巧用六穴點滴板

摘 要：高中生物實驗要用到幾種重要的染色劑。而染色劑具有用量少，價格相對昂貴，有些易氧化，需現配現用等特點。在教學實踐中巧用六穴點滴板，既巧妙地把它作為現配試劑的微小容器，又把它作為集解離、漂洗、染色為一體的多功能器皿。具有用藥節省、使用方便、容易清洗等優點。

關鍵詞：六穴點滴板；應用

人教版高中生物必修1集中了高中生物近60%的實驗教學內容。其中至少有兩個以上實驗要用到幾種重要的染色劑。如“觀察DNA和RNA在細胞中的分布”要用到甲基綠和吡羅紅染色劑，而且使用時需現配現用。另外甲基綠價格也不便宜，我校買到的市售價格是171元/克。又如“觀察根尖分生組織細胞的有絲分裂”要對根尖進行解離、漂洗、染色等環節，使用的實驗器皿較多，步驟較繁瑣。根據染色劑價格相對昂貴，在實驗操作中的用量少，有些需現配現用等特點。我們在實驗儀器、試劑的使用上進行了大膽的改進和創新，巧妙地運用了六穴點滴板，使它既可作為現配試劑的微小容器，又可作為解離、漂洗、染色的多功能器皿，一板多用，一板多能。現把我們的使用經驗與大家共同分享，望能拋磚引玉。

1 六穴點滴板在“觀察DNA和RNA在細胞中的分布”中的應用

人教版高中生物必修1“觀察DNA和RNA在細胞中的分布”實驗中用到兩種染色劑，分別是甲基綠和吡羅紅。由于此染色劑需現配現用，價格相對昂貴，為了能達到“用多少，配多少”的目的，我們在配制和使用上做了思考和改進。

1.1 染色劑A液與B液的分別配制

①染色劑A液的兩種配制方法

方法一：取吡羅紅甲基綠粉1g，加入到100mL蒸餾水中溶解，然后用濾紙過濾，將濾液放入棕色瓶中備用。

方法二：取甲基綠2g溶于98mL蒸餾水中，取吡羅紅G5g溶于95mL蒸餾水中。取6mL甲基綠溶液和2mL吡羅紅溶液加入到16mL蒸餾水中，即為A液，放入棕色瓶中備用。

根據以上配制比例，各校可按一個年段的教學班數及學生數，計算好染色劑的取用量，避免浪費。如我校高一段有16個教學班，每班分50～56組，兩張實驗桌合并一橫排，故每四個同學可共用一套A、B染色劑分裝的試劑瓶。染色劑A液每瓶15～20mL即可。因此，取甲基綠1.2g，加蒸餾水定容至60mL；取吡羅紅G1.0g加蒸餾水定容至20mL；接著把60mL甲基綠溶液和20mL吡羅紅溶液加入到160mL蒸餾水中，即為總容積為240mL的A液，再分裝成14瓶至規格為30mL的棕色滴瓶中備用。根據經驗此量已滿足于一個教學班一次的使用量，并不造成多余浪費。

②染色劑B液的配制

B液是一種緩沖液，由乙酸鈉和乙酸混合而成。先取乙酸鈉16.4g，用蒸餾水溶解至1000mL備用；再取乙酸12mL，用蒸餾水稀釋至1000mL備用。取配好的乙酸鈉溶液30mL和稀釋的乙酸20mL，加蒸餾水50mL，配成pH為4.8的B液。

1.2 吡羅紅甲基綠染色劑的配制

由于吡羅紅甲基綠染色劑是由A液、B液混合配制而成的。取A液20mL和B液80mL混合，即吡羅紅甲基綠染色劑。故A液與B液配制的體積比是1：4，使用時現配現用。為了節省染色劑的使用量，避免過期作廢，減少不必要的浪費。因此，這一步驟我們在實驗課中實際上是在教師的指導下由學生自己完成的。

方法是：

首先，將配好的A液和B液分裝于兩個棕色滴瓶中，貼好標簽備用。

第二步：用同一規格大小的膠頭滴管將吡羅紅甲基綠染色劑A液滴1滴于六穴點滴板中的任一穴中，并在同一穴中滴入B液4滴（即按體積比A液：B液=1：4的比例配制），用第三支干凈的膠頭滴管使兩種染色劑充分混合，吡羅紅甲基綠染色劑即配制完畢。并向學生強調注意滴管專用，不可混用。

第三步：洋蔥鱗片葉內表皮的制片、水解、沖洗等步驟完成后，用第三支膠頭滴管從穴中取新配制的吡羅紅甲基綠染色劑2滴對標本進行染色，染色5分鐘后即可蓋片觀察。

1.3 優點

使用六穴點滴板作為染色劑的配制容器，按配制的體積比例進行現配現用，具有用藥節省、使用方便等優點，不失為一種好方法。這是我們在教學實踐中產生的智慧和經驗，僅供參考。

２ 六穴點滴板在“觀察根尖分生組織細胞有絲分裂”中的應用

觀察根尖分生組織細胞的有絲分裂是必修1中的一個分組實驗，其中解離、漂洗、染色要用到多個培養皿，存在幾點不足：①培養皿底面積寬，解離和染色需倒入較多的藥液，一個年段一個分組實驗時間可能持續３～５天，液體易蒸發；②玻璃器皿粘上染液后難于清洗；③玻璃器皿使用個數多容易損壞。若能集中到一個儀器上使用，就可克服以上缺點。六穴點滴板是一種很好的替代器皿，具有用藥節省、根尖容易夾取、操作方便、容易清洗等優點。

2.1 使用方法

第一步：在六穴點滴板的首穴滴入已配制好的解離液４～５滴，這一穴就作為根尖解離的容器。接著剪取已培養好的洋蔥根尖2～3毫米置于這一穴中解離3～５分鐘。

第二步：利用解離等待時間，分別往第2、3、4、5穴中滴入5～6滴清水。待根尖酥軟后，用鑷子夾取或解剖針移動根尖依次放入第2、3、4、5穴中漂洗十分鐘。

第三步：漂洗10分鐘后，往最后一穴中滴入質量濃度為0.02g/mL龍膽紫溶液2～3滴。再把漂洗后的根尖移入0.02g/mL的龍膽紫溶液一穴中進行染色3～5分鐘。染色后再制片進行觀察。

2.2 優點

在這個實驗中，六穴點滴板集解離、漂洗、染色等功能于一體，既節省試劑的使用容量，又能大大減少實驗儀器的使用數量，從而減少儀器的損耗。同時還具有根尖容易夾取，操作方便，容易清洗等優點。

2.3 改進展望

六穴點滴板若能加以改進效果更好。如把解離與染色的穴做成口徑2cm，穴深0.5cm，漂洗的穴做成口徑2.5cm，穴深0.5cm，并在恰當位置標注解離、漂洗1、漂洗2、漂洗3、漂洗4、染色等字樣。改進后再加以批量生產，定會受到廣大師生的歡迎。

在教學實踐中，我們不斷摸索、總結、創新，巧妙地把六穴點滴板應用于生物實驗教學中，既降低了實驗成本，又方便了操作步驟，收到了良好的教學效果。