高效液相色譜法測定婦炎康滴丸中鹽酸小檗堿的含量

李桂峰，高紅梅，吳 萍，李明偉

(吉林修正藥業新藥開發有限公司，吉林 長春 130012)

婦炎康滴丸系由赤芍、土茯苓、三棱(醋炙)、黃柏、延胡索、苦參等13味藥材組成，具有活血化瘀，軟堅散結，清熱解毒，消炎止痛的功效。適用于慢性附件炎、盆腔炎、陰道炎、膀胱炎、慢性闌尾炎、尿路感染。為有效地控制本品質量，我們建立了方中主要藥物黃柏中的有效成分鹽酸小檗堿的含量測定方法，為該品種的質量標準提供了實驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀agilent 1200(美國安捷倫公司)；Agilent chem.station色譜工作站；UV-2401紫外分光光度計；AB204-E型分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)

1.2 材料 婦炎康滴丸由吉林修正藥業新藥開發有限公司提供(樣品批號為040801、040802、040803)；鹽酸小檗堿對照品(供含量測定用)(批號：110713-200208、購于中國藥品生物制品檢定所)；所用試劑甲醇、乙腈為色譜純，其余均為分析純(北京化工廠)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動相：乙腈-0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液(28∶72)；檢測波長:354 nm。流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含17 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取約0.5 g，精密稱定，置50 mL量瓶中,加入鹽酸-甲醇(1∶100)混合溶液約40 mL，超聲處理(功率250 W、頻率40 kHz)30 min，放冷，加鹽酸-甲醇(1∶100)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL，加在堿性氧化鋁柱(200～300目，4 g，內徑1.2 cm)上，以甲醇150 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備 以相同工藝制備不含黃柏的樣品，按照供試品溶液制備方法制備成陰性樣品溶液。

2.5 線性關系考察 稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含17 μg的溶液。分別精密吸取上述對照品液4、6、8、10、12、14、16 μL分別注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積(A)對進樣量(μg)進行線性回歸，回歸方程為：Y=13 705X+1 804.5，相關系數r=0.999 6。結果表明，鹽酸小檗堿在進樣量為68～270 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.6 穩定性試驗 取同一分供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h依法測定，以鹽酸小檗堿的峰面積計算相對標準偏差，RSD為0.76%。結果供試品溶液穩定性較好。

2.7 精密度試驗 取同一批供試品，在同一實驗室，通過不同時間、不同分析人員、不同型號的高效液相色譜儀，按照含量測定項下方法測定本品中鹽酸小檗堿含量=0.85 mg/g，RSD為1.26%。結果表明，本品含量測定方法中間精密度良好。

2.9 回收率試驗 采用加樣回收法。精密稱取已知含量供試品(鹽酸小檗堿含量0.896 0 mg/g)約0.25 g,6分，精密稱定，分別置50 mL量瓶中，加入濃度為17.2 μg/mL的對照品溶液13 mL,按照含量測定方法操作，分別測定鹽酸小檗堿的含量，計算回收率。結果樣品平均回收率為99.27%，RSD為1.66%，方法準確，可行。

2.10 樣品含量測定 分別稱取3批樣品適量,按2.3項下方法操作并測定，含量測定結果分別為33.58、33.82、33.62 μg/丸。

3 討論

3.1 在研究婦炎康滴丸質量標準時，由于處方中君藥赤芍的含量測定有干擾，選擇處方中黃柏中有效成分小檗堿為含量測定指標，以鹽酸小檗堿計，采用高效液相色譜法測定，具有靈敏、分析準確、重現性好的特點，能較好的控制該制劑的質量。

3.2 實驗曾經對乙腈、0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液 的比例及磷酸二氫鉀溶液的濃度進行了對比研究，選定乙腈-0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液 (28∶72)為最佳流動相配比；檢測波長為354 nm，柱溫:40 ℃，流速:1.0 mL/min，進樣量:10 μL。在此色譜條件下，供試品色譜中，在與對照品色譜相同的保留時間處有色譜峰，與其他組分能達到較好分離。為了使鹽酸小檗堿色譜峰達到基線分離，定量分析更準確，在系統適用性試驗中規定理論塔板數不得低于2 000。

[1]肖培根.新編中藥志[J].北京：化學工業出版社，2000.

[2]中華人民共和國藥典委員會.中國藥典[M].北京：化學工業出版社，2010.

[3]苗明三.現代實用中藥質量控制技術[M].北京：人民衛生出版社，2000.