AEG-1與ICAM-1、MMP-2、MMP-9在胃癌組織中的表達(dá)及意義

劉凱軍，王文韜，魏 娉

（1.峰峰集團(tuán)邯鄲醫(yī)院普通外科，河北邯鄲 056002；2.河北省邯鄲市第一醫(yī)院普通外科，河北邯鄲 056002；3.河北省邯鄲市第一醫(yī)院病理科，河北邯鄲 056002）

AEG-1與ICAM-1、MMP-2、MMP-9在胃癌組織中的表達(dá)及意義

劉凱軍1，王文韜2，魏 娉3

（1.峰峰集團(tuán)邯鄲醫(yī)院普通外科，河北邯鄲 056002；2.河北省邯鄲市第一醫(yī)院普通外科，河北邯鄲 056002；3.河北省邯鄲市第一醫(yī)院病理科，河北邯鄲 056002）

目的探討星形細(xì)胞上調(diào)基因 -1（astrocyte e1evated gene-1，AEG-1）、細(xì)胞間黏附因子 -1（interce11u1ar adhesion mo1ecu1e-1，ICAM-1）和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）在胃癌組織中的表達(dá)及意義。方法對胃癌和癌旁組織標(biāo)本45例進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，檢測AEG-1與ICAM-1、MMP-2、MMP-9在2種組織中的表達(dá)。結(jié)果胃癌組織中AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9陽性表達(dá)率分別為77.8%、62.2%、73.3%、71.1%，癌旁組織中分別為26.7%、77.8%、35.6%、37.8%，AEG-1、MMP-2、MMP-9在胃癌組織中陽性表達(dá)均比癌旁組織高（P＜0.01）；而ICAM-1在胃癌組織中陽性表達(dá)率表達(dá)低于癌旁組織（P＜0.05）。相關(guān)分析顯示，AEG-1與MMP-2、MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.379 2、0.485 3，P＜0.05）；ICAM-1與MMP-2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=

胃腫瘤；星形細(xì)胞上調(diào)基因；細(xì)胞間粘附因子

星形細(xì)胞上調(diào)基因 -1（astrocyte e1evated gene-1，AEG-1）由于與多種腫瘤的發(fā)生進(jìn)展有關(guān)而成為目前研究的熱點(diǎn)。已有研究［1-3］證實(shí)，AEG-1在乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞癌、食管癌等多種惡性腫瘤組織中高表達(dá)，對腫瘤細(xì)胞的多種功能如侵襲、黏附、增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移等都具有調(diào)節(jié)作用，已成為惡性腫瘤生物治療的潛在靶點(diǎn)。但迄今關(guān)于AEG-1的作用機(jī)制還沒有完全闡明，有關(guān)AEG-1在胃癌組織中表達(dá)情況及與其他侵襲黏附相關(guān)因子關(guān)系的研究也較為罕見，推測胃癌細(xì)胞中AEG-1可能與其他侵襲黏附相關(guān)因子通過協(xié)同作用而導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展。因此，本研究檢測了AEG-1在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)，同時(shí)檢測了反映胃癌細(xì)胞侵襲黏附能力的蛋白質(zhì)細(xì)胞間黏附因子-1（interce11u1ar adhesion mo1ecu1e-1，ICAM-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix meta11oproteinase，MMP）-2、MMP-9在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)，對它們之間的關(guān)系進(jìn)行了分析，并對AEG-1在胃癌組織中的作用和臨床意義進(jìn)行了初步探討。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源：標(biāo)本取自2008年10月—2011年5月在我院手術(shù)并經(jīng)病理證實(shí)的45例胃癌患者腫瘤組織石蠟標(biāo)本，其中男性28例，女性17例，年齡31～72歲，平均（64.6±6.3）歲。術(shù)前均未接受包括放化療在內(nèi)的任何治療。術(shù)中取腫瘤組織1.0cm ×0.5cm×0.5cm，標(biāo)本以4%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片行HE染色和AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9免疫組織化學(xué)染色（SP法）。

1.2 免疫組織化學(xué)染色測定AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)：兔抗人AEG-1多克隆抗體購自英國Abcam公司，兔抗人ICAM-1、MMP-2、MMP-9多克隆抗體及免疫組織化學(xué)試劑盒均購自美國Santa Cruz公司，采用SP法分別對腫瘤組織和癌旁組織（距腫瘤邊緣≥3cm）進(jìn)行各指標(biāo)的免疫組織化學(xué)染色，染色步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。用PBS代替一抗作陰性對照，已知陽性切片作陽性對照。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定：由2位病理學(xué)醫(yī)師分別閱片，雙盲法進(jìn)行結(jié)果判斷。每張石蠟切片隨機(jī)取5個高倍視野（ ×400），每視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9以細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色著染為染色陽性，按腫瘤細(xì)胞著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞率分別進(jìn)行記分。按著色強(qiáng)度記分，無著色（0分），淡黃色（1分），黃色（2分），棕黃色（3分）。按腫瘤細(xì)胞陽性細(xì)胞率記分，陽性細(xì)胞≤5%為0分，6% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。2種記分標(biāo)準(zhǔn)相乘，0～1分記為陰性（ -），2～3分記為弱陽性（+），4～7分陽性（++），≥8分強(qiáng)陽性（+++）。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析。結(jié)果以等級資料表示，AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9在胃癌和癌旁組織中的比較采用秩和檢驗(yàn)，各蛋白質(zhì)之間的相關(guān)采用Spearman相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌和癌旁組織中 AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)：45例胃癌組織中AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9陽性表達(dá)率分別為77.8%、62.2%、73.3%、71.1%；癌旁組織分別為26.7%、77.8%、35.6%、37.8%。AEG-1、MMP-2、MMP-9在胃癌組織中的表達(dá)均較癌旁組織增強(qiáng)（P＜0.01）；而ICAM-1在胃癌組織中陽性表達(dá)率低于癌旁組織（P＜0.05）。見表1。胃癌組織AEG-1、ICAM-1、MMP2、MMP-2陽性表達(dá)，見圖1。

表1 胃癌和癌旁組織AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表達(dá)比較（n=45，例數(shù)，%）

圖1 胃癌組織AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表達(dá)（SP×200）

2.2 胃癌和癌旁組織中 AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)的關(guān)系：胃癌組織中4種因子之間表達(dá)關(guān)系經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析顯示AEG-1與MMP-2、MMP-9表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)性（rs=0.379，0.485，P＜0.05），ICAM-1與MMP-2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.297，P＜0.05）；AEG-1與ICAM-1、ICAM-1與MMP-9之間表達(dá)無相關(guān)性（rs=0.214、0.186，P＞0.05）。

3 討 論

胃癌是我國發(fā)病率最高的惡性腫瘤，該病由于沒有特異性臨床表現(xiàn)，很難早期發(fā)現(xiàn)，患者就診時(shí)多已處于進(jìn)展期。我國的進(jìn)展期胃癌占總患者數(shù)的90%以上。進(jìn)展期胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)、預(yù)后差，而以手術(shù)、化療為主的綜合治療措施目前效果并不理想。因此，靶向治療將是今后胃癌治療的方向。尋找新的胃癌靶分子已成為胃癌研究的熱點(diǎn)。AEG-1是近年來發(fā)現(xiàn)的與惡性腫瘤關(guān)系密切的一個新型腫瘤相關(guān)基因，該基因具有原癌基因的特性，在腫瘤細(xì)胞中作用廣泛，AEG-1在多種腫瘤性疾病中均存在過表達(dá)，是反映腫瘤惡性程度的重要指標(biāo)［1-3］。Song等［4］研究發(fā)現(xiàn)AEG-1陽性的子宮內(nèi)膜癌預(yù)后較差，可作為預(yù)后因子對子宮內(nèi)膜癌預(yù)后進(jìn)行預(yù)測分析。本研究結(jié)果顯示，AEG-1在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，也說明AEG-1與胃癌關(guān)系密切，進(jìn)一步研究其在胃癌中的功能和作用有可能對胃癌的綜合診治和評估有重要作用。

AEG-1可以通過多種途徑促進(jìn)腫瘤的發(fā)生進(jìn)展。研究［5］顯示，AEG-1的啟動子缺少TATA盒，但含有多個Sp1位點(diǎn)并富含GC序列，可發(fā)揮多種功能。AEG-1可影響磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B、Wnt/β連環(huán)蛋白、核因子-κB、絲裂原激活蛋白激酶等多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的功能狀態(tài)，從而對腫瘤細(xì)胞的侵襲、黏附、增殖、凋亡產(chǎn)生影響。Emadad等［6］的研究表明，AEG-1可以通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt通路的功能而使細(xì)胞侵襲性增強(qiáng)，從而發(fā)生癌變。ICAM-1在胃癌中表達(dá)降低，為一種糖蛋白，腫瘤細(xì)胞表面ICAM-1表達(dá)增高可以促進(jìn)炎性因子對腫瘤細(xì)胞的殺傷，在腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用［7］，本研究結(jié)果也證實(shí)ICAM-1在胃癌中表達(dá)低于癌旁組織。但也有研究［8］認(rèn)為，腫瘤組織ICAM-1表達(dá)增高可以促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。MMPs可以降解細(xì)胞外基質(zhì)中的蛋白成分，破壞防止腫瘤細(xì)胞侵襲的屏障，從而造成腫瘤細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移［9］。MMP-2、MMP-9為MMPs家族中的重要成員。有研究［10］發(fā)現(xiàn)，AEG-1可以通過增強(qiáng)MMP-9的表達(dá)而促進(jìn)膠質(zhì)瘤的侵襲進(jìn)展。本研究顯示，AEG-1與MMP-2、MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)，說明AEG-1可能通過調(diào)控MMP-2、MMP-9表達(dá)而發(fā)揮促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲、黏附的作用。但本研究并未發(fā)現(xiàn)AEG-1與ICAM-1之間有明顯關(guān)系，我們推測這可能是由于影響實(shí)體腫瘤的黏附、侵襲因素十分復(fù)雜，AEG-1只能調(diào)控部分胃癌侵襲相關(guān)因子，且AEG-1、ICAM-1所起的調(diào)控作用位于侵襲黏附過程的不同水平，所以相關(guān)性并不明顯。

本研究初步證實(shí)了AEG-1過表達(dá)存在于胃癌組織，AEG-1可能通過影響部分MMPs的活性表達(dá)而促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲、黏附。但我們也發(fā)現(xiàn)AEG-1僅與部分侵襲相關(guān)蛋白有關(guān)，說明腫瘤影響腫瘤細(xì)胞侵襲功能的網(wǎng)絡(luò)化調(diào)節(jié)極其復(fù)雜，進(jìn)一步明確胃癌中AEG-1與其他侵襲黏附相關(guān)因子的關(guān)系并研究其作用機(jī)制，對開展針對AEG-1的胃癌靶向治療具有重要意義。

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（本文編輯：劉斯靜）

R735.2

B

1007-3205（2011）04-0441-03

2011-10-18；

2011-12-05

劉凱軍（1973-），男，河北邯鄲人，峰峰集團(tuán)邯鄲醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事消化道腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.04.026

-0.297 6，P＜0.05）。結(jié)論AEG-1在胃癌組織中過表達(dá)，其可能通過調(diào)節(jié)MMP-2、MMP-9表達(dá)而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的侵襲黏附能力，促進(jìn)胃癌的侵襲進(jìn)展。