HPLC法測定排毒養顏茶中大黃素、大黃酚的含量

王永泉 張建文▲ 徐德麗 董軍梅

1.山東省濰坊市中醫院，山東濰坊 261041；2.山東省濰坊市婦幼保健院，山東濰坊 261011

排毒養顏茶處方是本院應用多年，療效確切的協定處方，根據臨床及患者需求，本院制劑中心將對其進行簡單開發，制成袋泡茶，便于患者攜帶服用，該制劑是由大黃、土茯苓、草決明、西洋參、紅參、荷葉、蘆薈等中藥組成，具有潤腸通便，排毒養顏，保肝利膽，降脂降壓的功效，用于便秘、面部色素多、青春痘、高脂血癥、高血壓、口腔異味、腹痛腹脹、尿頻尿急等。本文采用高效液相色譜法對排毒養顏茶中的大黃素、大黃酚建立了含量測定方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

電子分析天平（上海精密科學儀器有限公司）；恒溫水浴鍋（江蘇金壇市中大儀器廠）；高效液相色譜儀（Agilent公司）；ANASTAR液相色譜工作站；十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（KromosilC18 5 μm 250×4.6 mm）。

1.2 試藥

供試品：排毒養顏茶（批號：20111214，20111215，20111216），由濰坊市中醫院制劑中心提供；大黃素對照品（批號：110756-200110），大黃酚對照品（批號：110796-201118），購于中國藥品生物制品檢定所；原藥材購于山東海王中藥飲片有限公司；甲醇、乙腈均為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

參考《中國藥典》2010版一部大黃含量測定項下的條件，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：甲醇-0.1%磷酸（77∶23）；流速為 1.0 mL/min； 檢測波長為 254 nm[1]。

2.2 對照品溶液的制備

取大黃素、大黃酚對照品適量，加甲醇制成每1 mL含大黃素21.8μg、大黃酚29.5μg的混合溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取排毒養顏茶，研細，稱取1 g，加入甲醇25 mL，稱重，加熱回流提取1 h，放冷，稱重，補充甲醇至原重，搖勻過濾，取濾液10 mL，揮去溶劑，加入 8%鹽酸10 mL，超聲處理2 min，加入氯仿10 mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗，取氯仿層（酸液用氯仿再提取3次，每次10 mL，合并氯仿），減壓回收氯仿至干，加甲醇溶解，定容至10 mL。過濾，作為供試液。

2.4 陰性對照溶液的制備

取處方量，以相同工藝制備陰性對照（缺大黃）適量，依2.3項目下方法操作即得陰性對照液。

2.5 系統適應性試驗與專屬性試驗

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖[2-6]，結果為：大黃素、大黃酚對照品和供試品色譜圖中大黃素、大黃酚峰與其他組分峰基線分離，分離度大于1.5，保留時間分別為9.701 min、13.139 min；陰性對照色譜圖中在與大黃素、大黃酚對照品中相對應的保留時間處無色譜峰出現，表明其他組分對大黃素、大黃酚的測定無干擾。見圖1～3。

2.6 線性關系考察

精密稱取大黃素對照品5.60 mg置25 mL容量瓶中，大黃酚對照品5.46 mg置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，分別精密吸取對照品溶液2 mL置于同一10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度（濃度分別為44.80μg/mL、43.68μg/mL），以此為母液，分別精密吸取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8 mL置1 mL量瓶中，分別用甲醇稀釋至刻度，搖勻，另分別取對照品溶液 1 mL，各取10μL進樣，按2.1項色譜條件測定，以峰面積對進樣濃度進行回歸分析，結果大黃素在8.96～44.8μg范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為：Y=12 572 X-89 104.8，R=0.998 5；大黃酚在 8.736～43.68 μg范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為：Y=10 167X+617，R=9 996。

2.7 精密度試驗

精密吸取對照品溶液10μL，連續進樣6次，測定大黃素和大黃酚峰面積，結果RSD分別為1.30%、0.95%。

2.8 重復性試驗

取本品（批號：20111214）5 份，各約 1 g，精密稱定，分別按2.3供試品溶液的制備項目下方法制備供試品溶液，測定，結果大黃素、大黃酚的RSD分別為1.34%、1.07%。

2.9 加樣回收率試驗

取本品（批號：20111215，大黃素含量：0.467 0 mg/g，大黃酚含量：0.5267）研細，取約0.5 g，精密稱定，共稱取 6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入大黃素對照品溶液（224μg/mL）、大黃酚對照品溶液（218.4μg/mL）1 mL，按2.3供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，如法測定大黃素、大黃酚的含量，計算回收率，大黃素的平均回收率為99.66%，RSD為1.19%；大黃酚的平均回收率為98.51%，RSD為2.77%。

2.10 供試品含量測定

取三批，每批樣品取2份，分別按上述方法制得供試品溶液按確定的方法測定樣品中大黃素、大黃酚的含量，結果見表1。

3 討論

參考藥典，選擇流動相比例為甲醇-0.1%磷酸（85∶15），檢測波長為254 nm，流速為1.0 mL/min，檢測發現樣品峰稍有拖尾，改變流動相極性至甲醇-0.1%磷酸（80∶20）和甲醇-0.1%磷酸（77∶23），檢測發現前者拖尾現象消失，分離度略有改善，而后者分離度良好亦無拖尾，所以最終確定實驗所用液相條件。

表1 樣品的測定結果

對于供試品的處理方法，采用甲醇超聲-0.8%鹽酸酸化-氯仿萃取-甲醇定容的方法和甲醇加熱回流-0.8%鹽酸酸化-氯仿萃取-甲醇定容的方法進行處理，檢測發現后者的測得含量要明顯高于前者，表明甲醇加熱回流提取的處理方法較好，所以采用甲醇加熱回流-0.8%鹽酸酸化-氯仿萃取-甲醇定容的樣品處理方法。

采用HPLC法測定排毒養顏茶中大黃素和大黃酚的含量，方法簡便、準確、重現性好，可以作為排毒養顏茶質量控制的方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2]何素琴，歐陽吉德，肖琳.HPLC法測定膽石通膠囊中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚的含量[J].西北藥學雜志，2011，26（3）：180-182.

[3]陳興田，黃金華.HPLC法測定導赤丸中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量[J].中國醫藥指南，2011，9（27）：179-180.

[4]金鑫，曲佳，李時放.HPLC法測定麻仁膠囊中大黃素及大黃酚的含量[J].天津藥學，2011，23（4）：17-19.

[5]謝浙裕，柴軍，粟建鵬.高效液相色譜法測定潰平寧顆粒中大黃素和大黃酚含量[J].海峽藥學，2010，22（10）：58-60.

[6]陳玉敏，曹江，邢俊波.HPLC法測定爛積丸中大黃素與大黃酚的含量[J].中國藥事，2010，24（1）：78-80.