針刺對糖尿病周圍神經病變大鼠坐骨神經組織病理學的影響

逄紫千，閻 慧，解占峰

(長春中醫藥大學，吉林 長春 130117)

糖尿病是一種常見多發的慢性代謝性疾病,糖尿病神經病變(DPN)是糖尿病慢性并發證中發病率最高的1種，且發病較早，甚至隱性糖尿病既有周圍神經病變,已成為糖尿病患者致殘的主要原因。該病的發病機制尚不完全清楚，目前多學者認為主要是代謝障礙和微血管病變導致神經纖維密度減少或脫失，遠端軸索變性及節段性脫髓鞘，引起神經傳導障礙。由于DPN發病隱匿,約40%～60%的患者無明顯癥狀，因此在糖尿病早期，臨床上周圍神經病變癥狀及體征多不明顯，但其神經結構、功能可能已受到損害。研究證明，在人和動物實驗性糖尿病的早期周圍神經病變是可逆的，而晚期不可逆。因此,早期發現DPN顯得尤為重要。神經電生理的測定為DPN的早期診斷提供了客觀依據,尤其在無神經病變癥狀和體征者中，可發現亞臨床病變[1]。本實驗采用針刺的方法對糖尿病大鼠早期神經電生理及相應病理的變化進行觀察，旨在發現針刺對DPN不同病變程度的神經電生理變化特點，為DPN的早期診斷、治療提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器及試劑 冰凍切片機(CM1900型，LEICA公司，日本)，透射電子顯微鏡(2000型，JEM公司，日本)，圖像分析儀(V3.3，Tiger公司，美國)，光學顯微鏡及攝像系統(980153型，COIC公司，日本)。

1.2 實驗試劑及藥物 STZ(Sigma公司)；0.1 mol/L檸檬酸緩沖液，4%多聚甲醛，2.5%戊二醛，10%水合氯醛。

1.3 實驗動物分組 90只Wistar雄性大鼠6～8周齡，體質量180～220 g。隨機分為6組，對照組、糖尿病組、西藥1組、西藥2組、治療1組(DM大鼠成模后1個月開始給藥)和治療2組(DM成模后2個月開始給藥)。

1.4 動物制模方法 大鼠禁食不禁水24 h后，用STZ溶于0.1 mol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH 4.5) 配制成濃度為1 %的溶液,以60 mg/ kg劑量給大鼠單次腹腔注射,對照組以等劑量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射平行進行實驗。72 h 后尾靜脈采血測血糖,血糖高于16.7 mmol/L的大鼠入選糖尿病大鼠模型。

1.5 治療方法 造模成功后，西藥1組：成模1個月后，每日喂服彌可保,劑量為15 μg/次，連續治療4周；西藥2組：成模2個月后開始治療，方法同西藥1組。針刺1組：成模后1個月開始治療，選肺俞、脾俞、腎俞、三陰交、合谷、足三里6個穴位，隔日針刺1次，采用平補平瀉法，針上通電，疏密波，中等強度刺激，每次治療30 min。連續治療4周；針刺2組：成模后2個月開始治療，方法同針刺1組。

1.6 時間點 對照組和糖尿病組分別在造模成功后4、8、12處死部分大鼠取材。西藥組、針刺組分別在針刺1、2個月時取材。

1.7 組織病理標本的制備 將用2.5%戊二醛中和4%多聚甲醛中固定好的取出的神經用10%的多聚甲醛溶液固定大鼠坐骨神經組織依次經過軟蠟和3次硬蠟，最后硬蠟包埋，切成14 μm的厚度;染色；梯度乙醇脫水；二甲苯透明；中性樹膠封片。本實驗采用3種染色方式,其中Glees-Marsland銀染色，結果軸索棕黑色；髓鞘Weil鐵明礬蘇木精染色，結果:髓鞘黑蘭色。

2 病理結果

對照組大鼠坐骨神經有髓纖維分布密集均勻，單個纖維飽滿，髓鞘薄厚均勻，軸索粗細均勻。與對照組相比,8周時糖尿病組的坐骨神經纖維排列紊亂，髓鞘密度不均勻，部分節段性髓鞘脫失明顯可見,施萬細胞數量與對照組相比明顯減少。12周時比8周時神經纖維排列稀疏，部分軸突節段性消失，部分郎飛節消失，可見沃勒變性，髓鞘脫失更明顯并可見髓球形成，多數軸突節段性萎縮性變細或消失。治療1組經過治療后，與糖尿病8周比較神經纖維排列趨向一致，較飽滿、均勻，髓鞘厚度增加且變均勻，病理切片顯示優于西藥1組；治療2組仍可見髓鞘脫失與西藥2組對比無明顯差異。

3 討論

DPN的主要病理改變表現為周圍神經的脫髓鞘和(或)軸索變性。這些改變既影響粗的和細的有髓纖維，也影響無髓纖維。但是髓鞘受累在先抑或軸索病變在先則有不少爭論。很多實驗證實,STZ誘導大鼠糖尿病成模后1～2個月就可觀察到與人類DPN相似的病理改變[2]。本實驗對DPN大鼠的坐骨神經進行了形態學觀察，發現糖尿病成模后8周時，坐骨神經光鏡下均可見少量髓鞘脫失，12周時髓鞘脫失明顯，并有軸索萎縮變性；有髓神經纖維髓鞘和軸索的改變更明顯，這與以往文獻[3-4]報道的坐骨神經的病理改變相符。此結果表明DPN早期以脫髓鞘為主要病理改變,且小的無髓神經纖維也同時受累[5-6]。坐骨神經病理改變隨時間加重，這與臨床上DPN呈漸進性的表現一致。4周時各項電生理指標已出現異常，而病理改變在8周時出現，顯示電生理異常的出現早于形態學改變,與文獻[7]報道一致。

糖尿病患者，臨床上常表現為肢體末端的神經癥狀，然而這并不一定就表明有遠端的病理變化過程。新近許多研究表明，糖尿病周圍神經病變患者的神經近端也常受累。如Weis等[8]對STZ誘導的糖尿病大鼠模型的活檢發現在神經遠端尚未出現異常時，神經近端即可出現節段性脫髓鞘改變。研究還顯示STZ誘導的DPN模型中坐骨神經與股二頭肌、蚓狀肌的肌梭內神經纖維受累程度相似,說明周圍神經的近、遠端在實驗性DPN的早期即同等受累。

本實驗是通過肌電圖檢測和組織病理切片觀察所得為改善DPN大鼠周神經有髓纖維的形態及功能而實現的[9]。從針刺治療發現及尋找理想的治療時機入手,進行針刺防治DPN的機制研究。對無癥狀及體征時即可能有神經損害的隱匿性發病的DPN，并且近端神經在遠端神經病變尚不明顯時,已經出現病變特征的DPN是臨床難以預防的，本實驗選取背俞穴及四肢腧穴，針對上、中、下三焦的癥狀配合腧穴在神經節段上離所調節臟腑的位置關系，進行針刺治療，對針刺前后、不同階段的DPN大鼠組織病理切片比較，可以得出,從組織病理及之前所作神經電生理的研究2個方面觀察,在DPN早期針刺治療效果優于晚期治療,能明顯改善神經傳導功能，且早期針刺治療優于單純西藥治療[9]。H-反射、F波在治療前后改變均有顯著差異,這肯定了針刺對近端神經的治療作用。不同時期針刺對DPN大鼠周圍神經的脫髓鞘樣病變和軸索損害均有明顯的改善作用。提示針刺對DPN具有一定的防治作用,其作用可能是通過辨證組方發揮中醫整體調節作用,通過多系統產生良性的調節而實現對DPN大鼠周圍神經有髓纖維的形態及功能改善而實現的。

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