化纖通絡顆粒對肝纖維化大鼠肝臟脂質過氧化水平及羥脯氨酸的影響

白靜麗，姜海燕，劉慶彬

(長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021)

目前研究表明，肝纖維化的形成與氧自由基介導的肝損傷有關，其中SOD、MDA及GSH-PX的異常與發(fā)病關系尤為密切。本研究通過觀察化纖通絡顆粒對肝纖維化大鼠血清SOD、MDA、GSH-PX和HYP的影響，進一步探討其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 正常雄性Wistar大鼠60只(清潔級)，體質量(220±20)g，吉林大學實驗動物中心提供。

1.2 藥品及試劑 化纖通絡顆粒(由丹參、三七、地龍、虎杖、大黃、鱉甲、黃芪、當歸組成)，由長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院制劑室制備；復方鱉甲軟肝片:福瑞制藥內蒙古集寧制藥廠生產，用蒸餾水溶解為0.3 g/mL的溶液，冷藏備用。四氯化碳(CCl4分析純):北京北化精細化學品有限責任公司；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱苷肽過氧化物酶(GSH-PX)試劑盒購自南京建成生物制品公司。

1.3 動物模型的建立 受試大鼠隨機分為4組:正常對照組(15只)，模型組(15只)，復方鱉甲軟肝片組(15只)，化纖通絡顆粒組(15只)。正常喂養(yǎng)1周后，應用40%CCl4豆油溶液，皮下注射給藥，首次按0.5 mL/100 g，以后按0.3 mL/100 g體質量，每周注射2次，連續(xù)8周[1]。

1.4 動物分組 正常對照組：從實驗第1天開始，灌胃生理鹽水1.5 mL/100 g，每日1次；模型組：造模同時，每天灌服等量生理鹽水；陽性對照組：造模同時，灌服復方鱉甲軟肝片溶液1.5 mL/100 g，日1次；治療組：造模同時開始每天以1.5 mL/100 g灌服化纖通絡顆粒溶液，直至實驗結束。

1.5 標本的采集 各組于8周末，禁食12 h后斷頭取血，離心，取血清，-20 ℃保存，留做血清學檢查；取血后立即去頭取肝，一部分迅速投入液氮，之后轉入-70 ℃冰箱保存，備肝組織勻漿，測組織生化。

1.6 實驗方法 肝勻漿制備：肝組織解凍后，生理鹽水反復沖洗，濾紙吸干，切取小塊，電子分析天平稱重(100～300 mg)，置于試管內，按1∶9加入生理鹽水，高速分散器勻漿，低溫高速離心機3 000 r/15 min，取上清液，以上操作均于冰浴中進行。按試劑盒說明進行SOD、MDA、GSH-PX檢測。

2 結果

2.1 對肝纖維化大鼠SOD、MDA和GSH-PX的影響 見表1。

2.2 對肝纖維化大鼠HYP含量的影響 見表2。

3 討論

化纖通絡顆粒是根據中醫(yī)傳統理論和多年臨床探索研制而成的復方中藥制劑，具有保肝降酶，改善肝臟微循環(huán)，降低細胞因子等水平，修復增生變性的肝纖維結締組織，保護肝細胞和抑制膠原合成的作用。方中丹參、三七、地龍活血化瘀、益氣養(yǎng)血通絡；虎杖清熱利濕、解毒活血；大黃活血化瘀、通腑泄熱，配以黃芪益氣升陽、鼓舞氣機，生地黃滋陰補腎，二藥合用扶正補虛。諸藥合用共奏化纖通絡之功。

表1 各組大鼠肝組織SOD、MDA和GSH-PX變化(n=15，±s)

表2 各組大鼠肝組織羥脯氨酸含量變化(±s)

自由基引起的氧化應激反應是誘發(fā)肝損傷的重要原因[2-3]。HYP是膠原蛋白所特有的，肝纖維化時，膠原蛋白可增加50%左右，而肝硬化時可高達6倍[4]。因此，測定HYP的含量可成為反映肝纖維化程度的直接指標。

本研究結果表明，化纖通絡顆?？商岣逽OD、GSH-PX活性，降低MDA及HYP的生成，從而減少ECM積聚，對肝纖維化的形成具有明顯防治作用，其機制可能與抗脂質過氧化損傷及降低膠原蛋白含量有關。

[1]程明亮,劉三都.肝硬化細胞模型的研究及診療評價[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1996:291.

[2]齊寶寧,易建華,唐國慧,等.正己烷致大鼠脂質過氧化及肝細胞DNA損傷的實驗研究[J].西安交通大學學報(醫(yī)學版),2007,28(2):145.

[3]馬蘭軍,毛雁.沙苑子對運動訓練大鼠肝臟自由基代謝的影響[J].西安交通大學學報(醫(yī)學版),2007,28(4):409.

[4]Gressner AM,Weiskirchen R,Breitkopf K,et al.Roles of TGF-beta in hepatic fibrosis[J].Front Biosci,2002(7):793.