稽留流產絨毛滋養細胞中線粒體超微結構的變化

朱麗均 陳亞萍 梅小會

（復旦大學附屬上海市第五人民醫院婦產科，上海 200240）

稽留流產是流產的一種特殊形式，流產中該病的發生率可達15%～20%［1］。近年研究顯示，稽留流產 的 發 病 可 能 與 免 疫［2］、內 分 泌［3］、遺 傳［4］、環境［5］、感染［6］、氧化應激［7］等因素有關，但是其確切的病因和發病機制尚不明確。線粒體是一種極其敏感的細胞器，它也是細胞氧反應產物的主要來源之一。本課題旨在探討稽留流產患者絨毛滋養細胞中線粒體超微結構的變化及其可能原因。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月—2011年12月在我院婦科住院的確診為稽留流產的患者20例為研究組。選取同期經B超證實為胚胎存活在門診要求行人工流產的早孕婦女20例作為對照組。2組婦女在年齡、停經時間及孕次方面，差異均無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 研究組和對照組患者一般資料比較（）

表1 研究組和對照組患者一般資料比較（）

組別 n 平均年齡（歲）平均孕次（次）平均停經時間（d）研究組 2029.87±5.072.71±1.3459.07±11.91對照組 2026.66±5.332.51±1.2155.74±6.90

1.2 入組標準 研究組：孕齡不超過12周，稽留流產的診斷標準參照第7版婦產科教材。對照組：（1）孕齡不超過12周；（2）術前B超檢查示孕囊形態及胚胎原始心管搏動正常。

兩組婦女既往均無妊娠并發癥、內外科合并癥、感染、自然流產、早產、死胎、先兆流產等病史及服藥史。

1.3 標本的采集與處理 無菌條件下，采用負壓抽吸方法吸出絨毛組織，負壓400～500 mmHg。絨毛組織吸出后取一部分新鮮組織進行還原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）和抗超氧陰離子自由基（fight superoxide radical，FSR）檢測，另一部分組織保存于2.5%戊二醛液固定液中，用于電鏡觀察。

1.4 實驗方法

1.4.1 胚胎組織勻漿制備 將胚胎組織中加入9倍體積的0.9%氯化鈉溶液，倒入放置于冰塊中的玻璃勻漿管內，充分磨碎，使組織勻漿化，然后將勻漿以2000r／min離心5min，其上清液即為10%組織勻漿，用以進行組織GSH和FSR測定。

1.4.2 各項指標檢測嚴格按照試劑盒說明書步驟進行。所用試劑由南京建成生物工程研究所提供。儀器用美國的Varian Cary－Eclipse 500熒光分光光度計。并按所給公式計算結果。

1.4.3 胚胎組織病理形態學檢查 保存于2.5%戊二醛液固定液中的胚胎組織送至復旦大學醫學院電鏡室進行相應處理并在透射電鏡下觀察。

2 結 果

2.1 胚胎組織GSH和FSR變化 研究組和對照組相比，GSH和FSR水平均顯著性降低（P＜0.05），見表2。

表2 研究組和對照組GSH、FSR分析（）

表2 研究組和對照組GSH、FSR分析（）

組別 n GSH含量（mg／gprot）FSR活力單位（U／gprot）研究組 20 0.44±0.22 6.19±4.20對照組 20 2.54±2.10 19.36±5.88

2.2 胚胎組織病理形態學變化 電鏡下可見對照組胚胎細胞核膜完整，染色質分布均勻；線粒體呈圓或橢圓形，基本無腫脹，膜完整，嵴呈同心圓或縱形排列且密集清晰（圖1）。研究組胚胎細胞核膜中斷，染色質固縮并凝結成塊；線粒體排列紊亂，結構模糊，線粒體水腫變性，嵴明顯疏松溶解，部分呈空泡樣變（圖2）。

圖1 對照組胚胎細胞線粒體呈圓或橢圓形，基本無腫脹，膜完整，嵴呈同心圓或縱形排列，密集清晰（×37000）

圖2 研究組胚胎細胞線粒體排列紊亂，結構模糊，線粒體水腫變性，嵴明顯疏松溶解，部分空泡樣變（×37000）

3 討 論

本研究采用化學分析法檢測稽留流產患者及正常早孕婦女絨毛組織中GSH和FSR的水平，結果顯示稽留流產患者絨毛中GSH和FSR的水平均顯著低于正常早孕婦女，提示可能由于稽留流產患者胚胎組織抗氧化能力下降，線粒體生成氧自由基增多，自由基的強氧化作用［8］引起雙層脂質膜的穩定性下降，DNA單鏈破壞與斷裂，促進含硫蛋白質的相互交聯，從而破壞線粒體超微結構。電鏡下發現，研究組中胚胎細胞線粒體有不可逆損害，對照組胚胎細胞線粒體基本完好，表明氧自由基對胚胎細胞線粒體超微結構造成明顯的損傷作用。

本研究結果發現，稽留流產患者胚胎細胞抗氧化能力減弱，線粒體超微結構破壞，提示線粒體與稽留流產之間存在著某些重要關聯。有必要進一步研究，以了解線粒體在早期胚胎發育中的作用。

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