CIK細胞治療晚期惡性腫瘤的臨床研究

任 慶，熊銳華，田秀榮，羅克品，周 欣

(中國人民解放軍第181醫(yī)院腫瘤治療中心，廣西 桂林541002)

惡性腫瘤患者就診時多數(shù)病情已達晚期，且體質(zhì)虛弱，無法進行手術(shù)、放、化療等治療。細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK）是近年來逐漸嶄露頭角的生物治療手段，對預防腫瘤復發(fā)、清除患者體內(nèi)殘留的腫瘤細胞，改善晚期腫瘤患者的生活質(zhì)量提供了新的治療途徑。我中心自2009年2月至2009年10月采用該方法治療無手術(shù)以及放、化療指征的晚期惡性腫瘤患者42例，取得了一定療效，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本中心2009年2月1日至2009年10月31日，共治療42例病理學或細胞學確診的惡性實體瘤，Ⅲ期20例，Ⅳ期22例，KPS評分50～60分，均存在可測量病灶，預計生存期≥3個月，治療前心、肝、腎功能及血常規(guī)大致正常；男性24例，女性18例，年齡35～80歲，中位年齡56.9歲；非小細胞肺癌10例，小細胞肺癌4例，乳腺癌8例，胃癌5例，結(jié)腸癌2例，肝癌6例，胰腺癌2例，卵巢癌2例，鼻咽癌3例；患者本人或法定代理人知情并簽署《知情同意書》，通過醫(yī)院倫理委員會同意后才能接受治療。所有病例均能記錄真實的聯(lián)絡(luò)方式，以便隨訪。

1.2 CIK細胞的制備

采用異體外周血淋巴細胞分離液50 mL，分離并收集患者外周血單個單核細胞，用PBS洗滌細胞3次，將細胞按2×106個/mL的密度懸浮于RPMI1640完全培養(yǎng)液中，加入干擾素-γ1000 μ/mL，置于37℃、CO2體積分數(shù)為5%的條件下培養(yǎng)24 h，再加入抗CD3單克隆抗體100 ng/mL，白細胞介素-21000 μ/mL繼續(xù)培養(yǎng)，每隔2～3 d分瓶1次，并補加完全培養(yǎng)液及IL-2。培養(yǎng)至10～14 d經(jīng)檢測無污染后，收集CIK細胞（數(shù)量約為1×109個），離心并用0.9%NaCL溶液洗滌細胞3次，最后以0.9%NaCL溶液20 mL重懸細胞。

1.3 治療方法

患者給予CIK細胞靜脈輸注，每次輸注細胞數(shù)量近似于1×109個，總體100 mL，每天1次，連續(xù)10 d為1個療程，治療1個月為1個療程。每個患者進行3～4個療程治療。若患者在治療過程中病情進展則停止治療。在開始上述治療后，患者即正式進入隨訪期。

1.4 療效評價

（1）于治療前、治療結(jié)束后行CT檢查，并進行比較以評價療效，1個月后復查確認療效。此后每3個月復查1次。近期療效評價參照 “實體瘤療效評價標準（RECIST）”進行評價，分為完全緩解（CR），部分緩解（PR），疾病穩(wěn)定（SD），疾病進展（PD），客觀緩解率（ORR）即CR+PR的例數(shù)占所有病例的百分率。（2）PFS：是指患者從首次用藥至疾病進展或任何原因死亡的時間。OS：是指患者首次用藥至任何原因死亡的時間。（3）采用流式細胞儀檢測患者治療前后CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+等細胞免疫指標，分析T淋巴細胞亞群變化情況。（4）生活質(zhì)量評分主要記錄精神情緒、睡眠、食欲及體力狀況，以數(shù)字0～5分表示，0分為無干擾，2～4分為一般干擾，5分為嚴重干擾。根據(jù)受干擾的程度分別記錄。

1.5 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 近期療效

42例患者均可評價療效。其中1例CR（鼻咽癌患者），6例PR（非小細胞肺癌1例，乳腺癌2例，胃癌1例，結(jié)腸癌1例，鼻咽癌1例），30例SD，5例PD（肝癌3例，小細胞肺癌1例，胰腺癌1例），ORR為16.7%。

2.2 治療前后外周血T淋巴細胞亞群變化

患者治療前外周血CD3+、CD4+、CD8+等免疫指標均明顯降低，顯示晚期惡性腫瘤患者存在著嚴重細胞免疫功能缺陷。經(jīng)CIK治療后上述指標數(shù)值顯著提高（P＜0.05）。結(jié)果見表1。

2.3 生活質(zhì)量對比

CIK治療后，25例（60%）患者精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，27例（64%）患者睡眠質(zhì)量改善，20例（48%）患者食欲增加，26例（62%）患者體力狀況提高。

表1 患者治療前后外周血免疫指標變化

2.4 遠期療效

所有患者均以電話形式進行隨訪，隨訪時間從2009年3月1日至2011年10月31日，隨訪率100%，隨訪資料完整。本組患者中位PFS為8.1個月，中位OS12.8個月。見圖1。

2.5 不良反應(yīng)觀察

絕大部分患者輸注CIK過程中無明顯不良反應(yīng)，僅5例出現(xiàn)一過性發(fā)熱，體溫最高為38.8℃，經(jīng)處理后很快緩解，未影響治療。

3 討論

圖1 Kaplan-Meier患者總生存期生存曲線（隨訪時間單位：月）

晚期惡性腫瘤患者由于機體一般狀態(tài)差，KPS評分低，無法耐受手術(shù)、放療、化療等治療手段，而單純的姑息治療效果又不理想，因此尋找更有效、安全的治療手段成為目前研究關(guān)注的焦點。在眾多的治療手段中，生物治療憑借其獨特的作用逐漸發(fā)展成為腫瘤綜合治療的第四大模式，作為手術(shù)、放療、化療的有益補充。在這其中以CIK細胞治療最具代表性，臨床應(yīng)用也最廣泛。

CIK全稱為細胞因子誘導的殺傷細胞（cytokine-induced killer cell），其本質(zhì)是人外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子共同培養(yǎng)一段時間后獲得的一群異質(zhì)細胞[1]，具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和非主要組織相容性復合體（MHC）限制性殺瘤的優(yōu)點。

鑒于上述特點，也為了尋求新的抗腫瘤治療手段，近年來國內(nèi)外的許多研究機構(gòu)開展了CIK細胞基礎(chǔ)與臨床應(yīng)用的探索、研究。比如基礎(chǔ)研究方面，Hongeng等[2]用CIK細胞對多種腫瘤細胞株進行體外殺傷實驗，結(jié)果表明CIK細胞對這些腫瘤細胞株的溶瘤活性顯著高于外周血淋巴細胞。另外其他的實驗也提示CIK細胞本身能活化腫瘤細胞凋亡基因，使得FLIP、DAD1和survivin基因表達上調(diào)，從而誘導腫瘤細胞凋亡[3]。受到基礎(chǔ)研究結(jié)果的鼓舞，臨床上對CIK細胞的使用也逐漸進入實質(zhì)性階段，從血液系統(tǒng)腫瘤到實體瘤，從輔助治療到姑息性治療，應(yīng)用范圍越來越廣，其增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣等優(yōu)點也得到較充分的體現(xiàn)。例如Chen等[4]學者用CIK細胞治療63例晚期惡性腫瘤患者，結(jié)果總體疾病控制率（disease control rate，DCR）為44.46%，與化療療效相近，且患者生活質(zhì)量得到明顯改善，療效顯著。其他的一些機構(gòu)同樣也有類似的報道[5-6]。在本研究中，42例患者ORR為16.7%，接近于化療療效，與國內(nèi)外文獻報道水平相似，體現(xiàn)了CIK細胞具有一定的臨床應(yīng)用價值。

我們的實驗結(jié)果還表明，通過CIK回輸治療晚期惡性腫瘤患者，與單純、常規(guī)姑息性治療相比，在遠期療效的觀察指標比較中也表現(xiàn)出一定的優(yōu)勢，其原因可能與患者機體免疫功能提高有密切關(guān)系。Hernberg等[7]發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤患者外周血CD4+/CD8+比值升高是一項獨立的預后因素，CD4+絕對數(shù)目增加，比值升幅越大，誘導患者產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)越強烈，預后也越好。我們這一臨床研究恰恰與此吻合，經(jīng)CIK治療后患者外周血CD3+、CD4+、CD56+等數(shù)量以及CD4+/CD8+比值均明顯升高，提示機體免疫功能顯著增強。同時生存分析數(shù)據(jù)也顯示患者的PFS和OS分別為8.1個月與12.8個月，與國內(nèi)外文獻報道的水平相當。

在本研究中，60%以上的患者經(jīng)CIK細胞治療1個療程后出現(xiàn)食欲增強、睡眠質(zhì)量改善、體力增加、精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)的征象。值得一提的是我們納入的研究對象多為中、老年患者，體質(zhì)普遍較虛弱，通過CIK治療不僅延長了生存期，改善了生活質(zhì)量，還避免了因放、化療的嚴重不良反應(yīng)所導致的痛苦，Liu等[8]專家的臨床研究結(jié)果也證實相同的觀點。CIK治療的主要反應(yīng)是發(fā)熱，多數(shù)出現(xiàn)在治療后4～6 h，但人數(shù)較少，僅5例，體溫最高為38.8℃，經(jīng)消炎痛栓處理后退熱，不影響治療。

綜上所述，CIK細胞是一種安全可靠、無明顯不良反應(yīng)的腫瘤治療方法，具有一定的應(yīng)用前景和推廣價值。但怎樣與其他治療手段結(jié)合以提高療效，如何更深入挖掘CIK細胞的抗腫瘤作用機制，提高殺瘤活性等，仍需作進一步深入的研究。

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