熊膽粉對小鼠肝癌H22的抑制作用及量效關系研究

王 碩，睢大，陳志鴻，惠 敏，陳麗玲，王 琦，曲紹春，于曉風，富 力

(1.吉林農業大學中藥學院，吉林 長春 130118；2.吉林大學藥學院，吉林 長春 130021；3.福建歸真堂藥業股份有限公司，福建 福州 350000；4.大連富生天然藥物開發有限公司，遼寧 大連 116000)

熊膽為熊科(Ursidae)動物黑熊Selenaretos thibetanus Cuvier或棕熊Ursus arctos Linnaeus的干燥膽[1]，熊膽粉為經膽囊手術引流膽汁而得的干燥品。熊膽具有解熱鎮痛、鎮咳、鎮靜、抗驚闕、解痙、保肝、利膽、抑菌及對心血管病、抗病毒、抗炎、抗菌、預防膽結石及溶解膽石等作用[2]。近年研究發現,熊膽粉對腫瘤細胞的增長有一定抑制作用，但尚未見抗肝癌的報道。為了系統開發利用熊膽這一中藥資源，本文采用小鼠體內移植性腫瘤肝癌H22模型，對熊膽粉抗肝癌藥效及量效關系進行了研究。

1 材料

1.1 藥物 熊膽粉(白色粉末)，福建歸真堂藥業股份有限公司提供，批號20100521，使用時以蒸餾水配成不同濃度；環磷酰胺(規格:200 mg/支)，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司提供，批號20100318，使用時以蒸餾水配成0.1%溶液。

1.2 動物 昆明種小鼠，6～8周齡，體質量18～22 g，雄性，合格證號SCXK-(吉)2007-0003，由吉林大學實驗動物中心提供。實驗前在實驗室常規飼養1周。

1.3 細胞株 小鼠肝癌H22由吉林省腫瘤研究所提供，經本實驗室傳代保存。

2 方法

將小鼠按體質量隨機分為7組，即：對照組(給予蒸餾水)；陽性藥物組(給予環磷酰胺20 mg/kg)及熊膽粉5個劑量組(分別給予熊膽粉100、200、400、800、1 600 mg/kg)。按抗腫瘤藥物實驗方法制備體內移植性腫瘤模型[3-4]，取接種于昆明種小鼠第7天的肝癌H22腹水，在無菌條件下配制成瘤細胞懸液，調整活細胞數為1×107/mL，接種于昆明種小鼠左腹股溝皮下，每只小鼠接種0.2 mL。接種次日起給藥，各組均每日灌胃給藥1次，給藥容量為 0.2 mL/10 g，共12 d。于停藥后24 h稱取動物的體質量，頸椎脫臼處死荷瘤小鼠，剝離腫瘤組織，稱重。摘取胸腺、脾臟、肝臟稱重，計算胸腺指數、脾指數及肝指數。結果以腫瘤生長抑瘤率表示：

抑瘤率=(1-實驗組平均瘤重/對照平均瘤組)×100%

取符合實驗標準要求(對照組平均瘤重>1 g，且瘤重<400 mg的動物數不超過總數的20%)的試驗結果進行統計學分析。

3 結果

3.1 熊膽粉對小鼠肝癌H22的抑制作用 見表1。

表1結果顯示，陽性藥環磷酰胺20 mg/kg對肝癌H22的抑瘤率為86.68%，熊膽粉100、200、400、800、1 600 mg/kg 5個劑量組對肝癌H22的抑瘤率為36.00%、52.81%、61.44%、51.39%及45.96%，提示熊膽粉在200～800 mg/kg劑量范圍內，對肝癌H22的抑瘤率較高，可達50%～60%。

表1 熊膽粉對小鼠肝癌H22的生長抑制作用(±s)

3.2 熊膽粉對肝癌H22小鼠臟器指數的影響 見表2。

表2 熊膽粉對肝癌H22小鼠臟器指數的影響(±s)

表2結果顯示，陽性藥環磷酰胺可使肝癌H22小鼠的體質量、胸腺指數、脾指數及肝指數均明顯降低，而熊膽粉5個劑量組對肝癌H22小鼠的體質量、胸腺批數、脾指數及肝指數均無明顯影響。

4 討論

熊膽的化學成分比較復雜，包括膽汁酸類、膽固醇類、膽色素類、氨基酸類，還有微量元素。膽汁酸類中含有膽酸、鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸、去氧膽酸、牛磺熊去氧膽酸、牛磺鵝去氧膽酸等，其中熊去氧膽酸即3α、7β-二羥基-5β-膽烷酸是中藥熊膽的主要成分[5]。 中醫藥古籍和傳統方劑中涉及熊膽方劑有366個之多,主要功效包括清熱解毒、明目退翳、生肌美顏、消腫止痛等[5]。近年來研究[6]表明，熊膽粉的化學成分主要為膽汁酸類，其中熊去氧膽酸是熊膽粉的主要成分。李麗敏等[7]通過HPLC-ELSD法測定了熊膽粉提取物中熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸的含量。鄭興等[8]以吡啶-苯甲酰氯為柱前衍生化試劑，以RP-HPLC測定了熊膽粉中牛黃去氧膽酸的含量。王春青等[9]研究發現熊膽粉可有效清除亞硝胺前體物-亞硝酸鈉，并能阻斷二甲基亞硝胺在體外合成，其清除率與阻斷率呈量效關系，表明熊膽粉具有預防某些癌癥作用。孫鐵民等[10]用熊膽對K562、SP20腫瘤細胞株和小鼠S180腹水癌抑瘤實驗，發現熊膽粉有抑制腫瘤細胞生長、延長生存期、提高免疫功能的作用。

本實驗結果表明，熊膽粉100～1 600 mg/kg劑量對肝癌H22的抑瘤率在36.00%～61.44%之間，均表現出良好的抗肝癌H22活性，以200～800 mg/kg劑量范圍對肝癌H22的抑瘤率最高，可達50%～60%。因此，確定其抗肝癌H22的3個最佳劑量為200、400、800 mg/kg，為進一步開發中藥熊膽提供了初步的科學依據。

[1]鄧明魯.中國動物藥資源[M].北京:中國中醫藥出版社,2007:308.

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[4]韓銳.抗癌藥物研究與實驗技術[M].北京:北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社,1997:297-298.

[5]王露霏,曲曉波,胡麗娜,等.動物藥整理研究:熊膽[J].吉林中醫藥,2009,29(3):238-240.

[6]楊繼凡,王亦兵.熊脫氧膽酸的藥理作用和臨床作用[J].新藥與臨床,1985,4(3):23.

[7]李麗敏,錢大公,王柯,等.熊膽粉提取物中熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸的HPLC-ELSD測定[J].中國醫藥工業雜志,2009,40(1):39-40.

[8]鄭興,金東日.柱前衍生RP-HPLC測定熊膽粉中牛磺熊去氧膽酸的含量[J].遼寧中醫雜志,2010,37(12):2428-2429.

[9]王春青,呂樹臣.熊膽的藥理作用與開發利用[J].當代畜牧,2003,11(2):35-36.

[10]孫鐵民,梁偉,張啟明,等.熊膽抑瘤作用研究[J].遼寧中醫雜志,2003,30(1):63.