萊菔子中芥子堿硫氰酸鹽提取工藝的優化

楊映霞 孟多佳 孫玉濱 于偉華 奚東玲

萊菔子為十字花科植物蘿卜Raphanus sativus L的干燥成熟種子。其主要功效是消食除脹、降氣化痰［1］。萊菔子中主含萊菔素(Raphanin)，芥子堿(Sinapine)，芥酸(erucicacia)，亞油酸，植物甾醇等。其中，芥子堿是其降壓作用的活性成分之一。實驗表明，萊菔子中芥子堿多以芥子堿硫氰酸鹽(Sinapinethiocyanate)的形式存在［2］。因此，測定芥子堿硫氰酸鹽的含量對于控制藥材質量和制劑的質量標準制定具有較重要的意義。筆者在參考有關文獻［3-4］的基礎上，采用正交設計優化最佳提取工藝。

1 材料與方法

1.1 一般材料 島津10ATvp高效液相色譜系統(二元泵 柱溫箱AT-330，檢測器SPD-10ATvp，浙江大學N-2000色譜工作站LC-10ATvp)、超聲波清洗器(型號KH-250，功率250 W，工作頻率50 Hz，昆山禾創超生儀器有限公司)。

1.2 試藥 萊菔子藥材購自長春市藥材公司，經鑒定為正品;芥子堿硫氰酸鹽對照品(111702-200501中國生物制品所鑒定所);水為哇哈哈純凈水;乙腈為色譜純;其他均為分析純。

表1 正交試驗因素水平

1.3 正交試驗 以芥子堿硫氰酸鹽作為考察指標，對萊菔子提取和干燥過程中影響較大的加水量(A)溶劑PH(B)干燥溫度(C)提取次數(D)4個因素進行考察，每個因素設3個水平，采用L9(34)正交設計。(表1)

1.4 芥子堿硫氰酸鹽含量測定［4］

1.4.1 色譜條件 色譜柱為ZORBAX XDB C18(4.6 mm×250.0 mm，5 μm);乙腈-0.1%磷酸溶液(每100 ml加十二烷基磺酸鈉0.1 g)(32∶68)為流動相;檢測波長326 nm;柱溫30℃;理論塔板數不低于5000;進樣量5 μl。

1.4.2 對照品溶液制備 取芥子堿硫氰酸鹽對照品，精密稱定，加流動相制成每1 ml含10.08 μg的溶液。

1.4.3 供試品溶液制備 取正交試驗樣品6 g，研細，取0.5008 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱定重量，超生處理30 min，放冷;用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精密量取續濾液5 ml，蒸干，殘渣加流動相溶解并轉移至25 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液;即得。

1.4.4 標準曲線的繪制 分別吸取濃度為10.08 ug/ml的對照品溶液2、5、7、10、12 ul注入液相色譜儀測定，記錄色譜圖，測定其峰面積，以峰面積為縱坐標(Y)，芥子堿硫氰酸鹽濃度為橫坐標(X)，繪制標準曲線，并計算回歸方程:Y=12546 X+361.49，r=0.9999 。結果表明，在0.02 ～0.12 ng/ml時，芥子堿硫氰酸鹽濃度與峰面積有良好的線性關系。

2 結果

2.1 正交試驗結果 按正交設計L9(34)提取藥材，合并濾液，濃縮醇沉。減壓干燥，粉碎，得正交試驗樣品粉末，按“1.4.4”測定樣品中芥子堿硫氰酸鹽的含量，結果見表2。由表2可知，各因素對芥子堿硫氰酸鹽提取影響大小為B＞C＞D＞A最佳提取工藝為B2C1D2A3即取藥材加溶劑pH值為5.5，浸膏干燥溫度60℃，提取3次;藥材為10倍量水，干膏粉碎即得。方差分析表明，B、C因素對芥子堿硫氰酸鹽影響顯著(P＜0.05)，D、A因素在考察范圍內影響較小，無顯著性影響，考慮到生產成本問題優選工藝為B2C1D2A1。

2.2 驗證實驗 由于優選的工藝未包括在正交設計表的9次試驗中，故對其進行驗證實驗。用同一批藥材按照前述的提取干燥過程，按B2C1D2A1工藝條件進行試驗3次，結果見表3，由表3可知此工藝基本穩定可行。

表2 正交試驗結果

表3 驗證試驗結果

3 討論

3.1 芥子堿是萊菔子中降壓作用的有效成分，在許多以萊菔子為君藥的中藥制劑中，均采用芥子堿硫氰酸鹽作為主要考察指標，同時對控制藥材質量也有一定的意義。故該試驗也選用芥子堿硫氰酸鹽作為提取工藝篩選的優化指標。

3.2 在試驗中發現芥子堿硫氰酸鹽在室溫光照條件下，穩定性較差，易被破壞。因此，應盡可能的在短時間內測定，以免試劑分解影響結果。

3.3 本實驗采用水作為生產提取溶劑，優化提取工藝，價格便宜，方法簡單，操作簡便安全，適合應用于工業化。

［1］國家藥典委員會.中國藥典一部.中國醫藥科技出版社，2010:256.

［2］劉麗芳，王宇新，張新勇，等.萊菔子中芥子堿的含量測定.中成藥，2002，(2):52.

［3］丁臻，蔡梅超，周洪雷，等.正交試驗法優選萊菔子水溶性生物堿提取工藝.食品與藥品，2011，13(1):19-21.

［4］譚鵬，姜虹玉，呂文海.萊菔子研究概況.實用中醫藥雜志，2005，21(4):254-255.