清開靈口服液生產(chǎn)工藝優(yōu)化研究*

王 磊，高 輝，諶愛富，劉二偉，王家龍

清開靈口服液源于安宮牛黃丸，是國家基本藥物、國家基本醫(yī)療保險目錄藥品[1]，是由梔子、金銀花、板藍根等8味中藥提取制成的口服液制劑，主要作用于腦、肝、心、肺等器官[2]，具有清熱解毒、鎮(zhèn)靜安神之功效，現(xiàn)代藥理研究表明其具有抗菌、抗病毒、退熱消炎、護肝和提高機體免疫力等作用[3]。《中國藥典》中其生產(chǎn)工藝沒有規(guī)定具體參數(shù)，藥廠各自安排生產(chǎn)，生產(chǎn)過程中存在有生產(chǎn)效率不高，資源浪費等問題。本實驗通過指標性成分梔子苷轉(zhuǎn)移率考察清開靈口服液的生產(chǎn)步驟，圍繞提取和醇沉過程中影響它的多個因素，優(yōu)化工藝條件，為具體生產(chǎn)提供指導(dǎo)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters2695液相色譜系統(tǒng)（四元泵、在線脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、Waters2487 VWD檢測器、Empower色譜工作站），超純水制造機（Mill-QⅡ型，Millipore公司），低溫高速離心機（德國Sigma公司），AX205十萬分之一天平（瑞士梅特勒-托利多公司），電子天平(上海永杰衡器有限公司)；8205型筆式pH計（上海康儀儀器有限公司），真空干燥箱（天津市天宇實驗儀器有限公司）。

1.2 試藥 乙腈（色譜純，天津康科德公司），超純水（Milipore制備），梔子苷對照品（購自中新藥業(yè)標準品物質(zhì)中心），氫氧化鈣（天津市光復(fù)精細化工研究所），藥材梔子、金銀花、板藍根（均由唐山容大藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院郭俊華副研究員鑒定）。

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC條件與結(jié)果

2.1.1 色譜條件色譜柱：AgilentC18（46mm×150mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（30 ∶70）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：238 nm；柱溫：25℃；進樣量：10 μL。

2.1.2 色譜結(jié)果 見圖1。

圖1 梔子苷對照品色譜圖

2.2 提取工藝的考察

2.2.1 提取因素水平表設(shè)計 采用正交實驗對溶劑用量、提取時間和提取次數(shù)的結(jié)合、提取前的浸泡時間三因素進行考察，每個因素均勻設(shè)計3個水平，按L9（34）正交表安排實驗，以梔子苷轉(zhuǎn)移率結(jié)合固形物收率為指標對結(jié)果進行評價。正交設(shè)計因素與水平見表1。

表1 清開靈提取正交實驗因素水平表

2.2.2 提取實驗方法與結(jié)果 分別稱取處方量梔子粗粉、板藍根、金銀花，按正交實驗表2進行實驗，分別合并提取液后確定體積，HPLC法測定提取液中梔子苷含量，同時測定固形物收率[4]。結(jié)果見表2，統(tǒng)計結(jié)果見表3。

表2 梔子、板藍根和金銀花提取正交實驗結(jié)果

表3 梔子、板藍根和金銀花提取梔子苷轉(zhuǎn)移率和固形物收率方差分析

直觀分析和方差分析表明，影響清開靈口服液中梔子苷提取率的因素：提取次數(shù)和時間>浸泡時間>料液比。A因素料液比影響較小，考慮到實驗過程中加入溶劑量對樣品的浸潤程度，A因素選用9倍量溶劑。C因素中浸泡1 h即可達到浸泡效果。B因素影響較大并且B3>B2>B1，3次提取率較高，但是提取3次溶劑消耗量大、成本高，本研究對提取2次和3次間進行驗證，進一步優(yōu)化提取工藝。

2.2.3 提取工藝的驗證 根據(jù)正交實驗結(jié)果比較提取2次和3次的工藝對梔子苷轉(zhuǎn)移率的影響。按照藥典處方量分別稱取藥材6份，其中3份按照提取兩次的工藝，另3份按3次的工藝提取，HPLC測定提取液中梔子苷含量并計算轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見表4。

表4 梔子、板藍根和金銀花提取3次工藝驗證結(jié)果%

驗證結(jié)果顯示，在其他條件已定的條件下，提取2次和3次轉(zhuǎn)移率差別不大，為降低生產(chǎn)中成本，選用提取2次工藝。因此確定的提取工藝條件為：按處方量稱梔子粗粉、板藍根和金銀花，9倍量水浸泡1 h后，加熱回流提取2次，每次2 h。

2.3 醇沉精制工藝的考察

2.3.1 醇沉因素水平表設(shè)計 以提取液濃縮相對密度、醇沉乙醇濃度和醇沉?xí)r間為3個因素進行考察，每個因素設(shè)計3個水平，仍以梔子苷轉(zhuǎn)移率為指標，兼顧固形物收率對結(jié)果進行分析，按L9（34）正交表安排實驗，正交設(shè)計因素與水平見表5。

表5 醇沉正交實驗因素與水平設(shè)計

2.3.2 醇沉純化實驗方法與結(jié)果 合并2.2.3步驟所得2次提取工藝條件的樣品，平均分成9份，按正交實驗表6設(shè)計安排實驗，HPLC檢測梔子苷的含量，測定固形物，計算梔子苷轉(zhuǎn)移率和固形物收率，結(jié)果見表6、表7。

表6 醇沉正交實驗結(jié)果數(shù)據(jù)%

表7 醇沉梔子苷轉(zhuǎn)移率和固形物收率方差分析

結(jié)果：由分析可以看出，固形物收率受三因素影響不大。影響梔子苷轉(zhuǎn)移率的影響因素：醇沉濃度>醇沉pH>濃縮相對密度，醇沉的乙醇濃度影響最為顯著，其次為pH。醇沉前濃縮相對密度對醇沉梔子苷轉(zhuǎn)移率影響較小，但需要消耗更多的乙醇，且乙醇濃度70%時，即可達到65%以上，因此選擇提取液濃縮至相對密度1.25即可，綜合考慮以上因素選擇A2B2C1，即最佳工藝為提取液濃縮至相對密度1.25，醇沉濃度70%，醇沉的pH為6。

2.3.3醇沉工藝驗證 將提取驗證中提取3次的提取液合并后均分為3份，按照正交實驗確定的最佳工藝醇沉，HPLC測定醇沉前后溶液中梔子苷含量，計算梔子苷轉(zhuǎn)移率，同時測定固形物收率，結(jié)果見表8。

由表8驗證結(jié)果可見，所篩選的醇沉工藝中梔子苷轉(zhuǎn)移率較高，工藝穩(wěn)定，達到了優(yōu)選的效果。

表8 醇沉工藝驗證結(jié)果

3 結(jié)論

通過正交試驗，對清開靈口服液中梔子、板藍根和金銀花的提取純化具體參數(shù)進行優(yōu)化，確定了最佳提取和醇沉工藝條件，梔子苷的轉(zhuǎn)移率達60%以上，固形物收率20%左右。經(jīng)驗證所優(yōu)選工藝穩(wěn)定，操作簡單，生產(chǎn)提供了相關(guān)參考。

4 討論

實驗優(yōu)選確定醇沉?xí)r乙醇比例70%，實驗中發(fā)現(xiàn)降低乙醇比例則沉淀物分層不明顯且極黏稠，嚴重影響后續(xù)工藝，這可能是由于果實和花類藥材中較高含量的鞣質(zhì)和樹膠類化合物導(dǎo)致，此現(xiàn)象在中成藥的生產(chǎn)過程中普遍存在，因此對富含鞣質(zhì)和樹膠類的濃縮液進行純化時要適當(dāng)提高乙醇比例。

[1]顏海燕，謝 丹，羅 晶，等.清開靈口服液體外抑菌效果的實驗研究[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2011，24（5）：580.

[2]李 爽.清開靈的藥理作用與臨床應(yīng)用[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，18（1）：108.

[3]韋迎春，張海燕，楊 明.清開靈口服液臨床應(yīng)用的進展[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，23（2）：93.

[4]胡 震，楊廣德，羅國安，等.梔子中梔子苷提取工藝及HPLC 分析[J].中成藥，2006，28（3）：336－337.