兩種酶聯免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的結果比較

胡 越，蔣瑞馨，邵家幼

(無錫市紅十字中心血站檢驗科，江蘇 無錫 214021)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是嚴重危害人類健康的傳染病，輸血是HBV 傳播的主要途徑之一，我國是HBV 感染的高流行區，約9.7%的人群為HBV 攜帶者[1]。為防止HBV 經血液傳播，《獻血者健康檢查要求》(GB18467-2001)要求對獻血者篩查表面抗原HBsAg，但是據文獻報道，使用一步法檢測時，樣本中的抗原或抗體濃度過高會因鉤狀效應造成假陰性漏檢，從而增加輸血傳播的風險[2-3]。本研究通過比較ELISA 一步法和二步法檢測結果，探討ELISA 一步法中鉤狀效應對檢測HBsAg 結果的影響，評價ELISA 二步法檢測HBsAg的應用價值。

1 材料與方法

1.1 標本來源 1200份無償獻血初檢標本來源于無錫中心血站2011年1月至5月無償獻血者。

1.2 試劑與儀器 乙肝表面抗原-酶聯免疫吸附試驗一步法和二步法診斷試劑盒均來自北京萬泰生物藥業股份有限公司。酶免分析采用瑞士HAMILTON全自動酶免系統，TECAN全自動加樣系統。

1.3 方法

1.3.1 檢測步驟嚴格按說明書進行操作。

1.3.2 6份乙肝表面抗原-酶聯免疫吸附試驗一步法檢測結果陰性，懷疑存在鉤狀效應的標本進行1:5、1:10、1:30、1:60倍稀釋后，再采用乙肝表面抗原-酶聯免疫吸附試驗一步法進行檢測。

1.4 統計學處理 采用SSPS13.0 統計軟件進行處理，率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 不同方法檢測HbsAg 結果比較 1200份無償獻血初檢標本經二步法檢測出35份陽性，一步法僅檢測出29份陽性。陽性率分別為2.92%和2.42%,兩種方法檢測結果差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 6份疑有鉤狀效應標本一步法檢測結果 將6份標本分別進行1:5、1:10、1:30、1:60倍稀釋，檢測結果見表1。

表1 6份疑有鉤狀效應標本不同稀釋倍數下一步法檢測結果

表2 不同方法檢測6份疑有鉤狀效應標本結果

2.3 6份疑有鉤狀效應標本不同方法檢測結果見表2。

3 討論

本研究對乙肝表面抗原-酶聯免疫吸附試驗二步法檢測為陽性，而乙肝表面抗原-酶聯免疫吸附試驗一步法檢測為陰性，懷疑存在鉤狀效應的6份標本進行1:5、1:10、1:30、1:60倍稀釋，再用乙肝表面抗原-酶聯免疫吸附試驗一步法檢測，結果全部轉為陽性。說明乙肝表面抗原-酶聯免疫吸附試驗一步法檢測這6份標本時存在鉤狀效應，并且將這些標本進行適當倍數稀釋后可以消除鉤狀效應，這與相關文獻報道一致[4-5]，而乙肝表面抗原-酶聯免疫吸附試驗二步法由于待測抗原和酶標抗體是分兩步加入的，因此不存在競爭抑制，即避免了鉤狀效應。

本文結果表明，在篩查大量標本時，乙肝表面抗原-酶聯免疫吸附試驗二步法檢測結果比一步法檢測結果更可靠。一步法檢測HBsAg 時應考慮到鉤狀效應對試驗結果的影響，可以通過稀釋法或二步法完全或部分消除鉤狀效應，保證檢測結果的敏感度。另外文獻報道ELISA 孵育過程中適當振蕩也可以消除鉤狀效應[6]，這在今后的研究中有待加以補充完善。

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[2]王火生，李麗雄，林萍，等.一步法ELISA 在HIV 初篩中的應用探討[J].中國實驗診斷學,2006,10(5):501.

[3]陳仁杰,胡海燕,嚴銀燕.ELISA 一步法檢測梅毒抗體鉤狀效應三例[J].實驗與檢驗醫學,2008,26(2):215.

[4]單桂秋，李秋生，肖韶英，等.檢測乙型肝炎表面抗原的一步法試劑的鉤狀效應分析[J].中華檢驗醫學雜志,2002,25(2):107-108.

[5]楊 劍.ELISA 一步法和二步法檢測乙肝HBsAg的結果比較[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(5):569.

[6]陳兆鵬，單永海，周紀芬.減少一步法ELISA 鉤狀效應的方法探討[J].上海醫學檢驗雜志，1999,14(1):59-60.