EGF和EGFr基因在臨床供皮區創面愈合中表達的研究

谷廷敏等

[摘要]目的：觀測臨床創面愈合中表皮生長因子（Epidermal growth factor，EGF）基因和表皮生長因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFr）基因的表達，探討EGF和EGFr基因表達變化在創面修復中的作用。方法：應用原位雜交方法對臨床患者斷層供皮區創面愈合中EGF、EGFr基因表達變化進行了動態觀察，并進行半定量分析。結果：臨床創面愈合過程中，EGF、EGFr基因表達有明顯規律性的變化，傷后4天，創面內EGF基因表達較弱，EGFr基因表達很強；傷后10天，創面內EGF基因表達明顯增強，分布范圍增大，而EGFr基因表達較傷后4天減弱，分布范圍減小；傷后16天，創面內EGF、EGFr基因表達強度均較傷后10d明顯減弱，EGF表達強度接近傷后4天的水平，而EGFr基因表達已基本呈陰性。結論：EGF、EGFr基因表達變化與創面修復的過程有明顯相關，EGF、EGFr基因表達變化參與了創面修復過程，合理調控其表達變化有助于創面修復。

[關鍵詞]EGF基因；EGFr基因；創面愈合

[中圖分類號]R622R318 [文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455（2012）11-1985-02

創面愈合是一個復雜的病理過程，涉及局部出血、滲出、炎性浸潤、細胞增殖分化和細胞外基質沉積等過程。既往，筆者觀察到：在動物供皮區創面和燒傷患者創面中，EGF、EGFr基因有明顯的表達變化，提示：創面愈合中EGF、EGFr基因有明顯的規律性表達變化，且與創面愈合過程明顯相關[1-3]。為進一步探討EGF、EGFr基因表達變化與創傷愈合關系的普遍性，筆者又對臨床供皮區創面愈合過程中的EGF、EGFr基因表達變化進行了研究，現報道如下。

1材料和方法

1.1標本留取：選取燒傷或整形患者的中厚斷層供皮區創面共32例，男19例，女13例，年齡22～49歲。患者無特殊疾患。供皮區創面位于大腿或下腹部。征得患者同意，分別于術后4天、10天、16天，在局麻下用眼科角膜環鉆切取包括創面、創基及少量皮下脂肪在內的標本，并取正常皮膚作為對照。

1.2 原位組織雜交方法：將留取的標本置于4%的多聚甲醛液固定，酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切成5μm的組織切片，用地高辛標記EGF、EGFr cDNA探針后，進行組織切片的原位雜交：組織切片脫蠟入水，0.2mol/L鹽酸酸化，蛋白酶K消化，酒精脫水，置預雜交液（42℃）預雜交4h，入雜交液雜交（42℃）17h后，用Dig-DNA labelling and detection（ Boegringer Mannheim公司產品 ）試劑盒觀察切片中EGF、EGFr基因活化表達的mRNA的變化情況，以確定創面愈合中EGF、EGFr基因表達狀況。400倍光鏡下測定其相對含量，以所見視野內無陽性細胞為陰性，連續記數5個視野，求出每個視野內陽性細胞數，當視野內有10個以下陽性細胞時，表達強度確定為弱陽性（+）；當視野內有11～20個陽性細胞時，表達強度確定為中等陽性（++）；當視野內有21個以上陽性細胞時，表達強度確定為強陽性（+++）。統計學處理應用組間方差分析

2結果

本組中厚斷層供皮區創面愈合時間平均為18.5天（17.5～19.5天）。所用地高辛標記的EGF、EGFr基因cDNA探針進行的原位雜交陽性結果為藍紫色細顆粒，分布于細胞漿或少量的胞核內。正常皮膚內無明顯的陽性細胞。傷后4天，EGFr基因在創面內有明顯的表達，主要分布在創面內的成纖維細胞胞漿和創緣上皮基底細胞胞漿內，以及血管內皮細胞和皮膚附屬上皮細胞中，多較密集分布，表達強度為（++--+++），視野內平均陽性細胞數量為18.60±2.6；而EGF基因表達相對較弱，主要分布在創面淺層，陽性細胞呈稀疏分布，表達強度為（+），視野內平均陽性細胞數量為9.50±1.6。傷后10天， EGF基因在創面內表達較傷后4天增強，除分布在創面淺層的成纖維細胞胞漿和創緣上皮基底細胞胞漿內以外，尚可見分布在血管內皮細胞和皮膚附屬上皮細胞中，創面的中層和深層也可見有表達，多較密集分布，表達強度為（+++），視野內平均陽性細胞數量為23.40±3.1；而EGFr基因表達較傷后4天減弱，分布范圍減小，主要分布在創面淺層，表達強度為（+--++），視野內平均陽性細胞數量為11.50±1.3。傷后16天，EGF、EGFr基因在創面內表達的強度較傷后10天均減弱。EGF表達強度接近傷后4天的水平，僅限于在臨近愈合上皮的淺層和創面的淺層，分布在成纖維細胞胞漿，表達強度近（+）左右，視野內平均陽性細胞數量為10.45±1.2；傷后16天，EGFr基因表達已基本陰性，視野內平均陽性細胞數量為2.3±0.6。

統計學分析，傷后10天EGF基因表達較傷后4天和傷后16天明顯增強，P<0.05；傷后4天和16天比較無明顯差別，P>0.05；傷后4天EGFr基因表達較傷后10天增強，P<0.05；而傷后10天EGFr基因表達又較傷后16天明顯增強，P<0.05。

3 討論

創面愈合是機體對外來損傷刺激而引起的一系列信號反應，其最終達到對損傷的修復，其中包括組織細胞的遷移增殖、肉芽組織的形成、細胞外基質沉積、再上皮化等過程。在創傷修復中，許多種生長因子及其相關基因發揮作用，調節和控制了其發展變化和結果[4]；在這些生長因子中，EGF和EGFr是很重要的生物分子，各種刺激引起EGF、EGFr基因表達后，組織中EGF、EGFr增多，促進細胞分裂增殖，加快創面愈合[5]。EGF通過與EGFr結合發揮作用，而EGFr也是體內許多生長因子的共同作用途徑，對介導多種生長因子的作用起很重要的調節作用，EGF可以誘導皮膚干細胞快速定向分化，促進損傷皮膚再生[6]。

本研究表明：在人的中厚斷層供皮區創面愈合過程中，EGFr基因在傷后4天、EGF基因在傷后10天均有明顯的表達，EGFr基因表達為由強到弱，傷后4天表達強度大于傷后10天，傷后10天表達強度大于傷后16天；EGF基因表達為由弱到強，再由強到弱，EGF基因表達傷后10天時較傷后4天和傷后16天明顯增強；傷后4天和16天比較無明顯差別。筆者知道：創面愈合過程中傷后4天，創緣和創基增殖雖不明顯，而此時EGFr基因表達可能有助于細胞EGFr蛋白的合成，細胞高含量的敏感EGFr又有助于細胞結合EGF蛋白，發揮EGF生物效應。從時相上看，EGFr基因早于EGF基因的高表達更體現了組織細胞在為明顯的宏觀修復做好生理和生化方面的準備。傷后10天正是細胞增殖組織修復的旺盛時期，這與EGF、EGFr基因的高強度表達也相一致；本組斷層供皮區創面愈合時間為18.5天，傷后16天，創面已大體愈合，創面基本上皮化，此時組織內細胞雖仍有增殖，但EGF、EGFr基因表達已明顯減弱，創傷修復調控已發生很大變化。這種機體內在的EGF、EGFr基因變化可能是皮膚組織修復“接觸性抑制”和避免過度增生的機制之一，可以看出有很強的生理意義。從表達的細胞可看出EGF、EGFr基因多表達在創緣和創基的成纖維細胞、血管內皮細胞、皮膚附屬上皮細胞，這些部位的細胞EGF、EGFr基因高表達就可以使局部產生更多的EGF、EGFr蛋白，這樣就有助于組織的修復。有人報道，將EGF和水凝膠一起做成制劑，利用水凝膠緩慢釋放特性延長EGF藥效，可以達到促進創面修復的作用[7]；還有人將骨髓間充質干細胞與EGF一起制成微囊，應用于人工皮膚中觀察對創面愈合的影響，發現可以取得更有效的修復效果[8]。筆者認為：在創面愈合過程中，內源性EGF、EGFr基因的表達活化，增加了組織中EGF、EGFr蛋白的含量，在促進和介導多種生長因子作用方面都會有很重要的作用。采取合理的措施，通過外在干預和內部作用使EGF、EGFr基因和蛋白表達處于合理的狀態，對加快創面愈合會有很大的積極意義。

[參考文獻]

[1]谷廷敏，牛星燾，陳東明.創面愈合過程中EGFr基因表達的研究[J].中國組織化學與細胞化學雜志，1996，5（2）：206-208.

[2]谷廷敏，牛星燾，陳東明.創面愈合過程中EGF基因表達的研究[J].中國修復重建外科雜志，1996，10（3）：133-135.

[3]谷廷敏，谷陽，隋志甫.燒傷創面內表皮生長因子、表皮生長因子受體、C-myc三種基因表達變化的臨床觀察[J].中國實驗診斷學，2010，14（9）：1431-1433.

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[收稿日期]2012-07-02[修回日期]2012-08-21

編輯/張惠娟