腦苷肌肽對顱腦損傷大鼠血清IL-8和TNF-α表達的影響

臧旭峰 蘇憲 馬樹成

白介素-8(IL-8)和TNF-α是顱腦損傷后早期反應的細胞因子，本研究大鼠外傷性腦損傷應用腦苷肌肽治療后血清IL-8和TNF-α因子表達的影響來探討腦苷肌肽的神經保護機制，報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 腦苷肌肽(吉林威威制藥生產，2 ml/支)，大鼠IL-8和TNF-α試劑盒(英基生物科技有限公司，美國)。健康雄性SD大鼠(河北醫科大學試驗動物中心)。

1.2 方法

1.2.1 動物模型制備:采用改進的Feeney法制作自由落體腦損傷模型。具體操作:大鼠行乙醚麻醉后俯臥位固定于手術臺，矢狀方向切開鼠頭皮，暴露左頂骨，于冠狀縫前1 mm、中線旁左1 mm制3 mm×3 mm骨窗，完整暴露硬腦膜，應用自由落體打擊器(下端直徑2 mm、控制下陷深度2 mm)打擊硬膜，至左側大腦額葉腦挫傷，后縫合鼠頭皮。(落體致傷的沖擊力為20×40 g/cm)。

1.2.2 動物分組:120只成年健康雄性SD大鼠，體重(250±10)g，隨機分為A、B、C 3組，其中80只依照上述方法造模成功后隨機分為A、B 2組，A組40只，傷后0 h和12 h分別給予0.5 ml/kg腦苷肌肽腹腔注射;B組40只，傷后0 h和12 h分別給予3 000 U/kg 0.9%氯化鈉溶液腹腔注射;C組不做任何干預，為對照組。

1.2.3 血清采集:3組均在傷后6、12、24、48 h分別處死10只大鼠。方法:乙醚麻醉，剖胸暴露心臟左心室，取血5 ml，置于預冷的EP管中靜置0.5 h，4℃條件3 000 r/min 15 min離心取血清，冰箱－20℃保存。

1.2.4 IL-8 和 TNF-α 的測定:使用大鼠 IL-8 和 TNF-α 試劑盒，采用酶聯免疫吸附(ELISA)法測定血清中IL-8和TNF-α的濃度(具體操作按試劑盒說明書)。

1.3 統計學分析應用SAS 8.0統計軟件，計量資料以表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

A組和B組不同時點的血清中IL-8和TNF-α水平都明顯高于C組(P＜0.05);A組血清IL-8和TNF-α水平低于B組(P＜0.05);A組和B組血清中TNF-α水平在12 h達到高峰，A組和B組血清中IL-8水平24 h達到高峰。見表1、2。

表1 3組血清IL-8水平比較n=40，pg/ml，±s

表1 3組血清IL-8水平比較n=40，pg/ml，±s

注:與 C 組比較，*P ＜0.05;與 B 組比較，#P ＜0.05

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表2 3組血清TNF-α水平比較n=40，pg/ml，±s

表2 3組血清TNF-α水平比較n=40，pg/ml，±s

注:與 C 組比較，*P ＜0.05;與 B 組比較，#P ＜0.05

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3 討論

神經系統和免疫系統間有復雜的雙向調節作用。神經系統和免疫系統是維持機體內環境相對穩定的重要調節系統，當機體受到應激或感染后，這兩個系統相互作用，免疫系統通過細胞因子對神經系統發揮著特殊的調節作用，在中樞神經系統中存在著細胞因子及相應受體，細胞因子能夠調節中樞神經系統內的細胞生長和功能。腦缺氧缺血是與急性炎性反應相關的病理過程，缺氧缺血后大腦通過多種神經調節物質調節免疫功能，免疫系統也通過一些特殊的物質對神經系統發揮著重要的調節作用。

顱腦損傷后，眾多炎性因子表達異常，IL-8、TNF-α就是其中較重要的因子之一。IL-8在顱腦損傷引起繼發性腦缺血中表達增加并且促使神經元炎性損傷。有研究發現，在再灌注早期，腦脊液和血清中IL-8水平顯著增加，IL-8產生的時間早于腦水腫形成和白細胞浸潤的時間［1，2］。IL-8是中性粒細胞移行、達到炎癥部位的重要的趨化因子。活化的中性粒細胞自身也產生IL-8，進一步引起中性粒細胞聚集，形成炎性反應的正反饋。因此，顱腦損傷后，IL-8作為一種重要的中性粒細胞趨化因子參與了繼發性腦損害。TNF-α是一種作用廣泛的多功能細胞因子，主要由單核巨噬細胞合成、釋放。具有重要的免疫調節作用，如激活中性粒細胞殺滅病原微生物、刺激單核細胞及其他細胞產生IL細胞因子，活化T細胞及B細胞產生抗體等。腦組織中產生TNF-α的細胞是星形細胞和小膠質細胞。參與神經系統中炎性反應和免疫反應［3］。體內過多的TNF-α可導致全身性炎性反應，對機體造成不利影響，腦缺血再灌注后腦組織局部的過度炎性反應是造成腦缺血再灌往損傷重要原因之一。TNF-α可以損傷血管內皮細胞造成血管內皮細胞發生形態結構與功能損傷性改變，如壞死、脫落，細胞間隙增大等而使腦血流減少［4］。TNF-α可通過抗氧化途徑保護神經元，增強神經元在再灌注過程中抵抗氧自由基的損傷［5］。

腦苷肌肽的主要成分是神經節苷脂，神經節苷脂為含唾液酸糖鞘脂，其廣泛分布于哺乳動物的細胞膜上，尤其是神經細胞膜中，對于神經細胞發生、生長、分化發揮著極為重要的作用，為神經細胞膜的天然成分，對神經細胞膜有保護作用［6］。外源性的神經節苷脂易通過血腦屏障進入中樞神經系統，整合于神經細胞膜中，發揮作用，并且顯著提高局部腦組織血流量，減少或抑制氧自由基生成，減少脂質過氧化反應產物生成;還可改善神經細胞膜的活性、減輕腦水腫，抑制一氧化氮合成，促進神經細胞的生長，進而保護神經元［7］。

本試驗證明顱腦損傷后大鼠血清中IL-8、TNF-α表達異常，腦苷肌肽應用于腦損傷大鼠后明顯降低了血清中IL-8、TNF-α表達水平，為腦損傷臨床治療開辟新思路，但其具體機制有待更深入研究。

1 Grygorczuk S，Pancewicz S，Zajkowska J.Concentrations of macro-phage inflammatory proteinsMIP-1alpha andMIP-1beta and inter-leukin 8(IL-8)in lyme borreliosis.Infection，2004，32:350-355.

2 丁永忠，孫群周，張建生.急性顱腦損傷后血清TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8含量變化及其臨床意義.中國臨床神經外科雜志，2006，11:17-19.

3 韋立功.新生兒缺氧缺血性腦病細胞因子研究進展.醫學綜述，2003，9:61-63.

4 劉敬，邱英芬，曹海英，等.新生兒缺氧缺血性腦病時血清IL-6、IL-8、TNF-α變化及其對血流動力學的影響.中國新生兒科雜志，2002，20:21-23.

5 Uno H，Matsuyama T，Akita H，et al.Induction of tumor necrosisfactorαin the mouse hippocampus following transient forebrain is-chemia.J Cereb Blood Flow Metab，1997，17:491-499.

6 王惠珠，王雅蘭.神經節苷脂治療早產兒腦室周圍白質軟化的療效觀察.河北醫藥，2011，33:2110-2111.

7 張巍，童笑梅，周叢樂，等主編.早產兒醫學.第1版.北京:人民衛生出版社，2008.98.