洋蔥組培中應注意的幾個問題

潘美紅，陳振泰，楊海峰，薛萍，孫桂樂

（江蘇連云港市農業科學院，222000）

洋蔥是百合科蔥屬植物，近年來組織培養技術在洋蔥育種上的應用得到了迅速發展。經多次試驗，在洋蔥組培過程中，形成了以下幾個觀點。

1 打破休眠

洋蔥在夏季收獲后，即進入1.5～2.5個月的休眠期，期間鱗莖不萌發，用此期的洋蔥進行組織培養會大大影響效果。一般從大田取回的洋蔥球可通過赤霉素處理或低溫處理來打破休眠。具體方法有：①赤霉素處理，將取回的洋蔥球放入5～10mg/L赤霉素溶液中處理18～24 h；②低溫處理，在大田選擇理想的洋蔥球，取回實驗室，置于4～5℃冰箱中冷藏3～4周。

但是，赤霉素處理對洋蔥組培效果的影響有待進一步研究；低溫處理方法簡單易行，且無副作用。

2 消毒方式

由于洋蔥鱗莖生長在地下，帶菌量多，本著既能有效消毒，又要不殺死材料的原則，通過試驗比較，較為有效的消毒方式為：將冷藏后的洋蔥球剝除外皮至直徑為2～3 cm，用自來水沖洗干凈，拿至超凈工作臺，用75%酒精浸泡1 min（搖晃），然后用0.1%HgCl2溶液浸泡15min（搖晃），再用無菌水沖洗5次后，準備接種。

3 外植體形式

將消毒好的洋蔥鱗莖放入已消毒并放有吸水紙的培養皿中，用吸水紙將鱗莖表面水分吸干，用手術刀將鱗莖切至鱗莖盤為1～2 mm厚，貼近鱗莖盤的鱗莖為（4～5）mm×（4～5）mm，高 0.5～1 mm 的外植體，再用刀片在鱗莖表面做“井”字形劃痕，刀深2～3mm，打破頂端優勢，利于側芽發生。

4 影響增殖的因素

試驗發現，不同品種洋蔥在同一個培養基上的增殖效果不同，特別是在啟動不定芽萌發時表現尤為明顯，因此要針對不同品種，采用不同組分的培養基。

①通過多次試驗證明，不同品種的洋蔥在以MS和以花寶（Hyponex，美國花寶公司生產）為基礎的培養基上增殖，其效果不盡相同。

②在合適的基礎培養基上，添加合適的生長調節劑類型，并配以合適的濃度和配比，是影響增殖的關鍵。

③繼代過程中，在MS培養基中加入適量的多效唑，可以提高增殖率，但是多效唑不能連續使用，否則可能會起到負效果。

5 繼代過程

經過多次繼代，洋蔥組織材料出現老化現象；不少組培苗會出現嚴重的玻璃化現象，試驗發現，繼代3～4次后，在增殖培養基中加入適量的間苯三酚，可以適當地緩解或減少組織材料老化、玻璃化現象。但是，間苯三酚也不能連續使用，最好間隔3～4次后再用，但是，該方法不能徹底解決問題。另外，洋蔥經過多次繼代后，由于組培苗體內激素的累積或消耗程度未知，培養基中的生長調節劑的量和配比不好控制，一直沿用同樣的培養基配方，效果都比早期的差。試驗發現，洋蔥多次繼代后，在增殖培養基中也能生根，影響了增殖效果，因此，進行洋蔥組培時，繼代一定時間后最好就注入新的外植體，以保證組培的質量。但是，洋蔥繼代幾次能獲得最好的增殖效果，有待于進一步研究。