白血病微小殘留病的檢測方法及其意義

蔣 惠

四川省涼山州第二人民醫院檢驗科，四川 涼山 615000

微小殘留病 (MRD)指的是白血病患者經過骨髓移植治療或者誘導化療獲得完全緩解，體內殘有的少量白血病細胞的一種狀態［1］。為了能夠提前的預測白血病的復發，以及指導臨床用藥或骨髓抑制效果，目前出現了流式細胞術 (FCM)檢測微小殘留病 (MRD)的試驗。本研究跟蹤40例急性白血病病人的140例骨髓標本進行微小殘留病的動態監測分析，證明微小殘留病在急性白血病復發的預測中有重要的臨床指導意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年8月至2010年1月緩解后急性白血病患者40例，男22例，女18例，年齡27～73歲，平均年齡為50歲，共140份骨髓標本，進行MRD檢測。病例AL誘導化療采用標準的DA方案，鞏固治療采用MA、DA、IA方案［2］，臨床CR參見全國急性白細胞化療化療治療討論會標準。儀器采用美國貝克曼庫爾特公司EPICS－XL型流式細胞儀進行相應數據的采集，數據分析選用EXP3.2V1.2B軟件程序。

1.2 檢測方法

從誘導化療的第21天起，根據病情1－3個月檢測一次MRD指標。正常對照及MRD檢測收集500000個細胞，如果在篩選時白血病細胞區域有細胞存在，則將這些細胞占骨髓總細胞數的比例作為MRD值［3］。參考值以MRD＞10－4為陽性，MRD ＜10－4為陰性。

1.3 統計學方法

所有數據均使用SPSS 13.0統計軟件進行處理分析，數據以均數±標準差 (±s)表示，計量資料采用t檢驗，計數資料采用秩和檢驗，以P＜0.05為具有統計學意義。

2 結果

2.1 首次誘導化療治療后MRD水平與預后之間的關系

3年監測結果顯示MRD＞0.01組6例復發后死亡，1例復發后緩解;MRD:0.01～10－4組2例復發，8例處于緩解狀態，MRD＜10－4組23例MRD持續表現為陰性，處于緩解狀態，故而可以作為預后良好的判定指標之一。MRD＞0.01組的復發率最高，MRD＜10－4組未見復發，兩組的復發概率比較具有統計學差異 (P＜0.05)，MRD:0.01～10－4組與MRD＜10－4組的復發概率差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 40例AL首次化療后MRD水平與復發率之間的關系

2.2 形態學完全緩解時MRD的提前判斷準確性

本研究40例AL患者MRD動態監測3年，了解形態學呈現完全緩解狀態時MRD水平與治療效果之間的關系。形態學成緩解狀態時，MRD檢測出的陰性和陽性復發率有顯著差異 (P＜0.01)，能夠說明在形態學上呈現緩解狀態時，MRD監測指標呈現持續陰性時，預后效果很好，當出現持續陽性時，可以判定為高風險復發的可能性。見表2。

表2 MRD水平與治療效果

3 討論

MRD作為一種白血病化療或骨髓移植后的體內殘留狀態，可以為醫師提供較好的用藥判斷以及作為白血病的復發的提前預警指標之一［4］。由于MRD的陽性出現比形態學可以較早的發現，故而對其連續的監測具有重要的臨床指導意義，也即是本研究所要探討的。

本研究中按照誘導化療治療后的第21天開始檢測的MRD水平，將40例AL分為低、中、高三個組，選擇的21天是骨髓的恢復期，細胞數量相對較多，MRD陽性率高。三組3年的復發率分別為0、20.0%、85.71%。其中MRD＞0.01組復發的風險最高，可以采用化療強度大的治療方案，而MRD＜10－4組無一例復發，故而可以將其看成預后良好的指標之一［5］。但是，也應該注意，偶然一次檢測到的MRD陽性，并不能夠有效的提示復發，應該連續監測其水平的變化情況，通過與自身多次的MRD結果進行比較，才能夠有效的觀察出白血病的復發趨勢。當監測到的MRD呈現持續陽性，特別是持續出現MRD＞0.01，觀察到的形態學分類中的原始細胞比值也逐漸增加，高度提示高復發風險。形態學上達CR時MRD檢測為陰性的病例，無一例復發，說明緩解狀態時MRD越低預后越好，相反當MRD呈現持續陽性時，復發的風險增加，白細胞負荷增大，如本組觀察到的緩解狀態MRD陽性的17例患者中，8例在1年內復發，所以用MRD檢測白血病復發是早于形態學檢查的。臨床上習慣以原始細胞＞5%作為白血病化療強度的區分標準，但是形態學上只能夠檢測到0.01水平的白血病細胞，有限的敏感程度限制了醫師的判斷，故而MRD值低的患者接收到了不必要的化療治療，而MRD值高的患者化療強度又有可能出現不足，都會不利于患者的長期生存，而本研究中采用的動態檢測方法可以解決這一問題，即出現MRD＜10－4的持續陰性狀態時，可以選擇強度較弱的化療方案，相反，持續的陽性高指標狀態，則提示需要提高化療強度，可以做到有的放矢，開展相應的個體化治療。

綜上，利用流式細胞計數動態監測AL患者MRD水平，對于提前判斷復發率改善治療方案，以及有效的提高患者的預后有著十分積極的總用和臨床應用價值，值得臨床推廣。

［1］劉艷榮，王亞哲，陳姍姍，等．610例急性髓系白血病免疫表型和白血病相關免疫表型分析［J］．中華血液學雜志2009，28(11):731．

［2］肖志堅，郝玉書。急性白血病誘導緩解治療期間殘留白血病檢測的重要意義［J］．中華血液學雜志，2009，24(1):5．

［3］利軍，顧龍君，陳靜，等．急性淋巴細胞白血病治療中微量殘留病動態監測及其意義［J］．中華血液學雜志，2008，27(2):120．

［4］，馮茹．白血病MRD檢測的臨床研究進展［J］．廣東醫學，2007，28(5):837－839．

［5］劉小華，孫愛寧，吳德沛，等．流式細胞術對急性白血病微小殘留病的檢測及意義［J］．江蘇醫藥，2007，33(5):455．