血必凈對(duì)油酸型急性肺損傷家兔血清炎癥因子與肺水轉(zhuǎn)運(yùn)的影響

黃敏堅(jiān) 張遠(yuǎn)新 李平

急性肺損傷(ALI)是由各種肺內(nèi)外致病因素引起的肺部失控性炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致肺泡毛細(xì)血管損傷為基本病理生理特點(diǎn)的急性進(jìn)行性呼吸衰竭，其嚴(yán)重階段稱為急性呼吸窘迫綜合征。本文通過制備油酸型急性肺損傷兔模型，采用血必凈注射液進(jìn)行治療，通過實(shí)驗(yàn)觀察能減輕肺損傷，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 取新西蘭兔30只，雌雄不限，體重1.8~2.2 kg，平均體重2.0 kg。隨機(jī)分為三組：空白對(duì)照組，單純急性肺損傷組，血必凈治療組(ALI+血必凈)。每組再按照1 h、12 h、24 h、36 h、48 h分為5個(gè)時(shí)段，每個(gè)時(shí)段2只家兔分別進(jìn)行觀察。

1.2 試劑 試劑油酸(oleic acid，OA)，天津市津北精細(xì)化工有限公司產(chǎn)品，血必凈注射液(規(guī)格10ml/支，天津紅日藥業(yè)有限公司產(chǎn)品)，戊巴比妥鈉，肝素，生理鹽水。

1.3 油酸型ALI動(dòng)物模型制備 方法：沿家兔耳緣靜脈注入油酸0.8 ml/kg，復(fù)制油酸肺損傷動(dòng)物模型。注入油酸30 min后可出現(xiàn)較典型的ALI表現(xiàn)。ALI診斷標(biāo)準(zhǔn)：氧合指數(shù)(PaO2/FiO2)≤300 mm Hg。病理指標(biāo)：油酸致傷后，肺臟體積增大，表面可見大小不等的暗紅色斑片狀病灶，切面可有淡紅或白色泡沫樣液體溢出；光鏡下觀察，肺組織內(nèi)有白細(xì)胞浸潤(rùn)，可見肺間質(zhì)及肺泡水腫，肺出血明顯，肺組織濕/干(W/D)比值明顯升高。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 ALI成模后，治療組予耳緣靜脈注入血必凈注射液10 ml/kg。空白對(duì)照組及ALI組予生理鹽水10 ml/kg注射。于1 h、12 h、24 h、36 h、48 h耳緣動(dòng)脈抽血，應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)血清TNF-a、IL-6含量，處死并分離肺組織，取右肺組織進(jìn)行組織切片，在光鏡下觀察病理形態(tài)變化。游離左肺，稱量濕質(zhì)量(wet weight，W)，經(jīng)脫水后，再稱量干質(zhì)量(dry weight，D)，以W/D比值表示肺組織含水量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均通過SPSS 13.0軟件處理。計(jì)量資料以(s)表示，組間差異比較用方差分析，模型前后數(shù)據(jù)比較用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清TNF-α、IL-6含量的變化見表1、表2。

2.2 單純ALI組W/D比值明顯高于正常對(duì)照組，說明油酸致肺損傷后，肺泡內(nèi)大量的液體溢出；血必凈治療24 h后W/D值明顯下降，即肺水腫有一定程度的減輕。見表3。

表1 血清TNF -α含量的變化(s)ng/ L

表1 血清TNF -α含量的變化(s)ng/ L

*與單純ALI組比較，P<0.05；△與正常對(duì)照組比較，P<0.05

組別 T1 T12 T24 T36 T48正常對(duì)照組 193.5±28.4 201.2±33.6 197.3±40.4 190.3±37.2 205.7±32.8單純 ALI組 503.5±46.7△ 587.3±47.2△ 562.5±43.1△ 309.4±42.5△ 365.5±32.6△血必凈治療組 496.4±50.2 401.6±48.3* 203.5±46.8* 201.3±46.4* 233.5±40.5*

表2 血清IL-6含量的變化(s)ng/ L

表2 血清IL-6含量的變化(s)ng/ L

*與單純ALI組比較，P<0.05；△與正常對(duì)照組比較，P<0.05

組別 T1 T12 T24 T36 T48正常對(duì)照組 176.8±30.3 185.2±32.5 180.6±34.6 179.2±31.4 186.3±33.2單純ALI組 268.6±38.7 502.3±40.6△ 658.4±38.5△ 564.3±41.5△ 470.4±37.6△血必凈治療組 296.5±36.3 229.5±38.2* 203.3±37.6* 189.3±40.2* 191.6±38.7*

表3 三組家兔各時(shí)段W/D比值(s)ng/L

表3 三組家兔各時(shí)段W/D比值(s)ng/L

*與正常對(duì)照組比較，P<0.05；△與單純ALI組比較，P<0.05

組別 T1 T12 T24 T36 T48正常對(duì)照組 6.58±0.43 6.39±0.46 6.40±0.38 6.52±0.40 6.83±0.42單純 ALI組 10.37±0.39* 10.87±0.40* 10.32±0.41* 10.79±0.47* 10.59±0.48*血必凈治療組 6.85±0.42△ 6.27±0.45△ 6.14±0.37△ 6.22±0.46△ 6.43±0.42△

3 討論

急性肺損傷是臨床上常見的急癥之一。因其發(fā)病機(jī)理至今尚未完全清楚，病死率極高。且多數(shù)病例常于發(fā)病數(shù)天內(nèi)死亡。因此，ALI至今仍是臨床比較棘手的問題之一[1]。研究證實(shí)，急性肺損傷(ALI)病理生理為炎癥反應(yīng)導(dǎo)致肺毛細(xì)血管內(nèi)皮和肺泡上皮損傷，肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、結(jié)構(gòu)破壞，發(fā)生凋亡或壞死[1]。由中性粒細(xì)胞為主介導(dǎo)的肺臟局部炎癥反應(yīng)致肺毛細(xì)血管通透性增高性肺水腫，肺泡液滲出，形成富含蛋白質(zhì)的肺水腫及透明膜形成，并伴有肺間質(zhì)纖維化。TNF-α是引起ALI的啟動(dòng)因子，它可通過誘導(dǎo)NO，內(nèi)皮素、氧自由基、多肽遞質(zhì)、脂質(zhì)遞質(zhì)和黏附分子等的產(chǎn)生而發(fā)揮作用[2]。促炎癥細(xì)胞因子主要由肺內(nèi)炎癥細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞在局部產(chǎn)生[3]。本實(shí)驗(yàn)通過家兔耳緣靜脈注射油酸復(fù)制急性肺損傷模型。油酸是一種具有較強(qiáng)毒性的飽和脂肪酸，主要通過氧化應(yīng)激反應(yīng)、促凝血活性增高以及內(nèi)皮素作用等機(jī)制導(dǎo)致肺損傷，破壞肺泡上皮屏障，同時(shí)油酸對(duì)肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞等有直接毒性作用，降低肺泡上皮主動(dòng)清除肺泡內(nèi)液體的效率[4]。通過注射油酸后動(dòng)物即出現(xiàn)呼吸窘迫、紫紺，呼吸頻率明顯增快，1 h后血?dú)夥治鍪緡?yán)重的低氧血癥。病理檢查發(fā)現(xiàn)肺間質(zhì)和肺泡水腫、肺間質(zhì)和肺泡出血、毛細(xì)血管充血、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)等急性肺損傷的基本病變。在ALI模型制備成功后1 h，血清TNF-α開始升高，于傷后12 h 升高達(dá)峰值，24 h已開始下降，但在48 h仍高于正常對(duì)照組。IL-6 于傷后1 h開始升高、12~24 h 仍有非常明顯的增高，TNF -α、IL-6 在創(chuàng)傷后不同時(shí)間升高，可能提示他們的因果關(guān)系。TNF -α早期出現(xiàn)，說明其是ALI的關(guān)鍵性始動(dòng)因子，而IL-6的隨之出現(xiàn)并且持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，則可能是細(xì)胞因子群活化后級(jí)聯(lián)反應(yīng)不斷擴(kuò)大的增強(qiáng)因子[5]。

近年來，關(guān)于中醫(yī)藥治療ALI越來越受到重視，從臨床上觀察能改善癥狀，但具體的機(jī)理仍在探討中。血必凈注射液主要組成為丹參、川芎嗪、阿魏酸、芍藥苷、紅花黃色素A等[6]。文獻(xiàn)報(bào)道，血必凈注射液能在體內(nèi)外有效拮抗LPS，抑制體內(nèi)多種炎性介質(zhì)的病理生理作用，具有抗細(xì)菌毒素、降低內(nèi)毒素水平、調(diào)節(jié)免疫及炎性介質(zhì)、改善微循環(huán)、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞等作用，對(duì)應(yīng)激性臟器損傷具有良好的保護(hù)作用。并通過保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，通過提高超氧化物歧化酶活性等途徑，保護(hù)和修復(fù)應(yīng)激狀態(tài)下受損的臟器[7]。本實(shí)驗(yàn)研究顯示，血必凈注射液組與對(duì)照組比較血清TNF-α、IL-6活性明顯改善(P<0.05)，W/D值明顯下降，滲出減輕。提示血必凈注射液對(duì)ALI家兔具有肺保護(hù)效應(yīng)，可減輕ALI肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、淤血和上皮細(xì)胞損傷，但其具體機(jī)制還需進(jìn)一步探討。

[1]馬麗梅，鄭春蘭，馬加慶.急性肺損傷與細(xì)胞因子相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2009，15(19)：2909-2912.

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[4]黃曉軍，王選錠.急性肺損傷抗氧化治療的研究進(jìn)展[J].臨床內(nèi)科雜志，2004，21(10)：652-654.

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[6]洪輝華，蔡宛如.急性肺損傷的發(fā)病機(jī)制及中醫(yī)藥治療的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，16(1)：45-47.

[7]劉建新，余林中.中藥保護(hù)急性肺損傷作用機(jī)理研究進(jìn)展陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)[J].2009，12(6)：83-85.