推拿手法對家兔肌肉纖維化模型α-SMA表達水平影響的實驗研究

馮 躍，楊 潔，羅 建，李 敏，羅才貴*

(1.成都中醫藥大學針灸推拿學院，四川 成都 610075；2.成都中醫藥大學附屬醫院 推拿科，四川 成都 610072；3.雅安市教育學院 四川 雅安 625000)

肌肉纖維化是很多肌肉軟組織疾病的基本病理變化，如嬰幼兒的先天性肌性斜頸、長期的肌肉勞損、放療后局部肌肉損傷等，均有肌肉纖維化的改變，推拿在治療上述疾病時臨床療效顯著，通過推拿治療，局部肌肉明顯軟化，因此，我們推斷推拿手法可以減緩甚至逆轉肌肉的纖維化，為了證明此推斷，本實驗以幼兔肌肉纖維化模型為研究對象，推拿手法干預后觀察反應肌肉纖維化變化的指標，從而明確推拿治療肌肉軟組織疾病組織形態學改變的實質。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗對象 品種：日本大耳白兔，來源：成都中醫藥大學實驗室動物房采購及飼養，周齡：4～5周。共24只，雌雄各半，體質量450～550 g。隨機分為3組，每組8只。

1.2 造模方法 試劑：無水乙醇(深圳市華昌化工有限公司)。造模:3組幼兔均采用無水乙醇注射右側胸鎖乳突肌進行造模。方法：助手固定好幼兔，操作者一手提起幼兔右側胸鎖乳突肌，另一手在其中段進行常規消毒，用2 mL注射器吸入無水乙醇，回抽無回血后緩慢注射，注射量按照1 mL/kg的標準，每只幼兔注射1次。造模時間：注射后1個月。

1.3 分組干預 模型1組：注射后不做任何處理，1個月后取標本(注射部位組織)進行指標檢測，以確認造模是否成功。模型2組：注射后不做任何處理，作為模型對照組，2個月后取標本。推拿組：注射1個月后，采用拿揉法對造模處進行推拿。具體操作:以單手拇指指腹與食中二指指腹相對(食指與中指并攏)拿持住胸鎖乳突肌注射處(有結節樣改變)，做吸定基礎之上的回旋與提起揉動(拿揉法)。通過對操作者拿揉法運用“推拿手法測定儀”進行檢測，操作中手法參數控制在：平均壓1 kg，頻率120次/min。每次操作5 min，每日操作1次，5次為1療程，療程間休息2 d，共治療4個療程。

1.4 統計學處理 所有資料均采用SPSS 13.0統計軟件包。2組計量資料均數比較，采用成組t檢驗，多組計量資料均數比較，采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，多組等級資料比較采用非參數秩和檢驗，均以P<0.05為具有統計學意義。

2 結果

2.1 各組造模前基線比較 見表1。

表1 各組幼兔造模前體質量比較(±s)

2.2 標本送檢情況 見表2。

表2 各組幼兔死亡率

2.3 SCM病理學改變

2.3.1 HE病理檢測 見表3～表4。

表3 各組HE病理變化情況

表4 3個模型組纖維組織增生程度比較

2.3.2 α-SMA免疫組化測定 見表5。

表5 α-SMA陽性率比較±s %

3 討論

本實驗顯示，推拿組標本HE病理檢測較模型組纖維增生程度減輕，并有統計學意義(P<0.05)，同時推拿組所有標本均未見α-SMA陽性率表達，與模型組比較有統計學意義。表明推拿手法可以減緩甚至逆轉肌肉的纖維化改變，是推拿治療此類疾病的作用實質。

無水乙醇是臨床比較常用的傳統硬化劑，在肝癌、腎囊腫等疾病的治療中應用較為廣泛。其作用機制主要為無水乙醇直接注入腫瘤內，可使腫瘤細胞及其血管的內皮細胞迅速脫水，蛋白凝固，癌細胞變性壞死，癌周血管完全閉塞，繼而引起癌組織缺血壞死，纖維形成[1]。本實驗模型1組在造模1個月后標本HE病理變化顯示：肌細胞形態和結構呈灶性肌細胞變性、壞死，炎細胞浸潤可見，纖維組織增生呈小灶性、多灶性、片狀。α-平滑肌肌動蛋白(alpha-Smooth Muscle Actin,α-SMA)是肌纖維母細胞的細胞表型可靠標志性蛋白[2]。唐盛平等[3]在對相關疾病的α-SMA研究中,全面顯示出該抗體陽性細胞根據肌成纖維細胞在組織器官纖維化中的作用及在該病的高表達，推測該細胞在本病的病理演變過程中扮演重要角色。本實驗模型1組和模型2組均見較高陽性表達率，可見肌肉纖維化造模已成功，這種變化與推拿臨床常見多種疾病的病理變化相同，比如小兒肌性斜頸。

小兒肌性斜頸的病因目前尚無定論，但其局部的病理改變是趨于統一的，即胸鎖乳突肌間質增生和纖維化。劉傳康等[4]研究發現成纖維細胞和成肌細胞在肌性斜頸的發病機制中具有非常重要的作用。如以成纖維細胞增殖、成熟為主，就可能發生胸鎖乳突肌纖維組織大量增生，出現肌肉纖維化而臨床上表現為典型的斜頸癥狀；如以成肌細胞增殖、分化成熟為主，就可能形成較為正常的肌肉組織而不出現斜頸的表現或肌肉部分纖維化而出現輕型斜頸的表現。

因此，本實驗推拿組治療后HE病理變化以及不見肌肉纖維增生,α-SMA亦不見陽性表達，證明推拿手法能夠減輕甚至逆轉肌肉纖維化，也就不難理解推拿治療小兒肌性斜頸的臨床療效和優勢。從而證明，推拿治療各種疾病取效的機制均與此有關，但詳細的關系和機制仍需我們深入研究。

[1]潘東香,潘定宇,胡軍.超聲引導下肝臟穿刺瘤體內注射無水乙醇治療肝癌[J].武漢大學學報(醫學版),2007,28(2):243-245.

[2]Margo GF.Colombatti amyofibroblasts and extracellular matrix glycoproteinsin palmar fibromatosls[J].General & Diagnostic Pathology,1997,142(3-4):185-190.

[3]唐盛平,劉正全,全學模,等.先天性斜頸的病理研究[J].中華小兒外科雜志,1998,19(2):96-98.

[4]劉傳康,張德文.地塞米松對大鼠骨骼肌間質中成纖維細胞增殖的影響[J].兒科藥學雜志,2003,9(2):18-19.