肝病相關自身抗體檢測在自身免疫性肝病診斷中的價值研究

高會霞 劉玉珍

自身免疫性肝病是一組病因和發病機理尚不完全清楚、但多數認為和自身免疫有關的肝臟疾病，臨床常見的主要有自身免疫性肝炎(AIH)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)及原發性硬化性膽管炎(PSC).早期診斷及治療對這些疾病發展及預后至關重要，而實驗室檢查特別是自身抗體檢查對這些疾病的診斷有重要意義。本研究對我院2914 份自身抗體檢驗結果并結合臨床進行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2007年10月至2010年10月我醫院門診及住院就診肝病患者2914 例送檢標本，并對自身抗體陽性529病例的查閱臨床資料。乃入病例中，男139例，女390例;平均年齡(49±15)歲;診斷為PBC的61例和AIH的57例患者均符合美國肝病學會2000年版PBC和AIH診療指南。

1.2 方法

1.2.1 檢測患者外周血自身抗體及其滴度:采用德國歐蒙實驗診斷公司肝臟馬賽克，間接免疫熒光法檢測患者外周血自身抗體:抗核抗體(ANA)、抗線粒體抗體(AMA)、抗平滑肌抗體(ASMA)、抗肝腎微粒體抗體(LKM)、，抗肝細胞膜抗體(LMA)、抗肝細胞溶質抗原1型抗體(LC-1)、抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)，抗線粒體抗體(AMA)-M2亞型，。待檢血清自1:100起稀釋，與組織細胞孵育30分鐘;加入異硫氰酸熒光素(FITC)標記的抗體結合30分鐘;洗片、封片后熒光顯微鏡觀察結果。組織或細胞內出現特異性綠色熒光、血清稀釋度〉1∶100為陽性。

1.2.2 ELISA法檢測全部血清的病毒學肝炎指標:HbsAg、抗-HBs、HbeAg、抗-HBe、抗-HBc、HAVIgM、HCVIgG、HEVIgM、CMV-IgM、EB-IgM等。

1.3 統計學分析應用SPSS 11.5統計軟件，計量資料以表示，采用t檢驗，計數資料以例數或百分率進行描述，應用四格表χ2檢驗，P ＜0.05為差異有統計學意義

2 結果

2.1 2714 份臨床送檢標本中肝病相關自身抗體檢測結果自身抗體陽性472例，陽性率17.4%，抗核抗體(ANA)陽性418例，陽性率15.4%，抗線粒體抗體(AMA)陽性124例，陽性率4.57%，抗平滑肌抗體陽性91例，陽性率3.35%，抗肝腎微粒體抗體(LKM)陽性12例，陽性率0.59%，抗肝細胞膜抗體陽性(LMA)8例，陽性率0.29%，抗肝細胞溶質抗原1型抗體(LC-1)陽性5例，陽性率0.18%，抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)陽性3例，陽性率0.11%，2914 例送檢標本中診斷為AIH 59例，檢出率為2.17%，診斷為 PBC 61例，檢出率為2.24%。自身抗體陽性患者74.57%診斷為病毒性肝炎及相關疾病。見表1。

表1 472例不同肝病患者自身抗體檢測結果 例(%)

2.2 不同肝病患者自身抗體與臨床診斷的關系 PBC組和AIH組血清中各種自身抗體陽性率及滴度明顯高于其他肝病組，差異有統計學意義(P ＜0.01)。77.0%的PBC患者 ANA陽性，滴度均為1∶320以上，而且PBC患者中73.8%的AMAM2亞型陽性;98.3%的AIH患者ANA陽性，滴度均為1∶320以上，在AIH中可見23.7%的ASMA陽性，且98%熒光模型為滴度大于1∶320的抗肌動蛋白型，并可見20.3%的LKM、8.5%的LC-1、3.4%的LSP抗體陽性。在其他肝病中多見ANA抗體陽性，且多為低滴度。見表1。

2.3 AIH和PBC的熒光模型 ANA的核型特征顯著，抗核模型抗體在PBC中的比例51.1%顯著高于在AIH中比例6.9%，AIH中多以顆粒型、著絲點型、以及二者的混合核型常見。見圖 1、表 2。

圖1 ANA在AIH與PBC中的熒光模型

表2 ANA陽性的AIH和PBC患者的熒光模型例(%)

2.4 ANA檢測陽性滴度≥1∶320、1∶100及陰性乙型肝炎患者肝功能比較 ANA檢測陽性滴度≥1∶320乙型肝炎患者與滴度1∶100及ANA陰性乙型肝炎患者ALT AST ALP GGT之間均數比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 ANA檢測陽性滴度≥1∶320、1∶100及陰性乙型肝炎患者肝功能指標比較 U/L

表3 ANA檢測陽性滴度≥1∶320、1∶100及陰性乙型肝炎患者肝功能指標比較 U/L

ALT AST GGT ALP TBIL ALB ANA陽性≥1∶320 512±47 312±15 411±287 504±371 58±35 32±9類別187±21 117±33 92±61 142±73 63±37 33±10 ANA陽性1∶100 212±13 110±26 88±55 139±67 53±46 31±11 ANA陰性

3 討論

近年來，隨著自身抗體的檢測越來越受到臨床及實驗室的重視，臨床醫生對自身免疫性肝病認識程度明顯提高，相繼有文章報道，但對于自身免疫性肝病的發病率及患病率的報道較少。本研究連續收集我院門診及住院就診肝病患者2914 例送檢標本，具有一定的參考價值。

從查閱到的529例患者的臨床資料分析，AIH患者59例，檢出率為2.17%，其中ANA陽性率最高(58/59)98.3%，且滴度大于1∶320，可見ANA的檢測在AIH的診斷中的重要性。未發現ANA較特定的熒光模型，表明ANA單個抗體無診斷價值。在AIH中可見23.7%的ASMA陽性，且98%熒光模型為滴度大于1∶320的抗肌動蛋白型(抗-actin)，其他肝病患者中ASMA陽性率低，且多為低滴度?？梢姼叩味鹊目筧ctin是Ⅰ型AIH的特異性標志，與報道一致，故臨床上開展抗actin抗體檢測能增加Ⅰ型AIH的診斷率。LKM是Ⅱ型AIH的標志性抗體，本組資料中LKM陽性率(12/59)20.3%，顯著高于其他肝病，因此檢測LKM可提高ANA陰性的AIH患者診斷率。LMA陽性率(8/59)13.6%，LC-1陽性率(5/59)8.5%，LSP陽性率(3/59)3.4%，這幾種抗體是Ⅱ型AIH另三個標志性抗體，對AIH的診斷具有較高的特異性。

本研究中PBC的檢出率為2.24%，AMA陽性是本病最重要的免疫學診斷指標，AMAM2亞型為 PBC 特異性抗體［1，2］，通過檢測AMA-M2可早期發現PBC［3］。本資料61例 PBC患者中AMAM2亞型的陽性率是74%，在其他肝病中未見AMAM2亞型陽性，說明M2抗體對PBC診斷最具特異性，與國內外的報道一致［4］。PBC患者出現的ANA的陽性率為77%，其主要熒光模型中為核膜型(51.1%)、著絲點型(21.1%)，并顯著高于其他肝病，可見ANA熒光模型分析對AMA陰性的PBC有相當重要的意義。

本研究結果還提示病毒性肝炎(HBV、HCV、HEV等)可見低滴度(1∶100)的 ANA、ASMA、AMA，高滴度少見，可見低滴度自身抗體對自身免疫性肝病無明確診斷意義。對于病毒性肝炎患者臨床查出病毒指標后，不再對病人進行自身抗體檢測，而明確此次發病原因是自身免疫性疾病并發了病毒感染還是病毒性肝炎發病是非常重要的，通常高滴度自身抗體的存在與自身免疫性疾病密切相關［4，5］。本文比較了 ANA滴度≥1∶320、1∶100 及陰性乙型肝炎患者肝功能，發現 ANA≥1∶320陽性乙型肝炎患者的ALT、AST、ALP GGT明顯高于ANA 1∶100及陰性乙型肝炎患者，提示病毒感染過程中自身免疫反應加重了患者肝損傷［6］，而臨床上治療兩種疾病方法不同，如將ANA≥1∶320陽性乙型肝炎患者進行抗病毒治療，可能更加增強自身免疫性細胞，將會加重原有病情。因此在為患者進行抗病毒治療前，需進行自身抗體及滴度檢測以實施有針對性的個體治療［7，8］。

綜上所述，自身抗體檢測不僅對自身免疫性肝病的臨床診斷、鑒別診斷、治療的具有重要意義，對其他抗病毒治療的乙肝患者進行自身抗體檢測有助于疾病的治療。

1 Margare FB，David EJJ.Antimitochondral and other autoantibodies in primary biliary cirrhosis.Autoimmune liver disease.2nd ed.Amstendam:Elsevier，1998.287-304.

2 Talwalkar JA，Lindor KD.Primary bilary cirrhosis.Lancet，2003，362:3-61.

3 Metcalf JV，Mitchison HC，Palmer JM，et al.The follow-up of a symtom atic persons with antibodies to pyruvate dehydrogenase in adullt population samples.J Gastroentenrol，2001，36:248-254.

4 馬燕，林炳亮，嚴穎，等.自身免疫性肝病的回顧性研究.國際內科學雜志，2008，35:501-504.

5 劉燕敏，閆惠平，汪俊韜.肝功能異常患者中自身抗體及自身免疫性肝病的檢測.中華肝臟雜志，2004，12:360-362.

6 張海萍，閆惠平，馮霞，等.乙肝病毒感染者血清抗核抗體特征及臨床相關性.首都醫科大學報，2007，2:154-157.

7 張利方，李方，石莉萍，等.自身免疫性肝炎和乙型肝炎患者自身抗體檢測及對比分析.微循環學雜志，2010，20:40-41，46.

8 張利方，鄭山根，周萍.自身免疫性肝病患者自身抗體檢測及臨床意義.免疫學雜志，2009，25:416-417.