下丘腦—垂體—腎上腺軸在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎伴發(fā)抑郁癥中的變化

侯秀娟，朱躍蘭*，鄭 琴

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)附屬東方醫(yī)院，北京 100078；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 100029 )

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid athritis,RA)患者常伴發(fā)抑郁癥，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎伴發(fā)抑郁癥是指類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生后引發(fā)的抑郁癥，屬于繼發(fā)性抑郁癥，RA伴發(fā)抑郁癥已受到重視。通過(guò)以往工作并結(jié)合文獻(xiàn)總結(jié)得出,下丘腦—垂體—腎上腺(HPA)軸在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及抑郁癥的發(fā)病過(guò)程中都起到一定的作用,本文就HPA軸在RA伴發(fā)抑郁癥中的作用進(jìn)行了一些探索性的研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 健康清潔級(jí)雌性Wistar大鼠32只，體質(zhì)量200～220 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。

1.2 試劑 牛Ⅱ型膠原購(gòu)于Sigma 公司，完全弗氏佐劑由北京廈斯康特生物技術(shù)中心提供。ACTH放射免疫試劑盒，美國(guó)洛杉磯DPC公司；COR放射免疫試劑、CRH試劑盒：中國(guó)海軍總醫(yī)院放射免疫中心。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組 大鼠正常飼養(yǎng)1 周后，用曠野試驗(yàn)進(jìn)行行為評(píng)分，選擇評(píng)分相近的大鼠，隨機(jī)分為4組，每組8 只。正常組：每籠4 只飼養(yǎng)，正常飼養(yǎng)；模型組：每籠1只飼養(yǎng)，牛Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型后1周給予慢性不可預(yù)知的溫和應(yīng)激方法；類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組(類(lèi)風(fēng)關(guān)組)：每籠4只飼養(yǎng),牛Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型后正常飼養(yǎng)；抑郁組：每籠1只飼養(yǎng)，與模型組同時(shí)給予慢性不可預(yù)知的溫和應(yīng)激方法。

2.2 造模方法

2.2.1 牛Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型[1]將10 mg牛Ⅱ型膠原溶解于0.1 mol/L乙酸，此溶液與等量的完全弗氏佐劑(CFA)溶液混合，制備成牛Ⅱ型膠原終濃度為1 mg/mL的混合物，然后用注射器反復(fù)抽吸，直到混合物完全充分乳化，取此混合物于大鼠左足底皮下按0.1 mL/只注射，共含Ⅱ型膠原100 μg/只，壓迫注射部位使乳化物完全吸收。

2.2.2 慢性不可預(yù)知的溫和應(yīng)激方法[2]將大鼠予以?shī)A尾1 min、禁水24 h、禁食24 h、45 ℃環(huán)境5 min、晝夜顛倒24 h、水平振蕩30 min (160次/min)、4 ℃冰水游泳5 min等7種方法刺激。大鼠每天接受1種刺激，7種刺激每周各進(jìn)行1次，共安排3周。

2.2.3 孤養(yǎng)法 將動(dòng)物單籠飼養(yǎng)[2]。

2.3 指標(biāo)測(cè)定 所有大鼠快速斷頭，取下丘腦、垂體、腎上腺，立即稱(chēng)重后放入煮沸的生理鹽水中煮沸，然后加冰醋酸于勻漿器中勻漿提取,再用1N的NaOH 0.5 mL中和,4 ℃離心后，取上清液測(cè)定,用γ計(jì)數(shù)儀測(cè)定下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)含量、垂體促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)含量、腎上腺中的皮質(zhì)酮(COR)含量。

3 結(jié)果

3.1 下丘腦中CRH含量變化 與正常組比較，抑郁組、類(lèi)風(fēng)關(guān)組及模型組含量均顯著升高(P<0.01)；與抑郁組比較，類(lèi)風(fēng)關(guān)組及模型組含量顯著升高(P<0.01)；與類(lèi)風(fēng)關(guān)組比較，模型組顯著升高(P<0.01)，見(jiàn)表1。

3.2 垂體ACTH含量變化 與正常組比較，抑郁組、類(lèi)風(fēng)關(guān)組及模型組含量均顯著升高(P<0.01)，與抑郁組比較，類(lèi)風(fēng)關(guān)組含量含量升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，模型組含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與類(lèi)風(fēng)關(guān)組比較，模型組含量升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表1。

3.3 腎上腺COR含量變化 與正常組比較，抑郁組、類(lèi)風(fēng)關(guān)組及模型組含量均顯著升高(P<0.01)；與抑郁組比較，類(lèi)風(fēng)關(guān)組含量升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),模型組含量升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；與類(lèi)風(fēng)關(guān)組比較，模型組含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠CRH、ACTH及COR含量變化比較(±s,n=8) ng/mL

4 討論

HPA軸是指下丘腦、腺垂體和腎上腺皮質(zhì)3者之間的相互調(diào)控關(guān)系，是實(shí)現(xiàn)神經(jīng)—內(nèi)分泌—免疫3個(gè)系統(tǒng)構(gòu)成網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)的重要部分。CRH主要由丘腦下部室旁核小細(xì)胞神經(jīng)元分泌，促垂體前葉細(xì)胞合成、釋放ACTH,后者進(jìn)而促進(jìn)糖皮質(zhì)激素的分泌,而糖皮質(zhì)激素則通過(guò)負(fù)反饋效應(yīng)調(diào)控著CRH和ACTH的釋放,構(gòu)成了在功能上相互聯(lián)系、相互調(diào)控、相互制約的HPA軸。

研究[3]表明，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎存在下丘腦—垂體—腎上腺軸的改變。RA患者疾病活動(dòng)程度與血漿皮質(zhì)醇水平有明顯聯(lián)系，嚴(yán)重RA患者血漿皮質(zhì)醇的晝夜變化紊亂，且皮質(zhì)含量增高。神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)研究[4]提示，抑郁癥發(fā)病常伴有內(nèi)分泌功能的改變，特別是HPA的功能改變。本研究中，抑郁模型大鼠及類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠均表現(xiàn)為CRH、ACTH及COR含量明顯升高，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎伴發(fā)抑郁癥作為繼發(fā)性抑郁癥的一種，其病理過(guò)程也存在HPA軸改變的參與，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎伴發(fā)抑郁癥模型大鼠表現(xiàn)為CRH、ACTH及COR含量的明顯升高。分析其原因，RA病理過(guò)程中分泌大量的細(xì)胞因子，它們通過(guò)自分泌、旁分泌與自身受體結(jié)合的方式在自身細(xì)胞，鄰近細(xì)胞(旁分泌)及遠(yuǎn)處細(xì)胞(內(nèi)在分泌)之間的信息網(wǎng)絡(luò)中起信息傳遞遞質(zhì)的作用，在RA的發(fā)病中具有促炎、抑炎或刺激、抑制的正負(fù)反饋的免疫調(diào)控作用。當(dāng)免疫調(diào)節(jié)功能失調(diào)，致炎細(xì)胞因子占優(yōu)勢(shì)時(shí)，除通過(guò)炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)影響關(guān)節(jié)局部基質(zhì)代謝，導(dǎo)致局部關(guān)節(jié)軟骨和骨質(zhì)的破壞出現(xiàn)關(guān)節(jié)功能障礙外，通過(guò)其在腦內(nèi)特定腦區(qū)高表達(dá)受體作用于中樞，主要是在海馬和下丘腦，作用于下丘腦，可激活HPA軸，進(jìn)而影響腦內(nèi)NE和5-HT功能，導(dǎo)致單胺遞質(zhì)功能降低；而海馬是糖皮質(zhì)激素受體的高表達(dá)區(qū)，激活的HPA軸導(dǎo)致糖皮質(zhì)激素的高分泌，可作用于海馬，影響海馬功能[5]，最終共同導(dǎo)致抑郁的發(fā)生。如IL-1能直接刺激下丘腦室旁核細(xì)胞分泌促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)，激活HPA軸，最終引起皮質(zhì)醇的分泌。課題組以往研究[6]結(jié)果也證實(shí)，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎伴發(fā)抑郁癥存在上述細(xì)胞因子的高分泌。

以上研究結(jié)果提示，對(duì)于RA伴發(fā)抑郁癥患者，早期診斷和干預(yù)，在治療類(lèi)風(fēng)濕藥物基礎(chǔ)上早期應(yīng)用抗抑郁藥物，二者可聯(lián)合通過(guò)使激活的炎癥反應(yīng)系統(tǒng)標(biāo)志物正常化，減少前炎癥細(xì)胞因子的釋放，減弱前炎癥因子對(duì)中樞神經(jīng)遞質(zhì)的作用以及細(xì)胞因子對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌的作用達(dá)到抗抑郁作用，亦有助于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病情的控制。

[1]趙慧,顧立剛,陳小軍,等.桂枝芍藥知母湯對(duì)Ⅱ型膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素1β活性的影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(11):27-29.

[2]唐啟盛,裴清華,侯秀娟,等.腦卒中后抑郁狀態(tài)動(dòng)物模型的建立[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2004,27(3)：33-36.

[3]魏偉,李曉輝,張洪泉,等.抗炎免疫藥理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社.2005.

[4]王秀卿,黃慶軍.下丘腦—垂體—腎上腺軸在抑郁癥發(fā)病中的作用[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2004,13(10)：1383.

[5]馬強(qiáng).應(yīng)激對(duì)海馬的影響及損傷機(jī)理的研究進(jìn)展[J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2000,18(6):456-459.

[6]鄭琴,朱躍蘭,侯秀娟.類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎伴發(fā)抑郁癥大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的變化及中藥干預(yù)作用[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2009,37(5)：32-34.