HPLC法測定玉葉清火膠囊中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量

姚 潔 陳健文

1.湖南省衡陽市中心醫院藥劑科，湖南 衡陽 421001;2.湖南省衡陽市食品藥品檢驗檢測中心，湖南 衡陽 421001

玉葉清火膠囊是由玉葉金花、穿心蓮、梔子、墨旱蓮、倒扣草等中草藥組成的復方制劑，功能清熱解毒，消腫止痛。用于喉痹，暴喑，急性咽喉炎屬于風熱癥者。玉葉清火膠囊是玉葉清火片改劑型而來的制劑。穿心蓮為本方中有效成分之一，而穿心蓮主要成分為穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯。因此測定本品中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，可作為本品質量控制的指標之一。為了更好的控制該制劑的質量，保證藥品使用安全、有效，本文參考有關文獻［1－3］，采用反相高效色譜法測定了穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量。

1 儀器與試藥

儀器 大連依利特P200Ⅱ高壓恒流泵，UV－200Ⅱ型紫外可變波長檢測器;EC2000色譜數據處理站;HypersilODS2柱 (C18，4.6×200mm，5μm);BP211D 電子分析天平;kh－250db型超聲處理器。

試藥 穿心蓮內酯及脫水穿心蓮內酯對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。玉葉清火膠囊及缺玉葉金花的陰性對照樣品。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:HypersilODS2柱 (C18，4.6×250mm，5μm)，流動相:甲醇 －水 (55∶45);流速:0.85ml·min－1，進樣量為10μl，檢測波長:250nm，柱溫:常溫。理論板數 (n)按穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯計算，應不低于3000。在上述色譜條件下，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯能完全分離，對照品與陰性對照品溶液中沒有峰重疊，色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取穿心蓮內酯對照品及脫水穿心蓮內酯對照品適量，分別加甲醇制成每1ml含穿心蓮內酯100ug及脫水穿心蓮內酯45ug的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品20粒，倒出內容物，精密稱定，研細，精密稱取1.5g，精密加入甲醇50ml，稱定重量，冷浸30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，以上述色譜條件測定，根據穿心蓮內酯對照品及脫水穿心蓮內酯峰面積，以外標法計算供試品中穿心蓮內酯對照品及脫水穿心蓮內酯含量。

2.5 線性關系考察 ①精密稱取穿心蓮內酯對照品13.49mg，置于10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。分別精密吸取以上對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.0ml分別置5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣測定。以峰面積積分值為橫坐標，對照品濃度為縱坐標繪制標準曲線，則回歸方程為:Y(mg·ml－1)=3.4450×10－4X+9.8835×10－5，r=0.9997;②精密稱取脫水穿心蓮內酯對照品11.21mg，置于50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。分別精密吸取以上對照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，5.0ml分別置5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣測定。以峰面積積分值為橫坐標，對照品濃度為縱坐標繪制標準曲線，則回歸方程為:Y(mg·ml－1)=6.4815 × 10－4X+9.3661 ×10－5，r=0.9997。結果表明:穿心蓮內酯濃度在0.02698～0.2698mg·ml－1范圍內，脫水穿心蓮內酯濃度在0.02242～0.2242 mg·ml－1范圍內，進樣濃度與峰面積呈良好線性關系。

2.6 精密度試驗 分別精密吸取同一對照品溶液 (穿心蓮內酯 0.10792mg·ml－1，脫水穿心蓮內酯 0.08968mg·ml－1)各10μl，連續測定5次，依次測定峰面積值，其中穿心蓮內酯峰面積平均值為1126.57，RSD為0.56%;脫水穿心蓮內酯峰面積平均值為976.16，RSD為0.70%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗 取供試品溶液 (批號20100416)，每隔4小時分別進樣10μl，依法測定穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯峰面積值，其峰面積RSD分別為1.47%、1.41%，表明供試品溶液在20小時內保持穩定。

2.8 陰性對照試驗 按處方量，取缺穿心蓮的陰性樣品，按供試品溶液制備項下的方法提取，測定。結果在穿心蓮內酯及脫水穿心蓮內酯峰相應的保留時間無吸收峰，表明處方中其它成分對測定無干擾。

2.9 重復性試驗 取同一批號供試品 (批號20100416)按供試品溶液項下的方法制備5份供試品溶液，依法測定，結果穿心蓮內酯平均值0.968 mg/片，RSD%=1.48，脫水穿心蓮內酯平均值1.986 mg/片，RSD%=1.05，表明重復性良好。

2.10 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量 (穿心蓮內酯的含量為2.42 mg·g－1，脫水穿心蓮內酯含量為4.99mg·g－1)的玉葉清火膠囊 (批號20100416，平均粒重0.3996g)約0.75g，分別精密加入一定量的穿心蓮內酯 (穿心蓮內酯22.64mg，加甲醇定容至50ml，精密加入5ml)及脫水穿心蓮內酯 (脫水穿心蓮內酯45.12mg，加甲醇定容至50ml，精密加入5ml)，照供試品溶液項下的方法制備，測定，計算回收率，結果穿心蓮內酯平均回收率為101.440%，RSD=1.36%(n=5)，脫水穿心蓮內酯平均回收率為103.94%，RSD=1.82%(n=5)，表明方法回收率較好。

2.11 樣品中穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯的含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液3批，按上述色譜條件測定，以外標法計算，結果見表1。

表1 玉葉清火膠囊中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量測定結果

3 討論

在供試品溶液制備過程中，比較了浸漬過夜及超聲提取方法，以甲醇和乙醇做不同溶劑進行考察，結果表明，以甲醇浸泡30分鐘后超聲處理30分鐘的提取效率較高，故選擇甲醇為提取溶劑。

［1］任睿，張園園.反相高效液相色譜法測定喉舒寧片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量［J］.中南藥學，2011，9(4):271－273.

［2］邱宏聰，李茂，廖展葦.高效液相色譜法同時測定金雞膠囊中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量［J］.中國醫院藥學雜志，2011，31(13):1142－1143.

［3］張火旺.高效液相色譜法同事測定止痢寧片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量［J］.中國藥業，2011，20(21):30－31.