Fascin蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達及意義

陳宇 杜勇 李浩渤

Fascin蛋白是由Bryan等［1］在海膽的卵母細胞質中發現，又稱為聚束蛋白，是一種肌動蛋白結合蛋白。它與F-肌動蛋白結合后的結構加強了肌動蛋白細胞骨架，對細胞移動起著重要作用［2］。研究發現Fascin蛋白的增加可引起腫瘤細胞膜表面突起增多，增殖旺盛，影響細胞黏附能力的改變，改變細胞與細胞外基質的黏附能力，增強腫瘤細胞的運動能力，以及通過細胞信號轉導通路等途徑增強腫瘤組織的局部侵襲轉移能力。以往研究發現Fascin蛋白在多種腫瘤組織和癌前病變組織中呈現上調表達［3］。Fascin蛋白在腫瘤細胞中的上調表達與腫瘤組織分級、淋巴遷移及侵襲密切相關，研究Fascin蛋白對腫瘤早期診斷、預后判定、輔助治療選擇具有重要意義。本研究通過免疫組化的試驗方法檢測fascin蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達及與口腔鱗狀細胞癌組織學分級的關系，為口腔鱗狀細胞癌的預后判斷及臨床治療提供依據。

1 材料與方法

1.1 標本來源 試驗組(OSCC組):收集河北醫科大學第二醫院1991年至2009年口腔鱗狀細胞癌蠟塊標本60例(取標本前未經任何治療)。其中男38例，女22例;年齡41～77歲，平均年齡58.7歲。根據國際腫瘤組織學分級，試驗標本分為高分化(well differentiated)31例、中度分化(moderately differentiated)21例、低分化(poorly differentiated)8例，標本均經有經驗的病理醫師閱片后確診。對照組(NM組):正?？谇火つそM織40例，均取自囊腫旁及牙槽骨整形手術時切除的正常黏膜組織。其中男25例，女15例;年齡21～68歲，平均年齡40.5歲。

1.2 主要試劑與儀器 試劑:SP免疫組化試劑盒、一抗(購自博士德分裝抗體)、二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑、多聚賴氨酸(Poly-L-lysine)防脫片劑均購于河北博海生物有限公司。儀器:Olympus PM-10ADS型雙目顯微鏡、LEICA石蠟切片機，ZHPY-型恒溫式附貼切片展片儀(河北醫科大學)，多功能真彩色細胞圖象分析管理系統(美國Media Cybernetics公司Image-Pro Plus)、離心機(北京離心機廠 LDZ5-2型)、移液器(德國 EPPENDORF)、低溫冰箱(日本三洋MDF-382E型)、PGB/20-002臺式保溫培育箱(中華人民共和國重慶試驗設備廠)、ZD-Ⅲb快速生物試驗用微波爐(上海中達醫學醫用研究所)。

1.3 對照試驗 用已知的Fascin蛋白陽性的胃癌標本作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.4 試驗方法 采用免疫組織化學SP法(過氧化物酶標記的鏈酶卵白素法)。所有標本均經10%甲醛固定，石蠟重新包埋后，將每個蠟塊切為5 μm的切片，共切4張，1張HE染色，1張作為陰性對照，1張Fascin蛋白染色，。

1.5 結果判定 Fascin蛋白染色判定參照Hashimoto的標準，以細胞膜和細胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒為陽性染色，每張切片隨機計數10個高倍視野，每個視野計數100個細胞。據陽性細胞百分率判定:(1)未見棕黃色顆粒為陰性;(2)＜25%為弱陽性(+);(3)25%～75%為陽性(++);(4)＞75%為強陽性(+++)。

1.6 統計學分析 應用SPSS 17.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組Fascin蛋白陽性率比較 Fascin蛋白在在40例正?？谇火つ吮局芯赎幮员磉_(圖1);在60例口腔鱗狀細胞癌標本共41例呈現陽性表達(圖2)，陽性率為68.33%，陽性率顯著高于對照組(P＜0.01)。見表1。

圖1 正常組織中Fascin蛋白表達(SP×400)

圖2 口腔磷狀細胞癌中Fascin蛋白表達(SP×400)

3 討論

表1 2組Fascin陽性率比較 例

2.2 Fascin表示與臨床指標的關系 Fascin蛋白的表達與鱗癌的組織學分級具有相關性，鱗癌的分化越低，Fascin蛋白的陽性表達率越高(P＜0.05)，而患者性別、年齡間表達差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2、3。

表2 Fascin蛋白表達與磷癌組織學分級比較 例

表3 Fascin表達與性別和年齡的關系 例

Fascin蛋白又稱為聚束蛋白，是一種肌動蛋白結合蛋白，是由Bryan等［1］在海膽的卵母細胞質中發現并提取出來。Fascin蛋白的mRNA全長為2 767 bp，分子質量為55×103，由全編碼序列區1 482 bp、6個ployA信號肽、3’端非翻譯區1 174 bp堿基和5’端非翻譯區111 bp堿基共同組成，可以編碼493個氨基酸，其蛋白質編碼的產物為一種細胞骨架蛋白。Fascin家族包括3種蛋白，本研究指的是Fascin-1蛋白，其主要在間葉組織和神經系統有廣泛表達，它是從HeLa細胞中純化而來的，在人類的基因中有兩個定位，其中一個定位于染色體的7q22，該位點可以被激活;另一個定位于15q12，該位點缺乏部分內含子序列，因此該位點不能被激活。

Fascin蛋白結構中中的磷酸化位點與蛋白激酶之間存在著復雜反應，在調節fascin蛋白的結合活性，膜表面偽足和微棘的形成方面具有重要的作用［4］。Fascin蛋白的增加可引起腫瘤細胞膜表面突起增多，增殖旺盛，改變細胞間及與細胞外基質的黏附能力，增強腫瘤細胞的運動能力，即增強腫瘤組織的局部侵襲轉移能力。

目前Fascin蛋白與口腔鱗狀細胞癌的研究并不多見，以往研究發現Fascin蛋白在許多上皮來源的惡性腫瘤組織(如侵襲性膀胱上皮癌、乳腺癌和非小細胞肺癌等)及腫瘤細胞系(如宮頸癌細胞、胃癌細胞、結直腸癌細胞等)中均呈高表達［3］，這與本試驗的研究結果是一致的，本試驗中在40例正?？谇火つ吮局芯赎幮员磉_;在60例口腔鱗狀細胞癌標本共41例呈現陽性表達，陽性率為68.33%，陽性率顯著高于對照組(P＜0.01)，國內學者王宇、王德明等也試驗證實口腔鱗狀細胞癌的Fascin蛋白表達顯著高于正常黏膜組織［5，6］。

腫瘤細胞侵襲鄰近組織必須具有突破基底層同時成為單個轉移細胞的能力，因此細胞與細胞、細胞與細胞外基質黏附特性的改變顯著影響了腫瘤細胞的侵襲轉移行為［7］。Fascin蛋白作為一種肌動蛋白結合蛋白，其異常表達可增加細胞膜突起、改變細胞與細胞外基質的黏附以及通過細胞信號轉導通路等途徑使細胞的運動能力增加8～17倍，提高了細胞的運動性和移動性，使細胞產生了惡性行為，促進腫瘤細胞侵襲轉移。王宇［5］試驗證實fascin蛋白的表達與口腔鱗狀細胞癌的分期、分化及淋巴結轉移有關，且高表達組復發率和生存時間顯著高于低或無表達組。Chen等［8］研究發現，Fascin蛋白與口腔鱗狀細胞癌遠處轉移相關，但Fascin蛋白高表達與低表達組遠處轉移率差異無顯著性。遺憾的是由于部分資料不完整的緣故本試驗中并未對Fascin蛋白與淋巴結轉移的關系進行研究。本試驗結果表明口腔鱗狀細胞癌的組織學分級越低，Fascin蛋白的陽性表達越高，高分化鱗癌中Fascin蛋白的陽性率48.39%，中分化中85.71%，低分化中100%。顯示Fascin蛋白的表達口腔鱗狀細胞癌分級相關，這在一定程度上也說明了Fascin蛋白與腫瘤的分化增殖、遷移及侵襲密切相關。同時有研究表明在細胞的遷移過程中，通過抗體來抑制fascin蛋白與F-肌動蛋白的結合，可以完全或部分的阻止細胞的擴散和遷移［9］。這些結果提示，經過更進一步的研究Fascin蛋白有望成為判斷口腔鱗狀細胞癌患者預后的指標之一，并有望成為臨床基因治療的主要靶點，干預并阻斷原發腫瘤轉移，對判定預后、輔助治療的選擇、提高口腔鱗狀細胞癌的療效具有重要的意義。

1 Bryan J，Kane RE.Separation and interaction of themajor components of sea urchin actin gel.J Mol Biol，1978，125:207-224.

2 Chol PJ.Fascin immunore activity for preoperatively predicting lymph node metastases in peripheral adenocarcinoma of the lung 3cm or less in diameter.Eur J Cardiothorac Surg，2006，30:538-542.

3 Chen SF，Yang SF，Li JW，et al.Expression of Fascin in oral and oropharyngeal squamous cell carcinomas has prognostic significance:a tissue microarray study of 129 cases.Histopathology，2007，51:173-183.

4 Adams JC，Clelland JD，Collett G，et al.Cell-matrix adhesions differentially regulate fascin phosphorylation.Mol Biol Cell，1999，10:4177-4190.

5 王宇.Fascin和ki67在口腔鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義.中國癌癥雜志，2009，19:257-260.

6 王德明.Fascin口腔鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義.口腔頜面外科雜志，2008，18:11-14.

7 GuoW，Giancotti FG.Integrin signalling during tumour progression.Nat Rev Mol Cell Biol，2004，5:816-826.

8 Chen SF，Yang SF，Li JW，et al.Expression of Fascin in oral and oropharyngeal squamous cell carcinomas has prognostic significance:a tissue microarray study of 129 cas.Histopathology，2007，51:173-183.

9 Anilkumar N，ParsonsM，Monk R，et al.Interaction of fascin and protein kinaseC alpha:A novel intersection in cell adhesion and motility.EMBO J，2003，22:5390-5402.