MCM5和Ki-67在前列腺癌組織中的表達及意義

劉馨蓮，殷 舞

(1成都醫學院病理學教研室，成都610083;2廣西壯族自治區人民醫院)

微小染色體維持蛋白(MCMs)是一組與DNA復制和細胞增生密切相關的蛋白家族［1］，其能與復制子結合，使DNA復制成為可能，是DNA復制啟動和延伸的必需因子之一，屬于一種與DNA復制有關的解鏈酶［2］。細胞增殖核抗原(Ki-67)是目前公認的評價細胞增殖狀態的指標，其在病理診斷中應用最為廣泛。2005年9月～2009年9月，我們觀察了前列腺癌組織中MCM5和Ki-67的表達，旨在進一步探討前列腺癌的發生機制。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇廣西壯族自治區人民醫院病理科前列腺癌組織標本50份(腫瘤組)，患者年齡52～86(73±8.4)歲，均經病理檢查確診，其中高分化12例、中分化15例、低分化23例;Jewett分期為A期8例、B期16例、C期17例、D期9例。另選取15份良性前列腺增生組織作為對照(增生組)。兩組患者一般資料無統計學差異。主要試劑:MCM5單克隆抗體(NeomakersFremont公司)，鼠抗人Ki-67單克隆抗體與S-P試劑盒(北京中杉生物技術開發公司)，DAB試劑盒(福州邁新生物技術開發公司)。

1.2 MCM5和Ki-67表達檢測 標本均經10%甲醛固定，普通石蠟包埋，4μm連續切片。采用免疫組化SP法檢測MCM5和Ki-67表達:DAB顯色。石蠟切片脫蠟水化后，微波抗原修復，過氧化酶阻斷劑滅活內源性過氧化物酶活性，羊血清工作液封閉，滴加一抗4℃過夜，滴加生物素標記的二抗，滴加鏈親和素—過氧化物酶溶液。DAB顯色，蘇木精復染。用已知宮頸鱗狀細胞癌組織切片為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。結果判斷標準:MCM5和Ki-67的陽性信號均定位于細胞核，呈棕黃色顆粒。以標記指數(LI)表示陽性表達情況:選取組織結構良好、背景清晰的不重復高倍視野10個(其中包括陽性信號集中區及稀疏區)，計算每高倍視野下100個腫瘤細胞中的陽性細胞數，取10個視野的平均值，即為LI。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。計量數據采用±s表示，進行One-way ANOVA分析或組間均數差異t檢驗，Bivariate Correlation行相關性分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 MCM5、Ki-67表達情況 腫瘤組及增生組MCM5 的 LI分別為 21.36 ±7.50、2.05 ±1.18，P ＜0.05;Ki-67 的 LI分別為13.56 ±6.62、1.05 ±0.53，P ＜0.05。

2.2 MCM5、Ki-67表達與前列腺癌臨床病理參數的關系 見表1。

表1 MCM 5、K i-67表達與前列腺癌臨床病理參數的關系(±s)

表1 MCM 5、K i-67表達與前列腺癌臨床病理參數的關系(±s)

臨床病理參數 n MCM5(LI) Ki-67(LI) P值病理分級高分化 12 13.67 ±1.83 6.75 ±1.54中分化 15 16.40±3.29 9.20±1.37 ＜0.05低分化 23 28.61 ±3.58 19.96 ±3.77臨床分期A 期 8 12.88 ±1.64 6.13 ±1.46 B 期 16 15.50 ±2.61 8.63 ±1.09 ＜0 17 26.06 ±4.12 17.39 ±4.26 9 30.44 ±3.91 22.25 ±3.92.05 C 期D期

2.3 相關性分析 前列腺癌中MCM5與Ki-67表達呈正相關(r=0.954，P ＜0.01)。

3 討論

細胞增殖失控、成熟受阻是腫瘤發生的重要機制之一。評價腫瘤細胞的增殖狀態對研究腫瘤的生物學行為及提示預后有重要意義。

MCM蛋白是一類存在于真核生物中高度保守的蛋白質，其表達水平隨細胞周期的進展而變化。G1早期，其同復制起始點識別復合物的結合被認為是DNA復制合成的開始，其表達水平在G1/S轉換點達到峰值，當細胞進入G0期或分化、衰老時，MCM表達水平迅速下降甚至不表達［3］。說明MCM蛋白與細胞周期密不可分，是啟動真核細胞DNA復制、調控細胞由G1進入S期的關鍵蛋白，可作為細胞增殖早期的特殊標記物［4］。MCM5是MCM蛋白復合物成分之一，其表達穩定，可直接反映MCM蛋白的表達水平，是判斷細胞增殖的可靠標志物［5］。Murphy等［6］檢測宮頸標本時發現，正常宮頸鱗狀上皮中幾乎沒有MCM5表達，而在宮頸上皮內瘤變標本及宮頸鱗癌標本中MCM5的表達卻逐漸增強，提示MCM5能較好反映腫瘤細胞的增殖特性，對腫瘤的診斷有一定意義。

Ki-67是目前在病理診斷中應用最為廣泛的細胞增殖標記。研究顯示，Ki-67在細胞的G0期不表達，到G1的中、后期出現表達，S期和G2期表達逐漸增強，在有絲分裂期達到高峰，分裂后迅速降解，半衰期為1 h左右。隨著上皮細胞損傷程度增加，Ki-67表達率也明顯升高［7］，但與MCM5相比，部分處于G1早、中期的增殖細胞不表達Ki-67，因此由Ki-67的表達水平估計的腫瘤的生長分數可能會低于實際的生長分數［1］。本研究腫瘤組MCM5、Ki-67表達均明顯高于增生組，MCM5、Ki-67陽性表達與前列腺癌病理分級、臨床分期均有相關性，前列腺癌組織中MCM5與Ki-67陽性表達呈正相關，提示MCM5、Ki-67表達水平與前列腺癌的發生、發展密切相關。

總之，MCM5和Ki-67在前列腺腺細胞增殖過程中起關鍵作用;MCM5較Ki-67更能反映癌細胞的增殖情況。MCM5蛋白表達水平可作為前列腺癌的輔助診斷指標并為判斷預后提供依據。

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［4］Maiorano D，Lutzmann M，Méchali M.MCM proteins and DNA replication［J］.Current Opin Cell Bio，2006，18(2):130-136.

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