白血病微小殘留病的檢測方法及其意義

蔣 惠

四川省涼山州第二人民醫(yī)院檢驗科，四川 涼山 615000

微小殘留病 (MRD)指的是白血病患者經(jīng)過骨髓移植治療或者誘導(dǎo)化療獲得完全緩解，體內(nèi)殘有的少量白血病細(xì)胞的一種狀態(tài)［1］。為了能夠提前的預(yù)測白血病的復(fù)發(fā)，以及指導(dǎo)臨床用藥或骨髓抑制效果，目前出現(xiàn)了流式細(xì)胞術(shù) (FCM)檢測微小殘留病 (MRD)的試驗。本研究跟蹤40例急性白血病病人的140例骨髓標(biāo)本進(jìn)行微小殘留病的動態(tài)監(jiān)測分析，證明微小殘留病在急性白血病復(fù)發(fā)的預(yù)測中有重要的臨床指導(dǎo)意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年8月至2010年1月緩解后急性白血病患者40例，男22例，女18例，年齡27～73歲，平均年齡為50歲，共140份骨髓標(biāo)本，進(jìn)行MRD檢測。病例AL誘導(dǎo)化療采用標(biāo)準(zhǔn)的DA方案，鞏固治療采用MA、DA、IA方案［2］，臨床CR參見全國急性白細(xì)胞化療化療治療討論會標(biāo)準(zhǔn)。儀器采用美國貝克曼庫爾特公司EPICS－XL型流式細(xì)胞儀進(jìn)行相應(yīng)數(shù)據(jù)的采集，數(shù)據(jù)分析選用EXP3.2V1.2B軟件程序。

1.2 檢測方法

從誘導(dǎo)化療的第21天起，根據(jù)病情1－3個月檢測一次MRD指標(biāo)。正常對照及MRD檢測收集500000個細(xì)胞，如果在篩選時白血病細(xì)胞區(qū)域有細(xì)胞存在，則將這些細(xì)胞占骨髓總細(xì)胞數(shù)的比例作為MRD值［3］。參考值以MRD＞10－4為陽性，MRD ＜10－4為陰性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (±s)表示，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用秩和檢驗，以P＜0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 首次誘導(dǎo)化療治療后MRD水平與預(yù)后之間的關(guān)系

3年監(jiān)測結(jié)果顯示MRD＞0.01組6例復(fù)發(fā)后死亡，1例復(fù)發(fā)后緩解;MRD:0.01～10－4組2例復(fù)發(fā)，8例處于緩解狀態(tài)，MRD＜10－4組23例MRD持續(xù)表現(xiàn)為陰性，處于緩解狀態(tài)，故而可以作為預(yù)后良好的判定指標(biāo)之一。MRD＞0.01組的復(fù)發(fā)率最高，MRD＜10－4組未見復(fù)發(fā)，兩組的復(fù)發(fā)概率比較具有統(tǒng)計學(xué)差異 (P＜0.05)，MRD:0.01～10－4組與MRD＜10－4組的復(fù)發(fā)概率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 40例AL首次化療后MRD水平與復(fù)發(fā)率之間的關(guān)系

2.2 形態(tài)學(xué)完全緩解時MRD的提前判斷準(zhǔn)確性

本研究40例AL患者M(jìn)RD動態(tài)監(jiān)測3年，了解形態(tài)學(xué)呈現(xiàn)完全緩解狀態(tài)時MRD水平與治療效果之間的關(guān)系。形態(tài)學(xué)成緩解狀態(tài)時，MRD檢測出的陰性和陽性復(fù)發(fā)率有顯著差異 (P＜0.01)，能夠說明在形態(tài)學(xué)上呈現(xiàn)緩解狀態(tài)時，MRD監(jiān)測指標(biāo)呈現(xiàn)持續(xù)陰性時，預(yù)后效果很好，當(dāng)出現(xiàn)持續(xù)陽性時，可以判定為高風(fēng)險復(fù)發(fā)的可能性。見表2。

表2 MRD水平與治療效果

3 討論

MRD作為一種白血病化療或骨髓移植后的體內(nèi)殘留狀態(tài)，可以為醫(yī)師提供較好的用藥判斷以及作為白血病的復(fù)發(fā)的提前預(yù)警指標(biāo)之一［4］。由于MRD的陽性出現(xiàn)比形態(tài)學(xué)可以較早的發(fā)現(xiàn)，故而對其連續(xù)的監(jiān)測具有重要的臨床指導(dǎo)意義，也即是本研究所要探討的。

本研究中按照誘導(dǎo)化療治療后的第21天開始檢測的MRD水平，將40例AL分為低、中、高三個組，選擇的21天是骨髓的恢復(fù)期，細(xì)胞數(shù)量相對較多，MRD陽性率高。三組3年的復(fù)發(fā)率分別為0、20.0%、85.71%。其中MRD＞0.01組復(fù)發(fā)的風(fēng)險最高，可以采用化療強(qiáng)度大的治療方案，而MRD＜10－4組無一例復(fù)發(fā)，故而可以將其看成預(yù)后良好的指標(biāo)之一［5］。但是，也應(yīng)該注意，偶然一次檢測到的MRD陽性，并不能夠有效的提示復(fù)發(fā)，應(yīng)該連續(xù)監(jiān)測其水平的變化情況，通過與自身多次的MRD結(jié)果進(jìn)行比較，才能夠有效的觀察出白血病的復(fù)發(fā)趨勢。當(dāng)監(jiān)測到的MRD呈現(xiàn)持續(xù)陽性，特別是持續(xù)出現(xiàn)MRD＞0.01，觀察到的形態(tài)學(xué)分類中的原始細(xì)胞比值也逐漸增加，高度提示高復(fù)發(fā)風(fēng)險。形態(tài)學(xué)上達(dá)CR時MRD檢測為陰性的病例，無一例復(fù)發(fā)，說明緩解狀態(tài)時MRD越低預(yù)后越好，相反當(dāng)MRD呈現(xiàn)持續(xù)陽性時，復(fù)發(fā)的風(fēng)險增加，白細(xì)胞負(fù)荷增大，如本組觀察到的緩解狀態(tài)MRD陽性的17例患者中，8例在1年內(nèi)復(fù)發(fā)，所以用MRD檢測白血病復(fù)發(fā)是早于形態(tài)學(xué)檢查的。臨床上習(xí)慣以原始細(xì)胞＞5%作為白血病化療強(qiáng)度的區(qū)分標(biāo)準(zhǔn)，但是形態(tài)學(xué)上只能夠檢測到0.01水平的白血病細(xì)胞，有限的敏感程度限制了醫(yī)師的判斷，故而MRD值低的患者接收到了不必要的化療治療，而MRD值高的患者化療強(qiáng)度又有可能出現(xiàn)不足，都會不利于患者的長期生存，而本研究中采用的動態(tài)檢測方法可以解決這一問題，即出現(xiàn)MRD＜10－4的持續(xù)陰性狀態(tài)時，可以選擇強(qiáng)度較弱的化療方案，相反，持續(xù)的陽性高指標(biāo)狀態(tài)，則提示需要提高化療強(qiáng)度，可以做到有的放矢，開展相應(yīng)的個體化治療。

綜上，利用流式細(xì)胞計數(shù)動態(tài)監(jiān)測AL患者M(jìn)RD水平，對于提前判斷復(fù)發(fā)率改善治療方案，以及有效的提高患者的預(yù)后有著十分積極的總用和臨床應(yīng)用價值，值得臨床推廣。

［1］劉艷榮，王亞哲，陳姍姍，等．610例急性髓系白血病免疫表型和白血病相關(guān)免疫表型分析［J］．中華血液學(xué)雜志2009，28(11):731．

［2］肖志堅，郝玉書。急性白血病誘導(dǎo)緩解治療期間殘留白血病檢測的重要意義［J］．中華血液學(xué)雜志，2009，24(1):5．

［3］利軍，顧龍君，陳靜，等．急性淋巴細(xì)胞白血病治療中微量殘留病動態(tài)監(jiān)測及其意義［J］．中華血液學(xué)雜志，2008，27(2):120．

［4］，馮茹．白血病MRD檢測的臨床研究進(jìn)展［J］．廣東醫(yī)學(xué)，2007，28(5):837－839．

［5］劉小華，孫愛寧，吳德沛，等．流式細(xì)胞術(shù)對急性白血病微小殘留病的檢測及意義［J］．江蘇醫(yī)藥，2007，33(5):455．