HPLC法測定清熱化毒丸中黃芩苷的含量

2012-04-18 11:39:14趙斐

中國民族民間醫(yī)藥 2012年10期

趙斐

山東省淄博職業(yè)學院，山東淄博 255314

清熱化毒丸原名犀角化毒丹，為衛(wèi)生部標準［1］，是根據(jù)中醫(yī)學理論，由水牛角，大黃，黃芩等中藥加工而成的純中藥制劑。功能與主治為:清火化毒，消腫止痛。用于小兒身熱煩躁，咽喉腫痛，口舌生瘡，皮膚瘡癤，口臭便秘，疹后余毒末盡。黃芩是方中的臣藥，清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎。用于濕溫、暑濕，胸悶嘔惡，濕熱痞滿，瀉痢，黃疸，肺熱咳嗽，高熱煩渴，血熱吐衄，癰腫瘡毒，胎動不安［2］。未見有用HPLC法測定清熱化毒丸中黃芩苷含量的報道。為進一步控制藥品質量，本研究建立了用HPLC法測定清熱化毒丸中黃芩苷的含量的檢測方法。

1 儀器、樣品與試劑

SHIMADZU LC－20ATVP高效液相色譜儀，SHIMADZU SPD－20AVP紫外檢測器，CTO－20A柱溫箱，SIL－20A自動進樣器。甲醇為色譜純，水為二次蒸餾水。清熱化毒丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號:0013010，9013495，規(guī)格:3g/丸)，陰性對照為自制。黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為:201016，含量為94.0%)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Agilent ZORBAX SB－C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)，以甲醇－水－磷酸 (47∶53∶0.2)為流動相，檢測波長為315nm 流速:1.0 mL·min－1，進樣量10μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對照品10.92mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液 (每1ml含黃芩苷0.2055mg)。精密量取10ml，置50ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得 (每1ml含黃芩苷0.0411mg)。

2.3 供試品溶液的制備

取約3g，精密稱定，剪碎，加硅藻土適量，研細，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理 (功率250W，頻率50kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，加70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性供試品溶液的制備

按處方比例制成缺黃芩的模擬制劑，按2.3供試品溶液的制備方法制成陰性供試品溶液。由圖3可以看出在陰性樣品中不含黃芩苷，由此可以看出黃芩苷只來源于黃芩，陰性無干擾。

黃芩苷對照品，供試品，陰性對照，3種色譜圖如圖1～3。

2.5 線性關系試驗

分別精密吸取對照品儲備液 (0.2055mg·ml－1)0.5μl，1μl，2μl，3μl，5μl，注入色譜儀，測定峰面積。結果以峰面積為縱坐標，進樣量 (μg)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程:y=10225920x－1083344(r2=0.9925)。結果表明黃芩苷在0.1028～1.0275μg范圍內線性關系良好。結果見表1。

表1 黃芩苷線性關系試驗

2.6 精密度試驗

取黃芩苷對照品溶液進行實驗，重復5次，每次進樣10μl，結果黃芩苷平均峰面積為:2725736，RSD為:0.6%，n=5;說明精密度良好。

2.7 重復性試驗

取清熱化毒丸 (北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號:0013010)，分別按正文方法制備供試品溶液，并進行實驗，結果樣品中黃芩苷含量的RSD為0.8%。表明重復性試驗良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

將2.7項下第一份供試品溶液置室溫下分別放置0，2，4，6，8，10，12 h，各進樣10μl，平均峰面積為:2714238，RSD為:0.9%，n=7，表明樣品在12h內穩(wěn)定性良好。

2.9 回收率試驗

采用加樣回收法。取清熱化毒丸 (北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號:0013010)10丸，研細，精密稱取樣品5份，每份3g，分別加入黃芩苷對照品儲備液(0.2055mg·ml－1)5ml，按“2.3”項下提取，制備供試品溶液，進樣量均為10μl，測定峰面積，計算，平均回收率為99.61%，RSD=1.4%。見表2。