辛蒼鼻舒膠囊質量標準研究

李羅清

辛蒼鼻舒膠囊的處方是我院五官科醫生結合多年臨床實踐研制而成的，由細辛、烏梅、川芎、蒼耳子、辛夷等中藥組方，具有疏風散寒、芳香通鼻、補肺益氣、活血消腫的功效，用于治療急慢性鼻炎、副鼻竇炎、過敏性鼻炎、鼻息肉，療效確切。為了保證該制劑療效穩定，現對其進行質量標準研究，采用薄層色譜法對方中川芎、蒼耳子、辛夷進行定性鑒別，用毛細管氣相色譜法測定揮發油中α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精的含量[1]，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent7820型氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司);HPCORE色譜工作站;氫火焰離子化檢測器;FC204型電子天平(上海天平儀器廠);HS6510D型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);RE－2000型旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)。蒼耳子對照藥材(批號為121030－200905)、辛夷對照藥材(批號為120940－201009)、川芎對照藥材(批號為120918－201009)、桉油精對照品(批號為110788－201003，純度不小于98%)均購自中國藥品生物制品檢定所;α－蒎烯對照品(批號為100807，純度不小于98%)、β－蒎烯對照品(批號為100809，純度不小于98%)均由上海友思生物技術公司提供;辛蒼鼻舒膠囊(惠州市中醫醫院，批號為 20100908，20100913，20101008);水為超純水，其他試劑分別為分析純、色譜純。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

圖1 蒼耳子薄層色譜圖

圖2 川芎薄層色譜圖

圖3 辛夷薄層色譜圖

蒼耳子:取樣品內容物6 g，加無水乙醇30 mL，超聲回流處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇3 mL使溶解，靜置，取上清液作為供試品溶液。另取蒼耳子對照藥材1 g，加無水乙醇10 mL，同法制成對照藥材溶液。再按處方配比，取除蒼耳子外的其他藥材，按供試品溶液的制備方法制得陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－醋酸乙酯－甲酸(8∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。結果供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照顯示無干擾。結果見圖1。

川芎:取樣品內容物6g，加乙醚30 mL，超聲處理20 min，濾過，揮干乙醚，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材1 g，加乙醚10 mL，同法制成對照藥材溶液。按處方比例從中除去川芎，同法制成川芎的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯(8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液在相應位置上無干擾。結果見圖2。

辛夷:取樣品內容物6 g，加甲醇30mL，超聲回流提取30 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取辛夷對照藥材1 g，加甲醇10 mL，同法制成對照藥材溶液。按處方比例從中除去辛夷，同法制成川芎的陰性樣品，同供試品制備方法制成陰性對照品溶液。吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一塊硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)－醋酸乙酯(3∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇液，于100℃烘箱內加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照顯示，無干擾。結果見圖3。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:DB－1毛細管柱(30 m ×0.25 mm，0.25μm);進樣器溫度:230℃;FID檢測器溫度:250℃;柱溫:采用程序升溫，起始溫度為50℃，保持2 min，以8℃ /min升溫至130℃，保持3 min;載氣:氮氣;流速:1.2 mL/min;進樣方式:分流進樣，分流比1 ∶10，進樣量:1μL。色譜圖見圖 4。

2.2.2 溶液制備

圖4 氣相色譜圖

精密量取環己酮1 mL(相當于含環乙酮959.850mg)，置10mL量瓶中，用色譜丙酮定容至10 mL，再取0.24 mL置100 mL容量瓶中，用色譜丙酮定容至刻度，得質量濃度為0.230 g/L環己酮內標溶液[2]。分別稱取 α － 蒎烯 20.40 mg、β － 蒎烯 20.70 mg、桉油精75.44 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用內標溶液定容至刻度，得 α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精質量濃度分別為 2.040，2.070，7.544 g/L 的對照品溶液。取本品 20 g，按 2010 年版《中國藥典(一部)》附錄ⅩD方法提取揮發油[3]，加無水硫酸鈉脫水、振搖，于冰箱中靜置過夜，脫水后，將揮發油置25 mL容量瓶中，加內標溶液2.5 mL，加正己烷定容至刻度，搖勻即得供試品溶液。取缺細辛、川芎、蒼耳子、辛夷的方中其他藥材，按供試品溶液的制備方法同法制成陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:取2.2.2項下各溶液，照擬訂色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖4。結果表明，陰性對照品溶液色譜中，在對照品溶液色譜中的吸收峰相應時間處無吸收峰，說明樣品中其他藥材對測定無干擾。

線性關系考察:分別精密量取α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精對照品溶液 1.1，1.1，2.6 mL，置同一 10 mL 量瓶中，得混合對照品溶液。分別精密吸取混合對照品溶液 0.2，0.4，0.6，0.8，1.2，1.6，2.0 mL 分別置 5 mL 量瓶中，分別加內標溶液 0.5 mL，加正己烷定容至刻度，搖勻，進樣1μL，測定。以各對照品溶液質量濃度(X，g/L)為橫坐標、以對照品與內標峰面積比值(Y)為縱坐標進行線性回歸，分別得回歸方程 Y=12.22 X －0.006(r=0.999 8)，Y=11.96X －0.006(r=0.9998)，Y=13.18X －0.004(r=0.9997)。結果表明，α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精質量濃度分別在0.008～0.091g/L(r=0.9998)，0.009 ～0.093 g/L(r=0.9998)，0.0604 ～0.604 g/L(r=0.999 7)范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液，在擬訂的色譜條件下連續進樣6次，以α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精與內標峰面積比值計算，其 RSD 分別為 1.17%(n=6)，1.13%(n=6)，1.22%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取同一份供試品溶液，于 0，2，4，6，8，12 h時進樣，以α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精與內標峰面積比值計算，其RSD 分別為 1.1%(n=6)，1.3%(n=6)，1.2%(n=6)，表明供試品溶液在12h內穩定。

重復性試驗:取同一批樣品(批號為20100913)，依法制備6份供試品溶液，在擬訂的色譜條件下測定峰面積并計算α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精平均含量，結果分別為 0.206 0，0.256 2，1.812 6 mg，RSD 分別為 1.2%，1.1% ，1.6%(n=6)，表明方法重復性較好。

加樣回收試驗[4]:精密稱取已知含量的同一批樣品(批號為 20100913，α －蒎烯含量為 0.062 6 mg/g，β －蒎烯含量為0.059 6 mg/g，桉油精含量為 0.211 5 mg/g)5 份，每份約 2.0 g，依法制備5份供試品溶液，再分別加入 α－蒎烯0.13 mg、β－蒎烯0.12 mg、桉油精0.3 mg，依法制備供試品溶液并測定，計算平均回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=5)

2.2.4 樣品含量測定

分別精密稱取3批次樣品(批號為 20100910，20100913，20100916)各5 g，依法制備供試品溶液并測定。結果3批樣品中α － 蒎烯含量分別為 0.314 0，0.313 2，0.312 5 mg;β － 蒎烯含量分別為 0.2956，0.2982，0.2997mg，桉油精的含量分別為 1.0122，1.057 6，1.102 8 mg，考慮到生產過程中的損耗和保存期等不穩定因素，故規定本品每粒含α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精分別不得少于 0.313 2，0.297 8，1.057 5 mg。

3 討論

揮發油是本品的主要有效成分，具有抗過敏活性[5]，多項研究證明揮發油可用于多種鼻炎的治療。α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精是揮發油的主要成分，測定方法比較成熟，故本次試驗以α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精為指標。筆者選用DB－1毛細管柱對這3種成分進行了分離，所得色譜圖分離效果好，峰形好，無拖尾現象。在預實驗中曾選擇了多個化合物作為內標物，包括甲苯、水楊酸甲酯、苯甲酸乙酯、異辛烷、環乙酮、苯乙酮、萘，結果采用環乙酮分離度最好，因此確定環乙酮為內標物。本試驗采用薄層色譜定性與氣相色譜檢測相結合，操作方便、實用，有利于綜合控制辛蒼鼻舒膠囊質量。

[1]楊 健，徐植靈，潘炯光，等.辛夷揮發油的成分分析[J].中國中藥雜志，1998，23(5):295 －298.

[2]曾會敏，王四旺，李曉曄，等.氣相色譜法測定青翹揮發油中β－蒎烯含量[J].藥物分析雜志，2007，27(4):572 －574.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄ⅩD.

[4]馬 玲，陳師農，張 毅，等.清熱利濕顆粒質量標準研究[J].中國藥業，2012，21(8):51－53.

[5]靖 會，佐建鋒.揮發油的藥理研究進展[J].西北藥學雜志，2005，20(2):97－98.