HPLC 法測定防芷鼻炎片中芍藥苷的含量

梁可文 龍 云 施 丹

廣西健豐藥業(yè)有限公司，廣西 南寧 530104

防芷鼻炎片由蒼耳子、白芷、防風(fēng)、白芍、甘草等10味藥組成的復(fù)方制劑，功能清熱消炎，祛風(fēng)通竅。用于治療慢性鼻炎引起的噴嚏、鼻塞、頭痛、過敏性鼻炎、慢性鼻竇炎等。白芍為本方中有效成分之一，而白芍主要成分為芍藥苷，因此測定本品中芍藥苷的含量，可作為本品質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證藥品使用安全、有效，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)［1－3］，采用HPLC法測定了芍藥苷的含量。

1 儀器與試藥

日本島津LC－10A高效液相色譜儀，日本島津UV－10A紫外檢測器，威瑪龍色譜工作站;AICHROM柱 (C18，4.6×250mm，5μm);kh－250db型超聲處理器 (昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。

芍藥苷對照品 中國藥品生物制品檢定所提供，批號:110736－200220，供含量測定用。防芷鼻炎片 (A廠提供，共3批，批號:20100302、20100506、20100808)，乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性

色譜柱 AICHROM 柱 (C18，4.6mm ×250mm，5μm)，流動相:乙腈－0.05mol·L－1磷酸二氫鉀溶液 (12:88);流速:1.0 mL· min－1，檢測波長:230nm，進(jìn)樣量為10μl，柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算均在2000以上。色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含芍藥苷30μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

圖1 高效液相色譜圖

取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取約1.5g，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀乙醇適量，超聲處理60分鐘，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測定法

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，以上述色譜條件測定，根據(jù)芍藥苷峰面積，以外標(biāo)法計算供試品中芍藥苷的含量。

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取芍藥苷對照品10.4mg，置于100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成104.0μg· ml－1對照品溶液，備用。分別精密吸取上述對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣測定。以對照品進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積積分值為縱坐標(biāo) (Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為:Y=13273X－3224，r=0.9998。結(jié)果表明:芍藥苷在進(jìn)樣濃度10.4～52.0μg· ml－1范圍內(nèi)，進(jìn)樣濃度與芍藥苷峰面積呈良好的線形關(guān)系。

2.6 精密度試驗

精密吸取對照品溶液 (31.2μg· ml－1)10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定芍藥苷峰面積。結(jié)果，芍藥苷對照品峰面積RSD=1.80%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液 (批號:20100302)10μl，分別于0、2、4、6、8、10h測定峰面積。結(jié)果，RSD=0.98%(n=6)，表明供試品溶液在10小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 干擾試驗

按上述色譜條件，精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μl，分別注入色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果，陰性對照在芍藥苷色譜峰位置上無干擾，表明本方法專屬性良好。

2.9 重復(fù)性試驗

取同一批樣品 (批號:20100302)適量，精密稱取6份，按供試品溶液項下的方法制備，測定。結(jié)果，RSD=1.54%(n=6)，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗

取已知含量的本品 (批號:20100302)，含量:0.1608mg/片，平均片重:0.3549g/片)，除去糖衣，研細(xì)，取約0.8g，精密稱定，精密加入芍藥苷對照品溶液104.0μg· ml－1(精密稱取芍藥苷對照品10.4mg，置于100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得)3.5ml，置50ml量瓶中，加稀乙醇適量，超聲處理60分鐘，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續(xù)濾液，測定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果 (n=6)

2.11 樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液3批，按上述色譜條件測定，以外標(biāo)法計算，結(jié)果見表2。

表2 防芷鼻炎片中芍藥苷含量測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇

實驗過程中分別采用甲醇、50%甲醇、乙醇作為提取溶劑制備供試品溶液，并以上述色譜條件測定，以外標(biāo)法計算供試品中芍藥苷的含量，結(jié)果表明，用50%甲醇作為提取溶劑時提取效率最高，故采用50%甲醇作為提取溶劑。

3.2 提取時間的選擇

曾分別采用，超聲處理30、60、90分鐘后，測得的含量都相差不大，因本試驗中樣品的取樣量較大，為使樣品提取完全并節(jié)省分析時間，故采用超聲處理60分鐘。

本實驗研究表明，該方法操作簡便，重現(xiàn)性好，靈敏度高，樣品分離效果好，可用于防芷鼻炎片的質(zhì)量控制方法。

［1］楊清林，鄧開英，王賢英.HPLC測定八珍袋泡茶中芍藥苷的含量［J］.中國藥房，2009，20(21):1651－1652.

［2］李志猛，杜樹山，李向日.高效液相色譜法測定同仁牛黃清心片中芍藥苷的含量［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2009，15(5):1－3.

［3］王鳳玲，陳靜，侯奮爭，等.高效液相色譜法測定參芪心血康膠囊中芍藥苷的含量［J］.中國藥房，2006，17(4):294－295.