紅花遺傳毒性的研究

劉慧娜吳文斌張永立

紅花遺傳毒性的研究

劉慧娜1吳文斌2張永立1

目的評(píng)價(jià)紅花的急性毒性和遺傳毒性，為臨床提供毒理學(xué)依據(jù)。方法Ames 試驗(yàn)：設(shè)9、4.5、2.25、1.125、0.5625g/血?jiǎng)┝?，觀察加或不加S 9 混合物對(duì)TA 97、TA 98、TA 100、TA 102 菌株的影響。小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)：設(shè)18、9、4.5 g/kg 三個(gè)劑量組，2 次灌胃后，24 h 制片，鏡檢。結(jié)果Ames試驗(yàn)為陰性。結(jié)論紅花毒性較低，本次試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)有遺傳毒性。

紅花；遺傳毒性；急性毒性

紅花為菊科植物紅花的筒狀花冠，主產(chǎn)于河南、湖北等地。本品性味辛，溫，具有活血通經(jīng)，散瘀止痛的功效，可用于經(jīng)閉，痛經(jīng)，惡露不行，癥瘕痞塊，跌撲損傷，瘡瘍腫痛[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明具有抑制心臟的作用、能減輕腦水腫，起到降壓、抗炎、鎮(zhèn)靜的功效[2]。紅花對(duì)人類是否具有遺傳毒性，目前相關(guān)報(bào)道甚少，為此我們進(jìn)行了遺傳毒性相關(guān)研究，為其臨床安全應(yīng)用提供數(shù)據(jù)。

1 材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ICR小鼠35-38g；由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2011-0016]。動(dòng)物購(gòu)入后，均飼養(yǎng)在清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，溫度控制在20～25℃，濕度控制在40-70%。動(dòng)物自由攝食、飲水，1周換1～2次墊料。

1.2主要儀器及試劑

1.2.1 Motic BA400

生物顯微鏡。

1.2.2主要試劑

紅花，產(chǎn)地河南，由河南省復(fù)康藥材有限公司提供，批號(hào)為 H2009052401。羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）批號(hào) F20090508；環(huán)磷酰胺，批號(hào)9J596A；Giemsa染液及其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 方法

2.1實(shí)驗(yàn)方法

2.1.1小鼠骨髓微核試驗(yàn)

ICR 小鼠 30只，體重 35～38g，將小鼠分為 5組，給藥組劑量分別為 4.5、9、18g/kg，陽(yáng)性對(duì)照組為環(huán)磷酰胺80mg/kg ，陰性對(duì)照組為等量生理鹽水，分2次灌胃，給藥后24 h處死小鼠，取兩側(cè)股骨骨髓材料制片、染色、鏡檢閱片，每片檢測(cè)2000 個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，計(jì)數(shù)微核數(shù)，求出各組微核率( MNF) ，并進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)[3]。

2.1.2 Ames試驗(yàn)

鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型突變菌株TA 97、TA 98、TA 100、TA 102，菌株性狀和S 9活性經(jīng)鑒定，符合要求，采用平皿摻入法，加S 9與不加S 9 進(jìn)行兩次獨(dú)立試驗(yàn)，設(shè)5個(gè)劑量，每組做3個(gè)皿。

2.2統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量數(shù)據(jù)用方差分析進(jìn)行比較。以P＜0.05為差異有顯著意義，以P＜0.01為差異有極顯著意義。

3 結(jié)果

3.1小鼠骨髓微核試驗(yàn)

紅花各劑量組的微核率與空白對(duì)照組比較，均無(wú)顯著性差異(P＞ 0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組的微核發(fā)生率明顯增加(P＜ 0.01) ，見(jiàn)表1。

表1 小鼠骨髓微核試驗(yàn)結(jié)果

3.2 Ames

試驗(yàn)各劑量組中無(wú)論加或不加S 9混合物，平均回變菌落均未超過(guò)自然回變菌落數(shù)的 2倍，反而紅花煎液對(duì)細(xì)菌有抑制生長(zhǎng)的作用。未發(fā)現(xiàn)紅花有直接或間接的致突變作用，而陽(yáng)性組平均回變菌落均超過(guò)自然回變菌落數(shù)的2倍以上。見(jiàn)表2。

表2 紅花對(duì)鼠傷寒沙門氏菌回變菌落數(shù)的影響

4 討論

現(xiàn)在遺傳學(xué)的檢測(cè)根據(jù)其檢測(cè)的遺傳學(xué)終點(diǎn)可分為 4種類型：檢測(cè)基因突變，檢測(cè)染色體畸變，檢測(cè)染色體組畸變，檢測(cè)DNA 原始損傷。本研究用小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)對(duì)紅花的遺傳毒性進(jìn)行檢測(cè)。小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)主要是對(duì)染色體結(jié)構(gòu)完整性改變進(jìn)行評(píng)估，其作為體內(nèi)遺傳毒性檢測(cè)的首選方法廣泛用于評(píng)價(jià)藥物的潛在遺傳毒性[5]。結(jié)果顯示，紅花在試驗(yàn)劑量4.5～ 18 g/kg 范圍內(nèi)，未發(fā)現(xiàn)對(duì)試驗(yàn)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞有致突變作用。Ames試驗(yàn)可對(duì)DNA堿基序列是否改變進(jìn)行評(píng)估，本試驗(yàn)各劑量組無(wú)論加或不加S9混合物，回變菌落均未超過(guò)自然回變菌落數(shù)的 2倍。相反有抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的功能，提示紅花有抑菌的功效并在體外試驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)有直接或間接致致突變作用[6]。兩種方法結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)，有利于增加檢測(cè)的敏感性與可靠性，掌握更多的遺傳損傷特性，從而更全面、準(zhǔn)確地反映受試物的遺傳毒性。綜上所述，紅花未發(fā)現(xiàn)遺傳毒性。

[1]中國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.一部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005:307.

[2]黃鏡娟.紅花的研究進(jìn)展[J].淮海醫(yī)藥，2006，24(2) :F0003-F0004.

[3]曹佳，林真，余爭(zhēng)平.微核試驗(yàn)[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2000,92-94.

[4］袁伯俊，廖明陽(yáng)，李波.藥物毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社生物醫(yī)藥出版分社,2007,293.

[5]ICH：International conference on harmonization of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use (ICH) S2(R1):Guidance on Genotoxicity Testing and Data Interpretation for Pharmaceuticals Intended for Human Use.2008.

[6]何來(lái)英,戴偉,孫明,等.紅花水提物的安全性研究[J].中國(guó)臨床保健雜志,2004,7（3）：169-172.

1 鄭州市骨科醫(yī)院，河南鄭州 450052，

2上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海浦東 201203