推拿手法對(duì)家兔肌肉纖維化模型α-SMA表達(dá)水平影響的實(shí)驗(yàn)研究

馮 躍，楊 潔，羅 建，李 敏，羅才貴*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，四川 成都 610075；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 推拿科，四川 成都 610072；3.雅安市教育學(xué)院 四川 雅安 625000)

肌肉纖維化是很多肌肉軟組織疾病的基本病理變化，如嬰幼兒的先天性肌性斜頸、長(zhǎng)期的肌肉勞損、放療后局部肌肉損傷等，均有肌肉纖維化的改變，推拿在治療上述疾病時(shí)臨床療效顯著，通過(guò)推拿治療，局部肌肉明顯軟化，因此，我們推斷推拿手法可以減緩甚至逆轉(zhuǎn)肌肉的纖維化，為了證明此推斷，本實(shí)驗(yàn)以幼兔肌肉纖維化模型為研究對(duì)象，推拿手法干預(yù)后觀察反應(yīng)肌肉纖維化變化的指標(biāo)，從而明確推拿治療肌肉軟組織疾病組織形態(tài)學(xué)改變的實(shí)質(zhì)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 品種：日本大耳白兔，來(lái)源：成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房采購(gòu)及飼養(yǎng)，周齡：4～5周。共24只，雌雄各半，體質(zhì)量450～550 g。隨機(jī)分為3組，每組8只。

1.2 造模方法 試劑：無(wú)水乙醇(深圳市華昌化工有限公司)。造模:3組幼兔均采用無(wú)水乙醇注射右側(cè)胸鎖乳突肌進(jìn)行造模。方法：助手固定好幼兔，操作者一手提起幼兔右側(cè)胸鎖乳突肌，另一手在其中段進(jìn)行常規(guī)消毒，用2 mL注射器吸入無(wú)水乙醇，回抽無(wú)回血后緩慢注射，注射量按照1 mL/kg的標(biāo)準(zhǔn)，每只幼兔注射1次。造模時(shí)間：注射后1個(gè)月。

1.3 分組干預(yù) 模型1組：注射后不做任何處理，1個(gè)月后取標(biāo)本(注射部位組織)進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)，以確認(rèn)造模是否成功。模型2組：注射后不做任何處理，作為模型對(duì)照組，2個(gè)月后取標(biāo)本。推拿組：注射1個(gè)月后，采用拿揉法對(duì)造模處進(jìn)行推拿。具體操作:以單手拇指指腹與食中二指指腹相對(duì)(食指與中指并攏)拿持住胸鎖乳突肌注射處(有結(jié)節(jié)樣改變)，做吸定基礎(chǔ)之上的回旋與提起揉動(dòng)(拿揉法)。通過(guò)對(duì)操作者拿揉法運(yùn)用“推拿手法測(cè)定儀”進(jìn)行檢測(cè)，操作中手法參數(shù)控制在：平均壓1 kg，頻率120次/min。每次操作5 min，每日操作1次，5次為1療程，療程間休息2 d，共治療4個(gè)療程。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有資料均采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包。2組計(jì)量資料均數(shù)比較，采用成組t檢驗(yàn)，多組計(jì)量資料均數(shù)比較，采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，多組等級(jí)資料比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，均以P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組造模前基線比較 見(jiàn)表1。

表1 各組幼兔造模前體質(zhì)量比較(±s)

2.2 標(biāo)本送檢情況 見(jiàn)表2。

表2 各組幼兔死亡率

2.3 SCM病理學(xué)改變

2.3.1 HE病理檢測(cè) 見(jiàn)表3～表4。

表3 各組HE病理變化情況

表4 3個(gè)模型組纖維組織增生程度比較

2.3.2 α-SMA免疫組化測(cè)定 見(jiàn)表5。

表5 α-SMA陽(yáng)性率比較±s %

3 討論

本實(shí)驗(yàn)顯示，推拿組標(biāo)本HE病理檢測(cè)較模型組纖維增生程度減輕，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，同時(shí)推拿組所有標(biāo)本均未見(jiàn)α-SMA陽(yáng)性率表達(dá)，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明推拿手法可以減緩甚至逆轉(zhuǎn)肌肉的纖維化改變，是推拿治療此類疾病的作用實(shí)質(zhì)。

無(wú)水乙醇是臨床比較常用的傳統(tǒng)硬化劑，在肝癌、腎囊腫等疾病的治療中應(yīng)用較為廣泛。其作用機(jī)制主要為無(wú)水乙醇直接注入腫瘤內(nèi)，可使腫瘤細(xì)胞及其血管的內(nèi)皮細(xì)胞迅速脫水，蛋白凝固，癌細(xì)胞變性壞死，癌周血管完全閉塞，繼而引起癌組織缺血壞死，纖維形成[1]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?組在造模1個(gè)月后標(biāo)本HE病理變化顯示：肌細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)呈灶性肌細(xì)胞變性、壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)可見(jiàn)，纖維組織增生呈小灶性、多灶性、片狀。α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha-Smooth Muscle Actin,α-SMA)是肌纖維母細(xì)胞的細(xì)胞表型可靠標(biāo)志性蛋白[2]。唐盛平等[3]在對(duì)相關(guān)疾病的α-SMA研究中,全面顯示出該抗體陽(yáng)性細(xì)胞根據(jù)肌成纖維細(xì)胞在組織器官纖維化中的作用及在該病的高表達(dá)，推測(cè)該細(xì)胞在本病的病理演變過(guò)程中扮演重要角色。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?組和模型2組均見(jiàn)較高陽(yáng)性表達(dá)率，可見(jiàn)肌肉纖維化造模已成功，這種變化與推拿臨床常見(jiàn)多種疾病的病理變化相同，比如小兒肌性斜頸。

小兒肌性斜頸的病因目前尚無(wú)定論，但其局部的病理改變是趨于統(tǒng)一的，即胸鎖乳突肌間質(zhì)增生和纖維化。劉傳康等[4]研究發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞和成肌細(xì)胞在肌性斜頸的發(fā)病機(jī)制中具有非常重要的作用。如以成纖維細(xì)胞增殖、成熟為主，就可能發(fā)生胸鎖乳突肌纖維組織大量增生，出現(xiàn)肌肉纖維化而臨床上表現(xiàn)為典型的斜頸癥狀；如以成肌細(xì)胞增殖、分化成熟為主，就可能形成較為正常的肌肉組織而不出現(xiàn)斜頸的表現(xiàn)或肌肉部分纖維化而出現(xiàn)輕型斜頸的表現(xiàn)。

因此，本實(shí)驗(yàn)推拿組治療后HE病理變化以及不見(jiàn)肌肉纖維增生,α-SMA亦不見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，證明推拿手法能夠減輕甚至逆轉(zhuǎn)肌肉纖維化，也就不難理解推拿治療小兒肌性斜頸的臨床療效和優(yōu)勢(shì)。從而證明，推拿治療各種疾病取效的機(jī)制均與此有關(guān)，但詳細(xì)的關(guān)系和機(jī)制仍需我們深入研究。

[1]潘東香,潘定宇,胡軍.超聲引導(dǎo)下肝臟穿刺瘤體內(nèi)注射無(wú)水乙醇治療肝癌[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,28(2):243-245.

[2]Margo GF.Colombatti amyofibroblasts and extracellular matrix glycoproteinsin palmar fibromatosls[J].General & Diagnostic Pathology,1997,142(3-4):185-190.

[3]唐盛平,劉正全,全學(xué)模,等.先天性斜頸的病理研究[J].中華小兒外科雜志,1998,19(2):96-98.

[4]劉傳康,張德文.地塞米松對(duì)大鼠骨骼肌間質(zhì)中成纖維細(xì)胞增殖的影響[J].兒科藥學(xué)雜志,2003,9(2):18-19.