復方丹參注射液對重癥急性胰腺炎大鼠的作用機制

陳衛紅，王 欣，李 瀚，袁衛東，程風華，劉大基

(1.黃石中醫醫院，湖北 黃石 435000；2.武漢同濟醫學院同濟醫院 膽胰外科，湖北 武漢 430030)

近年來我國重癥急性胰腺炎(Severest Acute Pancreatitis，SAP)發病率呈上升趨勢，臨床起病急、病死率高達20%～30%[1-3]。對其發病機制至今未完全闡明，臨床亦缺乏有效的特異性藥物。而借助SAP動物模型是研究的重要手段[4]。本文通過對30只大鼠誘導SAP模型進行復方丹參治療對照研究，通過檢測C反應蛋白(CRP)、血清淀粉酶(Amy)、乳酸脫氫酶(LDH)、白細胞介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)等免疫因子變化，探討復方丹參注射液對SAP治療的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物 二級清潔健康大鼠40只，體質量220～250 g，均由湖北醫學動物中心提供。

1.2 試劑 Amy、CRP和LDH試劑盒均購于上海科華生物試劑公司；IL-1和IL-6檢測試劑盒購于美國R-D公司；蘇木素、伊紅(HE)染色試劑盒購于珠海貝索生物技術有限公司。

1.3 模型制備 大鼠適應性喂養1周，于術前12 h禁食不禁水。30只大鼠間隔1 h，連續7次腹腔內注射雨蛙素50 mg/kg，并在首次注射雨蛙素5 h后腹腔注射10 mg/kg脂多糖。蛋白酶體抑制劑Ps-341陽性對照組：注射脂多糖前0.5 h腹腔注射50% DMSO 0.2 mL(生理鹽水稀釋)。復方丹參注射液治療組：復方丹參注射液20 mL加0.9%氯化鈉150 mL靜脈滴注每日1次，共7 d。對照組：用生理鹽水代替雨蛙素和脂多糖，依上述同樣方法腹腔注射。

1.4 檢測指標 觀察各組大鼠一般情況及病死率。

1.5 血清淀粉酶及血漿內毒素測定 各組大鼠于術后24 h乙醚吸入麻醉后開胸，迅速心臟穿刺取血液5 mL，4 ℃靜置1 h，3 000 r/min離心10 min，取500 μL上清，日本東芝120全自動生化分析儀檢測Amy、LDH、CRP。

1.6 血清細胞因子檢測 同上處理，取500 μL上清，-20 ℃保存，ELISA法檢測IL1-β、IL-6。

1.7 胰腺組織病理學檢查 術后12 h取部分胰腺組織，4%多聚甲醛固定。常規石蠟切片，HE染色，由2位專業病理醫師雙盲閱片，每張切片隨機選取10個視野，參照RONGIONE等[5]組織學病理分級法按水腫、炎細胞浸潤、出血壞死進行評分，取各項積分總和為最終得分，10個視野的平均分數為每張切片的最后評分。

2 結果

2.1 各組大鼠血清淀粉酶、乳酸脫氫酶、C反應蛋白水平比較 見表1。

2.2 各組大鼠對血清白介素IL-1和IL-6的水平比較 見表2。

2.3 Ps-341各組大鼠胰腺組織評分比較 見表3。

表1 各組大鼠血清淀粉酶、乳酸脫氫酶和C反應蛋白水平比較(±s)

表2 各組大鼠血清IL-1和IL-6水平比較(±s) ng/mL

表3 各組大鼠胰腺組織評分比較(±s)

3 討論

SAP的發病過程中出現的組織壞死、大量滲出和繼發性感染均可刺激抗體釋放大量炎癥介質和各種細胞因子，包括TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等。主要介導免疫和炎癥反應，其大量釋放時會破壞炎癥和抗炎癥細胞因子之間的平衡，導致全身炎癥反應綜合征(SIRS)和多器官功能障礙(MODS)。SIRS是多器官功能障礙(MODS)的主要誘因。因此預防與治療SIRS是治療SAP的重要措施。目前，中西醫結合治療和機制研究有一些報道[1-4],但是尚未發現一種特效的藥物。本文就復方丹參注射液的抗炎和啟動細胞抗炎因子平衡作了對比研究，結果均獲得同抗蛋白酶一樣的效果。

復方丹參注射液是以丹參為主的中藥復方制劑。現代醫學研究[6-8]表明，丹參的主要成分是丹參酮，具有抑制血小板凝聚、降低血黏度、抗血栓形成，改善微循環和血液流變學的作用，同時還抑制溶酶體的釋放和中性粒細胞的趨化作用，有抗氧化和鈣通道阻滯作用。其作用機制可能在于：1)為活血化瘀中藥，具有抑制血小板黏附、聚集和釋放的作用，能有效降低紅細胞聚集指數，改善血液流變性，調節血液黏稠度，改善壞死區局部微循環及血液流變學的作用。2)具有良好的清除氧自由基、抗脂質過氧化作用，鈣通道阻滯劑作用。3)有保護細胞膜、調節組織修復與再生作用。4)對重要臟器的缺血再灌注損傷有較好的保護作用。謝敏等[9]研究表明，在西醫治療重癥急性胰腺炎的基礎上加用復方丹參注射液能夠提高SAP治療效果，顯著降低患者血清中的淀粉酶、白細胞水平和使血鈣恢復,使患者的癥狀、體征能較快緩解，有效阻止了胰腺炎病變進一步惡化，加速機體康復。

[1]陳炫,沙建平,趙艷,等.益活清胰1號對大鼠重癥急性胰腺炎心肌損傷的保護作用[J].中國現代醫學雜志,2006,6(9):1345-1348.

[2]邵華,范昀,徐晉.重癥急性胰腺炎術后配合中藥輔助治療的臨床體會[J].吉林中醫藥,2004,24(9):24-25.

[3]連樹林,趙建波.中西醫結合治療重癥急性胰腺炎臨床觀察[J].吉林中醫藥,2009,29(6):497-498.

[4]顧向東.大承氣湯加味治療急性胰腺炎50例[J].吉林中醫藥,2006,26(10):25.

[5]蘇振政.中西醫結合治療急性胰腺炎30例[J].吉林中醫藥,2006,26(12):46.

[6]張 ,符思,王微,等.中西醫結合治療急性胰腺炎32例臨床觀察[J].吉林中醫藥,2011,31(9):869-870.

[7]劉鋒,劉浩,夏慶.攻下法治療重癥急性胰腺炎的應用及機理研究[J].吉林中醫藥,2008,28(1):71-72.

[8]米寧,杜高輝.丹參抗氧化作用對大鼠AP的影響[J].中國病理生理學雜志,1991,7(5):499.

[9]謝敏,金遵禹,葉耿輝,等.復方丹參注射液治療重癥胰腺炎的臨床研究[J].中國中西醫結合雜志,1995,15(5):269-270.