高效液相色譜法測定活血定痛合劑中阿魏酸的含量

李 洋

南京中醫藥大學基礎醫學院，江蘇 南京 210046

高效液相色譜法測定活血定痛合劑中阿魏酸的含量

李 洋

南京中醫藥大學基礎醫學院，江蘇 南京 210046

目的:研究活血定痛合劑中阿魏酸的含量測定方法。方法:色譜柱:HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流動相:甲醇－0.6%冰醋酸 (45:55);檢測波長為UV320nm;流速為0.5ml/min;結果:該方法的線性范圍為0.513～2.565μg(r=0.9999)，平均回收率為98.86%。結論:本法簡便、準確、可行，靈敏度高，重現性好，可用于活血定痛合劑的成分含量測定。

色譜法;高效液相;活血定痛合劑;阿魏酸;含量

活血定痛合劑由川芎、當歸、赤芍、沒藥、紅花、桃仁、莪術、延胡索、續斷、青木香等中藥組成，具有治療風濕痹痛、筋骨疼痛、跌打損傷，具有良好的臨床效果［1］。為了保證臨床用藥效果，控制活血定痛合劑的質量，本實驗建立了高效液相色譜法測定活血定痛合劑中阿魏酸含量的方法。經方法學考察證實該方法靈敏度高，重現性好，結果滿意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀系統包括高效液相色譜儀 (Waters 515);P200高壓泵;Waters 2487紫外檢測器;色譜柱Hanbang C18(200*4.6mm 5μm);數據采集及處理采用HS色譜數據工作站V4.0+(杭州英譜科技)。

1.2 試藥

阿魏酸對照品，中國藥品生物制品檢定所 (批號:0762－200603);活血定痛合劑，常熟市中醫院制劑室提供(批號:20100708，20100821，20100923，20101122); 其他試劑均為分析純。

表1 活血定痛合劑加樣回收率試驗結果

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗［2］

色譜柱:HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流動相:甲醇－0.6%冰醋酸 (45:55);使用前以0.45μM微孔濾膜減壓過濾，檢測波長為UV320nm;流速為0.5ml/min。此條件下分離度＞2.0，理論塔板數按阿魏酸峰計算應不低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對照品10.26mg，置100 mL量瓶中，加流動相超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.1026mg/ml對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密吸取本品10 mL(約1/20瓶量)置100 mL容量瓶中，加流動相40mL，密塞，搖勻，超聲處理 (功率300W，頻率100Hz)60分鐘，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μM微孔濾膜減壓過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關系

取對照品溶液，分別進樣5、10、15、20、25μL，即相當于阿魏酸0.513，1.026，1.539，2.052，2.565μg的對照品溶液，測定峰面積，以阿魏酸質量為橫坐標、峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程以及線性范圍，分別為:Y=175785.2858X+373.7548，r=0.9999，阿魏酸進樣量在0.513～2.565μg范圍內峰面積與進樣量呈良好線性。

2.5 加樣回收率

精密吸取已知含量的樣品溶液5份，分別置50mL量瓶中，每份精密加入一定量對照品溶液，然后用流動相稀釋到刻度，照含量測定方法操作，計算回收率。結果見表1。

2.6 進樣精密度試驗

在上述色譜條件下，取阿魏酸對照品溶液重復進樣8次20μL，記錄峰面積，RSD為1.08%。

2.7 重復性試驗

精密稱取同一批號的樣品 (批號:20100708)按照樣品測定的方法重復操作8次，測得阿魏酸平均含量和RSD，結果表明，重復性試驗RSD為1.31% ，表明本法重現性很好。

2.8 穩定性試驗

取樣品 (批號:20100708)新配的供試品溶液分別在0、2、4、8、16h進樣20μL，測定其中阿魏酸的峰面積，結果RSD為1.16%，表明供試品溶液在16 h穩定。

2.9 樣品測定

取4批樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測定含量，分別進樣10μL，記錄色譜圖，按外標法計算樣品中阿魏酸的含量。結果見表2。

表2 HPLC測定活血定痛合劑中阿魏酸的含量結果

3 討論

3.1 根據所測四批樣品的含量結果，活血定痛合劑中阿魏酸的平均含量為28.75mg/瓶，因此可規定活血定痛合劑中阿魏酸 (C19H25O3)不得少于20mg/瓶。

3.2 提取方法的選擇 本實驗曾用幾種方法處理樣品，結果以本文擬訂的方法結果最好，且操作簡便，故選用超聲處理 (功率300W，頻率100Hz)60分鐘。

3.3 檢測波長的選擇 阿魏酸的分子光譜僅在320nm處有一中等強度的吸收峰，故選擇320nm為檢測波長。

［1］金鳳珠.活血定痛合劑的研制及臨床療效觀察［J］.吉林中醫藥，2001，(2):53.

［2］歐陽強，劉義保，雷茂華.靖巔飲口服液中阿魏酸的含量測定［J］.中國新藥與臨床藥理，1999，10(5):293－294.

R284.1

A

1007－8517(2012)02－0041－01

2011.11.27)

李洋 (1972－)，男，壯族，江蘇省南京市人，南京中醫藥大學基礎醫學院2007級博士研究生。E－mail:nzyylx@163.com。