表明，各種破壞條件下產生的雜質與水楊酸分離良好，其中加熱水解產生大量的游離水楊酸。

3.5 精密度試驗:取水楊酸對照品溶液，按上述測定法測定，連續進樣6次，記錄峰面積，計算峰面積的RSD=0.6%，結果表明儀器的進樣精密度良好。

3.6 溶液的穩定性試驗:取水楊酸對照品溶液，在室溫下放置，于0，2，5，7，12 h 時分別進樣，測得峰面積 RSD 為 10%，表明水楊酸溶液的穩定性非常不好，應臨用新制。

3.7 回收率試驗:取陰性對照溶液，分別精密加入一定量的水楊酸對照品溶液，按供試品溶液制備方法制備，按外標法測定水楊酸含量，計算回收率，結果表明，平均回收率為99.0%，RSD 為 1.0%。

3.8 樣品的測定:取樣品，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算各批樣品有關物質水楊酸相當于雙水楊酯標示量的百分含量。結果見表1。

表1 樣品測定結果

4 討論

4.1 檢測波長的選擇［2］:《中國藥典》2010年版二部阿司匹林項下游離水楊酸的檢測波長均為303 nm，依法操作，最終確認適合本品。

4.2 限量確認:根據《中國藥典》2010年版二部阿司匹林項下游離水楊酸的限量規定，我們確定本品的水楊酸限量規定為:含水楊酸不得超過雙水楊酯標示量的0.3%。

［1］ 馮金元，杜碧瑩.HPLC法測定酚咖片中有關物質對氨基酚的含量［J］.中國藥品標準，2011，12(1):19-21.

［2］ 國家藥典委員會.中國藥典［S］.2010年版.二部.