康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球的制備工藝研究

李彩鳳，陳向紅

（保定市第一中心醫(yī)院 河北 保定 071000；河北大學附屬醫(yī)院 河北 保定 071000）

康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球的制備工藝研究

李彩鳳1，陳向紅2

（保定市第一中心醫(yī)院 河北 保定 071000；河北大學附屬醫(yī)院 河北 保定 071000）

目的 研制康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球，并對處方和工藝進行篩選。方法 采用凝聚法制備康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球。通過正交試驗獲得設(shè)計和優(yōu)化微球制備工藝。采用高效液相色譜法（HPLC）測定了微球的載藥量、包封產(chǎn)率和體外釋放度。結(jié)果 制備的微球顯微觀察形態(tài)圓整、表面光滑，無粘連，平均粒徑為（10.21±0.16）μm，粒徑在7～12 μm平均數(shù)占總數(shù)的80.6%，平均載藥量為（38.75±2.42）%，包封率為（89.73±3.15）%。結(jié)論 采用本法制備的康普瑞丁磷酸二鈉殼聚糖-海藻酸鈉微球粒徑大小適宜，符合肺靶向要求，體外釋放具有明顯的緩釋作用，適合制備成肺栓塞的制劑。

康普瑞丁磷酸二鈉；殼聚糖-海藻酸鈉；體外釋放

康普瑞丁磷酸二鈉（Combretastatin A4P）為新型抗腫瘤前體藥物，體內(nèi)代謝成康普瑞丁活性形式與血管內(nèi)皮細胞的微管系統(tǒng)結(jié)合，阻止新生血管的生成而發(fā)揮抗腫瘤的作用，是治療非小細胞肺癌的藥物之一。由于康普瑞丁給予大鼠靜脈注射給藥后，消除半衰期僅幾分鐘，在體內(nèi)消除很快，穩(wěn)定性差[1]，將其制成微球后，可緩慢、持續(xù)釋放，能延長藥物有效濃度的周期、增加持續(xù)作用的時間、減少給藥的頻率；還可選擇性的到達病變部位，從而降低藥物的毒性、提高藥物的療效和增加被包封藥物的穩(wěn)定性。

1 材料與儀器

康普瑞丁磷酸二鈉（CA-4P，自制，純度99.91%）；海藻酸鈉（分析純，上海奉賢奉城試劑廠）；碳酸鈣（化學純，青島晶巖科技開發(fā)有限公司）；殼聚糖（Chitosan，CS，脫乙酰度95%，山東奧康生物科技有限公司）；其他均為市售化學或分析試劑。YD203型液滴發(fā)生器（中國科學院大連化學物理研究所研制）；RQ218型超聲波清洗器（上海精密儀器儀表有限公司）；LC-10 Avp高效液相色譜系統(tǒng)（日本島津）；智能溶出實驗儀（天津大學無線電廠）；透析袋（截留分子量12000，北京經(jīng)科宏達）。

2 方法與結(jié)果

2.1 微球的制備工藝

采用液滴發(fā)生法稱取適量康普瑞丁磷酸二鈉原料藥與一定濃度的海藻酸鈉按一定比例混合均勻，吸入到注射器中，在液滴發(fā)生器驅(qū)動下緩慢滴入到150 mL 0.3 moL/L的氯化鈣溶液中，棄上清液，加入0.5%的殼聚糖150 mL。在一定溫度下固化后，取出微球，抽濾，并用去離子水沖洗3遍，減壓干燥48 h即得。

2.2 康普瑞丁磷酸二鈉微球的載藥量和包封率的測定

2.2.1 色譜條件 Kromasil C18柱(150 mm × 4. 6 mm、5 μm)，流動相為甲醇-乙腈-0.05 moL/L磷酸二氫鉀緩沖液（55:1:50，pH 2.5），檢測波長為290 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為40℃，進樣量為10 μL。

2.2.2 標準曲線的制備 精密稱取10 mg CA4P 對照品，用純化水溶解，稀釋成5、10、20、30、40、50 μg/mL的對照品溶液；分別精密量取10 μL溶液，進樣，并記錄峰面積；以樣品濃度對峰面積值作線性回歸，得回歸方程為:y=1.258×104x-3.652×103（r= 0.9999）。結(jié)果表明，線性范圍為5～50 μg/mL內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.2.3 康普瑞丁磷酸二鈉微球載藥量和包封率的測定[2]將微球在瓷研缽中研磨后精取適量，在0.4%氫氧化鈉中超聲30 min（超聲5 min，功率100 W）后，微孔濾膜過濾，濾液參照標準曲線繪制方法測定CA4P濃度，并計算微球的包封率和載藥量。

按標準曲線方程計算微球載藥量和包封率[3]。

2.3 釋放度的測定

測定方法：采用改進的動態(tài)透析法，精密稱取微球適量，裝入透析袋內(nèi)，置于轉(zhuǎn)籃中。以 250 mL pH 7.4磷酸緩沖液為釋放介質(zhì)。在轉(zhuǎn)速為100 r/min，恒溫（37±0.5℃）釋放，分別于0、0.5、1、2、4、8、12、18、24 h吸取介質(zhì)5 mL（同時補充同溫度、同體積的新鮮介質(zhì)），離心，高效液相法測定溶液中藥物的含量，并按標準曲線方程Eq.4計算累積釋放百分率（Q）；同時作康普瑞丁原料釋放實驗。

2.4 正交設(shè)計

以海澡酸鈉的濃度（A，mg/mL），海藻酸鈉與藥物的比例（B），固化溫度（C ℃），固化時間（D h）為主要影響因素，每個因素選取3個水平，選用L9（34）表進行正交實驗，結(jié)果見表1；以康普瑞丁磷酸二鈉的包封率和7～12 μm粒徑百分比為考察指標，試驗結(jié)果見表2。

表1 L9（34）試驗因素水平表

表2 正交試驗結(jié)果分析

由正交試驗分析結(jié)果可知4個因素對中空微球的形成及理化性質(zhì)影響順序為A＞ D＞ B ＞C，其中A和D影響較為顯著。最佳工藝為A1B1C2D2，即最合適的工藝為海藻酸鈉質(zhì)量濃度為15 mg/mL，海藻酸鈉與藥物的比例為1:1，固化溫度為35 ℃，固化時間為2 h。

2.6 微球制備工藝驗證試驗和體外釋放結(jié)果

包封率和載藥量優(yōu)化處方制備3批康普瑞丁殼聚糖-海藻酸鈉微球，測定包封率、載藥量，平均粒徑為（10.21±0.16）μm，粒徑在7～12μm平均數(shù)占總數(shù)的80.6%，平均載藥量為（38.75±2.42）%，包封率為（89.73±3.15）%，可知微球的粒度分布、平均粒徑、包封率、載藥量與體外釋放重現(xiàn)性良好，并且體外釋放與原料藥相比有一定的緩釋作用。經(jīng)擬合釋藥曲線符合 Higuchi 方程：Q = 0.01536 + 0.01325t1/2，r= 0.9906 ，24 h累積釋藥百分率為80.47%，所得微球無明顯突釋現(xiàn)象，其釋藥符合長效制劑特征。

3 討論

制備藥物肺靶向微球，控制藥物粒徑是制備微球的關(guān)鍵[3]，研究證實，粒徑在7～30 μm的微球靜注后可被肺部毛細血管床機械截留從而蓄積在肺部[4]，Lllum等發(fā)現(xiàn)帶正電荷的粒子容易到達肺部。本實驗制備的微球平均粒徑為10.21 μm，載體材料中殼聚糖為帶正電荷的高分子物質(zhì)，從而保證了微球具有良好的肺靶向性，將藥物濃集于肺部，有利于提高肺部疾病的治療，同時降低藥物對其他組織的毒副作用。

試驗中發(fā)現(xiàn)，微球粒徑受海藻酸鈉濃度影響較大，海藻酸鈉濃度越高，微球粒徑越大；微球的固化溫度較高時，固化時間短，生產(chǎn)周期相應(yīng)變短，但微球的包封率隨著固化溫度的升高而略有降低，且微球顏色逐漸加深，故綜合考慮選擇固化溫度為35 ℃。

制備的微球呈黃色粉末狀，外觀圓整、流動性好、表面光滑、載藥量較高，3批樣品在接近體內(nèi)環(huán)境的pH7.4磷酸鹽緩沖液中具有明顯的緩釋作用，并且3批樣品重現(xiàn)性較好，粒徑分布在肺靶向微球要求范圍內(nèi)。

[1]陸 榕,樊慧蓉,劉昌孝.風車子素A4磷酸鹽的大鼠藥動學研究[J].中草藥,2006,37(8):147-149.

[2]尹 佳,張亞蘭,莫 毅,等.CA4P脂質(zhì)體的制備工藝研究[J].華西藥學雜志,2009,24(6):594-596.

[3]王 津,李柱來,陳莉敏,等.殼聚糖-海藻酸鈉布洛芬緩釋微球的制備工藝及性能[J].福建醫(yī)科大學學報,2008,42(1):56-59.

[4]卞麗紅,王洪權(quán),竇園園,等.紫杉醇/海藻酸鈉微囊/微球的緩釋及抑瘤作用研究[J].2005,25(2):152-155.

（本文編輯 韓志濤）

KangPuRui butyl phosphoric acid sodium two chitosan sodium alginate spheres preparation technology research

LI Cai-feng, CHEN Xiang-hong
(The first Hospital center city of Heibei Baoding,Baoding Hebei 071000,China;Affiliated Hospital of Hebei university,Baoding,Hebei 071000,China)

KangPuRui butyl phosphoric acid sodium 2; Chitosan-sodium alginate; In vitro release

TQ460.6

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2012.10.005.012.02

2012－04－09

李彩鳳（1965－），女，河北雄縣人，本科，副主任中藥師，主研方向：中藥學。