高效液相色譜法測(cè)定婦炎康滴丸中鹽酸小檗堿的含量

李桂峰，高紅梅，吳 萍，李明偉

(吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130012)

婦炎康滴丸系由赤芍、土茯苓、三棱(醋炙)、黃柏、延胡索、苦參等13味藥材組成，具有活血化瘀，軟堅(jiān)散結(jié)，清熱解毒，消炎止痛的功效。適用于慢性附件炎、盆腔炎、陰道炎、膀胱炎、慢性闌尾炎、尿路感染。為有效地控制本品質(zhì)量，我們建立了方中主要藥物黃柏中的有效成分鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法，為該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀agilent 1200(美國(guó)安捷倫公司)；Agilent chem.station色譜工作站；UV-2401紫外分光光度計(jì)；AB204-E型分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)

1.2 材料 婦炎康滴丸由吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司提供(樣品批號(hào)為040801、040802、040803)；鹽酸小檗堿對(duì)照品(供含量測(cè)定用)(批號(hào)：110713-200208、購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所)；所用試劑甲醇、乙腈為色譜純，其余均為分析純(北京化工廠(chǎng))。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液(28∶72)；檢測(cè)波長(zhǎng):354 nm。流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含17 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱(chēng)定，置50 mL量瓶中,加入鹽酸-甲醇(1∶100)混合溶液約40 mL，超聲處理(功率250 W、頻率40 kHz)30 min，放冷，加鹽酸-甲醇(1∶100)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL，加在堿性氧化鋁柱(200～300目，4 g，內(nèi)徑1.2 cm)上，以甲醇150 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備 以相同工藝制備不含黃柏的樣品，按照供試品溶液制備方法制備成陰性樣品溶液。

2.5 線(xiàn)性關(guān)系考察 稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含17 μg的溶液。分別精密吸取上述對(duì)照品液4、6、8、10、12、14、16 μL分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以峰面積(A)對(duì)進(jìn)樣量(μg)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程為：Y=13 705X+1 804.5，相關(guān)系數(shù)r=0.999 6。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在進(jìn)樣量為68～270 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一分供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h依法測(cè)定，以鹽酸小檗堿的峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為0.76%。結(jié)果供試品溶液穩(wěn)定性較好。

2.7 精密度試驗(yàn) 取同一批供試品，在同一實(shí)驗(yàn)室，通過(guò)不同時(shí)間、不同分析人員、不同型號(hào)的高效液相色譜儀，按照含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定本品中鹽酸小檗堿含量=0.85 mg/g，RSD為1.26%。結(jié)果表明，本品含量測(cè)定方法中間精密度良好。

2.9 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法。精密稱(chēng)取已知含量供試品(鹽酸小檗堿含量0.896 0 mg/g)約0.25 g,6分，精密稱(chēng)定，分別置50 mL量瓶中，加入濃度為17.2 μg/mL的對(duì)照品溶液13 mL,按照含量測(cè)定方法操作，分別測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果樣品平均回收率為99.27%，RSD為1.66%，方法準(zhǔn)確，可行。

2.10 樣品含量測(cè)定 分別稱(chēng)取3批樣品適量,按2.3項(xiàng)下方法操作并測(cè)定，含量測(cè)定結(jié)果分別為33.58、33.82、33.62 μg/丸。

3 討論

3.1 在研究婦炎康滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，由于處方中君藥赤芍的含量測(cè)定有干擾，選擇處方中黃柏中有效成分小檗堿為含量測(cè)定指標(biāo)，以鹽酸小檗堿計(jì)，采用高效液相色譜法測(cè)定，具有靈敏、分析準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，能較好的控制該制劑的質(zhì)量。

3.2 實(shí)驗(yàn)曾經(jīng)對(duì)乙腈、0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液 的比例及磷酸二氫鉀溶液的濃度進(jìn)行了對(duì)比研究，選定乙腈-0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液 (28∶72)為最佳流動(dòng)相配比；檢測(cè)波長(zhǎng)為354 nm，柱溫:40 ℃，流速:1.0 mL/min，進(jìn)樣量:10 μL。在此色譜條件下，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相同的保留時(shí)間處有色譜峰，與其他組分能達(dá)到較好分離。為了使鹽酸小檗堿色譜峰達(dá)到基線(xiàn)分離，定量分析更準(zhǔn)確，在系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中規(guī)定理論塔板數(shù)不得低于2 000。

[1]肖培根.新編中藥志[J].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000.

[2]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

[3]苗明三.現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000.