乳腺癌組織中BCSG1和Ki67的表達與臨床意義

賈靜 孟令華

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其主要死亡原因是術后復發、轉移，臨床尚無可靠的方法做到早期監測。因此探討乳腺癌復發和轉移相關的生物學指標是乳腺癌基因研究和臨床研究的重要課題。本研究采用免疫組化的方法檢測乳腺癌組織中特異基因(BCSG1)、增殖細胞核抗原(Ki67)的表達，結合臨床病理因素分析它們之間的相關性，對指導乳腺癌的治療和預后的判斷提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 收集本院2008年10月至2010年8月住院的62例女性乳腺癌患者的病理組織。組織標本以10%甲醛溶液固定24 h，常規石蠟包埋，制備4 μm厚連續切片3張，貼附于用多聚賴氨酸處理的載玻片上，60℃烤片2 h，室溫保存，以備檢測 BCSG1、Ki67。

1.2 試劑 羊抗人BCSG1單克隆抗體(sc-10699)購自美國SANTA CRUZ公司，Ki67單克隆抗體(zm-0166)購自北京中杉生物技術有限公司。

1.3 免疫組化法 石蠟切片常規脫蠟;高壓煮沸2 min進行抗原熱修復處理;蒸餾水洗后經磷酸鹽緩沖液(PBS緩沖液)沖洗，加入一抗BCSG1、Ki67，4℃過夜孵育;PBS緩沖液沖洗3次，2 min/次，加入二抗孵育1 h;PBS緩沖液沖洗，加二氨基聯苯胺(DAB)顯色。蒸餾水洗后蘇木素復染，自來水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，封片。

1.4 結果判定 BCSG1評定參考Mohsin等［1］報道的標準進行改良，主要為細胞漿出現棕黃色細顆粒為陽性細胞，少數病例可見胞核著色，采用陽性細胞比例評定結果，陽性細胞＜25%為陰性(－);25% ～50%為弱陽性(+);51% ～75%為中陽性(++);＞75%為強陽性(+++);－～+為低表達，++～+++為高表達。Ki67評定參考許良中等［2］標準，以陽性細胞為核著色，采用陽性細胞比例評定結果，陽性細胞數＜10%為陰性(－);10% ～25%為弱陽性(+);26% ～50%為中陽性(++);＞50%為強陽性(+++)。

1.5 統計學分析 應用SPSS 19.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗，等級資料的相關性分析使用spearman等級相關檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 BCSG1、Ki67在乳腺癌組織中的表達 62例乳腺癌組織中，BCSG1、Ki67 的陽性表達率分別為:69.35%(43/62)和61.29%(38/62)。見表 1。

表1 BCSG1、Ki67在乳腺癌組織中的表達 n=62，例

2.2 BCSG1、Ki67表達與臨床病理學特征的關系 BCSG1、Ki67的表達在乳腺癌淋巴結是否轉移、臨床不同分期間差異有統計學意義(P＜0.05);而與年齡、腫瘤大小無關(P＞0.05)。見表2。

表2 BCSG1、Ki67表達與乳腺癌臨床病理學特征的關系例(%)

2.3 BCSG1、Ki67在乳腺癌組織中的共同表達及相互關系BCSG1、Ki67在乳腺癌組織中的共同表達陽性率為30.65%(19/62)，且二者陽性表達呈顯著正相關關系(r=0.309，P＜0.05)。見表3。

表3 BCSG1、Ki67二者表達的相關關系 例

2.4 BCSG1、Ki67在乳腺癌組織中的共同表達與臨床病理學特征的關系 BCSG1、Ki67乳腺癌組織共表達陽性在淋巴結轉移與否，臨床分期間差異有統計學意義(P＜0.05)。見表4。

表4 BCSG1、Ki67的共同表達與臨床病理學特征的關系例(%)

3 討論

BCSG1是1997年Ji等［3］利用直接差異cDNA序列分析克隆出的SNCs(neural protein synuclein)家族的新成員，該基因在浸潤性乳腺癌中高度表達，而在正常乳腺組織及良性病變中幾乎不表達。因此BCSG1是一種特異的在乳腺癌中有選擇性表達的原癌基因，其定位于人類染色體10q23，DNA分子量約5 kb，含5個外顯子，轉錄得1 kb mRNA，編碼一條含127個氨基酸的蛋白［4］。吳克瑾等［5］報道，BCSG1的表達與乳腺癌分期密切相關，與患者年齡、月經、腫瘤部位以及雌、孕激素受體、核增殖抗原、c-erbB-2的表達等均無相關性，認為BCSG1可能是與腫瘤惡性進展有關的腫瘤標志物，是判斷乳腺癌預后的新指標［6］。我們利用免疫組化分析62例乳腺癌組織中BCSG1的表達狀況，實驗結果顯示:乳腺癌組織中BCSG1陽性表達率高達69.35%，且乳腺癌組織中BCSG1的表達與淋巴結轉移、臨床分期有關(P＜0.05)。本研究與吳克瑾等［5］利用 RT-PCR的方法檢測結果及王鑫等［7］利用免疫組化方法檢測結果基本一致。因此，我們認為BCSG1是乳腺癌發生過程中的中晚期事件，對其進行檢測，有助于對乳腺癌侵襲轉移能力的評估。

增殖細胞核抗原(Ki67)是1983年由劉剛等［8］發現的，是一種增殖細胞相關的核抗原，僅在增殖細胞核中表達，被認為是較理想的檢測細胞增殖活性的指標，可用以指導乳腺癌的治療。國外一些報道［9］也認為Ki67的表達對乳腺癌預后判斷有重要意義。趙鷹等［10］在乳腺癌中Ki67、Her-2和nm23的表達及臨床意義的研究中得出Ki67基因在淋巴結轉移陰性組中的表達率為57.89%，而在淋巴結轉移陽性組中的表達率則高達78.79%，認為其表達與乳腺癌淋巴結轉移有關。朱學強等［11］在乳腺癌組織中VEGF、c-erbB-2、P53及Ki67的表達與臨床意義研究中也發現Ki67基因表達與乳腺癌腋窩淋巴結轉移有關。而樸正日等［12］研究發現Ki67在乳腺癌組織中的陽性表達為78.0%，其表達與乳腺癌腫瘤大小和臨床分期有顯著相關性，與患者的年齡、腋窩淋巴結轉移無顯著相關性。本研究發現Ki67在乳腺癌中的表達與年齡、腫瘤大小均無關(P＞0.05)，而與淋巴結轉移、臨床分期呈正相關(P＜0.05)，與高睿心［13］報道近似，說明Ki67在乳腺癌的淋巴結轉移中扮演著重要角色，可作為評價乳腺癌發生發展的生物指標。

本研究中，BCSG1、Ki67在乳腺癌中的陽性表達率分別為69.35%、61.29%，二者共同陽性表達率為 30.65%，共同陽性表達與淋巴結轉移、臨床分期呈相關性(P＜0.05)，本試驗發現BCSG1及Ki67在乳腺癌中的陽性表達呈顯著正相關關系(P＜0.05)，說明二者的共同表達與腫瘤預后不良相關，可協助乳腺癌的預后判斷。

1 Mohsin SK，Zhang M，Clark GM，et al.maspin expression in invasive breast cancer:association with other prognostic factors.J Pathol，2003，199:432-435.

2 許良中，楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準.中國癌癥雜志，1996，6:229-231.

3 Ji H，Liu YE，Jia T，et al.Identification of a breast cancer specific gene，BCSG1，by direct differential cDNA sequencing.Cancer Res，1997，57:759-764.

4 Lavedan C，Leroy E，Dehejia A，et al.Identification，localization，and characterization of the human γ-synuclein gene.Hum Genet，1998，103:106-112.

5 吳克瑾，張一楚.BCSG1與乳腺癌進展的關系.國外醫學外科學分冊，2003，30:340-342.

6 Jia T，Liu YE，Liu J，et al.Stimulation of breast cancer invasion and metastasis by synucleingamma.Cancer Res，1999，59:742-747.

7 王鑫，周海亞.乳腺癌基因BCSG1和C-erbB-2的表達及意義.臨床醫學，2009，29:92-94.

8 劉剛，俞薇薇.EBV、Ki67、ERK1在乳腺癌中的表達及其相關性.實用臨床醫學，2008，9:129-130.

9 Tan PH，Bay BH，Yip G，et al.Immunohistochemical detection of Ki67 in breast cancer correlates with trance rjptional regulation of genes related to apoptosis and cell death.Mod Pathol，2005，18:374-381.

10 趙鷹，胡長軍，王鵬，等.乳腺癌中Ki67、Her-2和nm23的表達及其臨床意義.中國現代藥物應用，2010，4:18-19.

11 朱學強，任剛，胡洪林.乳腺癌組織中VEGF、C-erbB-2、P53及Ki67的表達與臨床意義.西部醫學，2009，21:427-429.

12 樸正日，金全金，申龍河.Ki67在乳腺癌組織中表達及其與C-erbB-2 、ER 、PR、P53基因的關系.中國民康醫學，2010，22:258-260.

13 高睿心.VEGF及Ki67在乳腺癌淋巴道轉移中的作用.齊齊哈爾醫學院學報，2008，29:641-643.